专利名称：一种鉴定暗黑鳃金龟性信息素的方法
技术领域：
本发明设计利用气质联用技术，摸索分离鉴定条件分离鉴定暗黑鳃金 龟性信息素的方法。
背景技术：
蛴螬是一种地下害虫，对多种草评、作物和果树造成毁灭性危害。暗黑鳃
金龟是危害花生、地瓜、玉米等作物的优势种，占地下害虫70%以上。近年来， 遭受暗黑鳃金龟危害的花生一般减产20%，严重的减产60% ~70%，甚至绝收， 同时花生的品质也明显下降，秕仁、空壳大量增加。暗黑鳃金龟已成为制约花 生生产的最主要因素，也是目前广大农民种植花生最忧心的问题。据我国山东、 河南、安徽、河北、辽宁等省连续五年的跟踪调查，每年因暗黑鳃金龟危害造 成的花生产量损失都在1.5亿公斤以上。防治鲚螬已成为我国花生生产迫在眉 睫的重大课题，防治形势刻不容缓！
地下害虫地上治，对于在地下完成幼虫生活史的暗黑鳃金龟而言是最安全 的防治手段。土壤施药不仅对药效的残效期和剂型有很高的要求，而且对花生 和土壤的农药残留影响比地上害虫类要高的多，因此利用暗黑鳃金龟成虫晚上 出土交配、取食的习性，对成虫进行诱杀，每引诱一个成虫相当于杀死几十只 幼虫，此方法可达到安全高效的目的。
利用性诱剂诱杀害虫是国外防治林木害虫方面很成熟的手段之一，但在我 国尚未完全推广应用。本研究从雌性暗黑鳃金龟性腺体中提取性信息素成分， 并对其进行组分和含量进行鉴定，以达到后续人工合成性信息素并在田间应用 的目的。
曰本国立蚕桑研究所曾分离鉴定了日本暗黑鳃金龟的性信息素，先后报道
了 L-Isoleucine Methyl ester和(-)-(R) -Linalool为其信息素的组分。本研究
以青岛本地的暗黑鳃金龟为研究对象，利用气质联用方法进行提取物质分析， 除已报道物质外，鉴定出另两种新物质。
发明内容
本发明的目的是提供 一种鉴定暗黑鳃金龟性信息素的方法，并对其进行组 分和含量鉴定，以达到后续人工合成性信息素。
为实现上述目的，本发明釆用下列步骤
1、 腺体收集
摘取伸出性腺体的暗黑鳃金龟雌虫，用灭菌眼科剪剪下，迅速置于盛有二 氯甲烷的气相进样瓶中，整个过程要在30min内完成。将进样瓶用封口膜封好 置于4。C冰箱浸提2h,将样品下清液用0.22um有机滤膜过滤，上样。
2、 气相色谱分析
(1 )仪器Agilent 6890N气相色谱仪
(2) 色谱柱HP-l, 30mx0.32mmlDx0.25)Lim弹性石英毛细管柱；
(3) 气相工作条件 检测器氢火焰离子化检测器 燃烧气氢气，流量35ml/min;
助燃气干燥空气，流量400ml/min; 载气氮气，流量2.5mL/min; 进样口温度250°C; 检测器温度250°C;
色谱柱温程序5(TC初温，保留1分钟，以2。C/min升至9(TC,再以10°C /min升至23(TC,保留10min;
进样方式不分流进样，进样量为1^1。 3、气相色谱质谱分析 (1)仪器Agilent 6890N-5973N气相色谱质谱仪
(2) 色谱柱HP-5MS, 30mx0.25mmlDx0.25(im弹性石英毛细管柱；
(3) 气相色谱质谱工作条件
a. 气谱条件 载气高纯氦气；
流速lml/min,恒流方式； 气化室温度250°C; 传输线温度280°C;
色谱柱温程序5(TC初温，保留1分钟，以2°C/min升至90°C,再以 1(TC/min升至230°C，保留10min;
进样方式不分流进样，进样量为lpl。
b. 质谱条件
电离源电子轰击离子源模式； 扫描范围45 500amu; 离子源温度230°C; 四极杆温度150°C; 扫描方式SCAN。 4、结果分析
保留时间为12.57-13min之间鉴定物质为L-Isoleucine Methyl Ester和 LD-Norleucine Methyl Ester两种(结构见图3-A,B )。
保留时间为15.92min时鉴定物质为(-)-(R) -Linalool (结构见图3-C )。
保留时间为15.339min时鉴定物质为Cydohexane Carboxylicaid l-amino(结 构见图3-D)。
三者各占总成分的62.275%、 26.273%、 11.453%。
这是国内首次对暗黑鳃金龟性信息素组分鉴定，其中LD- Norleucine Methyl Ester和Cydohexane Carboxylicaid 1-amino为新发现物质。
图l为暗黑鳃金龟雌虫性信息素气谱分离图2为暗黑鳃金龟雌虫性信息素总离子流图(TIC );
图3为暗黑鳃金龟雌虫信息素质谱图。
具体实施例方式
下面结合具体实例对本发明作进 一 步详细的描述。 腺体收集
摘取25头伸出性腺体的暗黑鳃金龟雌虫，用灭菌眼科剪剪下，迅速置于盛 有lml二氯甲烷的气相进样瓶中，整个过程要在30min内完成。将进样瓶用封 口膜封好置于4。C冰箱浸提2h后，将样品下清液用0.22um有机滤膜过滤，l)iL 上样。
气相色谱分析
(1 )仪器Agilent 6890N气相色谱仪
(2) 色谱柱:HP-1， 30mx0.32mmIDx0.25|Lim弹性石英毛细管柱;
(3) 气相工作条件 检测器氢火焰离子化检测器 燃烧气氢气，流量35ml/min; 助燃气千燥空气，流量400ml/min; 载气氮气，流量2.5mL/min; 进样口温度250°C; 检测器温度250°C;
色谱柱温程序50。C初温，保留1分钟，以2。C/min升至9(TC，再以10°C /min升至230。C，保留10min;
进样方式不分流进样，进样量为1ul。 气相色谱质谱分析
(1)仪器Agilent 6890N-5973N气相色谱质谱仪
(2) 色谱柱HP-5MS， 30mxO.25mmIDxO.25nm弹性石英毛细管柱；
(3) 气相色谱质谱工作条件
a. 气相条件 载气高纯氦气；
流速lml/min,恒流方式； 气化室温度250°C; 传输线温度280°C;
色谱柱温程序50。C初温，保留1分钟，以2°C/min升至卯。C,再以 10。C/min升至230°C,保留10min;
进样方式不分流进样，进样量为1^1。
b. 质谱条件
电离源电子轰击离子源模式； 扫描范围45 500amu; 离子源温度230°C; 四极杆温度150°C; 扫描方式SCAN。 结果为
保留时间为12.57min和13min时，鉴定物质为L-Isoleucine Methyl Ester 和LD-Norleucine Methyl Ester两种(结构见图3-A，B )。
保留时间为15.92min时，鉴定物质为(-)-(R)-Linalool (结构见图3-C )。
保留时间为15.339min时，鉴定物质为Cyclohexane Carboxylicaid l-amino(结构见图3-D)。
三者各占总成分的62.275%、 26.273%、 11.453%。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。
权利要求
1.一种鉴定暗黑鳃金龟性信息素的方法，包括下列步骤(1)腺体收集；(2)气相色谱分析；(3)气相色谱质谱分析；(4)结果分析。
2、 如权利要求l所述的鉴定暗黑鳃金龟性信息素的方法，其特征在于， 步骤(l)是摘取伸出性腺体的暗黑鳃金龟雌虫，用灭菌眼科剪剪下，迅速置于 盛有二氯甲烷的气相进样瓶中，整个过程要在30min内完成。将进样瓶用封口 膜封好置于4。C冰箱浸提2h后，将样品下清液用0.22um有机滤膜过滤，上样。
3、 如权利要求l所述的鉴定暗黑鳃金龟性信息素的方法，其特征在于， 气相色谱分析包括(1 )仪器Agilent 6890N气相色谱仪；(2) 色谱柱:HP-l, 30mx0.32mmlDx0.25iLim弹性石英毛细管柱;(3) 气相工作条件 检测器氢火焰离子化检测器 燃烧气氢气，流量35ml/min; 助燃气千燥空气，流量400ml/min; 载气氮气，流量2.5mL/min; 进样口温度250°C; 检测器温度250°C;色谱柱温程序50。C初温，保留l分钟，以2。C/min升至90。C，再以10°C /min升至230。C,保留10min;进样方式不分流进样，进样量为1^1。
4、 如权利要求l所述的鉴定暗黑鳃金龟性信息素的方法，其特征在于， 气相色谱质谱分析包括(1) 仪器Agilent 6890N-5973N气相色谱质谱仪(2) 色谱柱HP-5MS, 30mxO.25mmIDxO.25pm弹性石英毛细管柱；(3) 气相色谱质谱工作条件a. 气谱条件 载气高纯氦气；流速lml/min，恒流方式； 气化室温度250°C; 传输线温度280°C;色谱柱温程序5(TC初温，保留1分钟，以2°C/min升至90°C，再以 10。C/min升至230°C,保留10min;进样方式不分流进样，进样量为1^1。b. 质谱条件电离源电子轰击离子源模式； 扫描范围45~500amu; 离子源温度230°C; 四极杆温度150°C; 扫描方式SCAN。
5、 如权利要求l所述的鉴定暗黑鳃金龟性信息素的方法，其特征在于， 保留时间为12.57-13min之间鉴定物质为L國Isoleucine Methyl Ester和 LD-Norleucine Methyl Ester两种。
6、 如权利要求l所述的鉴定暗黑鳃金龟性信息素的方法，其特征在于保 留时间为15.92min时鉴定物质为(-)-(R) -Linalool。
7、 如权利要求l所述的鉴定暗黑鳃金龟性信息素的方法，其特征在于保 留时间为15.339min时鉴定物质为Cyclohexane Carboxylicaid 1-amino。
8、 如权利要求l所述的鉴定暗黑鳃金龟性信息素的方法，其特征在于前 三组分各占总成分的62.275%、 26.273%、 11.453%。
全文摘要
本发明公开了一种鉴定暗黑鳃金龟性信息素的方法，摘取交配前夕的暗黑鳃金龟的雌性性腺体，从雌性暗黑鳃金龟性腺体中提取性信息素成分，并对其进行组分和含量进行鉴定，以达到后续人工合成性信息素并在田间应用的目的。
文档编号G01N30/02GK101368936SQ200810211798
公开日2009年2月18日 申请日期2008年9月25日 优先权日2008年9月25日
发明者周丽梅, 曲明静, 杨庆利, 赵志强, 倩 鞠, 彬 韩 申请人:山东省花生研究所