专利名称：一种妇科调经用中药制剂的质量控制方法
一种妇科调经用中药制剂的质量控制方法技术领域
本发明属于中药技术领域，涉及中药的检测方法，尤其是一种妇科调经用中药制 剂湿消丸的质量控制方法。
背景技术：
湿消丸由熟地黄、地黄、北沙参、白术、白芍、乌梅、木瓜和香附等八味中药组成。制 备方法为以上八味，粉碎成细粉，混勻，过筛，每IOOg粉末加炼蜜100 120g制成大蜜丸， 即得。湿消丸具有滋阴补肾，健脾益胃，利湿消肿之功效。常用于治疗脾肾阴虚，湿盛所致 单纯性肥胖，浮肿，及月经不调等症，是妇科调经的常用中药制剂。
湿消丸由天津中医学院第一附属医院中医科专家运用传统中医药理论及多年临 床经验结合辨证施治研制而成的。本品经天津市卫生局1984年批复同意生产，《天津市药 品标准》1990年版，《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第二十册》(标准号 WS3-B-4024-98)中予以收载。湿消丸是天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂生产 的独家品种。
随着经济的不断发展，中药受到世人更多的了解与瞩目。中药是在传统的中医理 论指导下发展起来的，原料多是草根树皮、矿物、动物等天然材料，来源广泛，成分复杂。这 就决定了中药安全性标准的特殊性，安全性标准问题也同样成为中药进入国际市场的一个 难题。目前国际上虽然尚无植物类中药的国际标准，但是美国、欧盟及我国传统出口中药的 东南亚地区均有提高中药标准的趋势。在此情况下，更要提出适合我国产品质量的标准以 适应国际标准，而且中药在中国有数千年的使用历史，世界各国在制订相应的植物药产品 质量标准中也多参考我国的中药标准。完善、提高中药的质量标准更加成为了迫在眉睫的 事情了。
薄层色谱法(TLC)鉴别中对照药材的确定越来越多的运用在中药制剂中，由于对 照品的限制或选择对照品不够专属等原因，常选用对照药材作为TLC鉴别的色谱对照。
高效液相色谱(HPLC)具有快速、灵敏、分离效能高等优点，在中药鉴定中，采用 HPLC法分离特征成分后，用紫外检测器(UV)或质谱检测器(MQ进行结构分析和定量分析， 是全面评价质量的有效方法。中国药典(2000年版)一部中就有59种药材和50种中成药 采用HPLC法进行鉴定，而且还不断有人用HPLC法对其它的中药进行鉴定和成分分析研究。
湿消丸原有质量标准表述“为取本品置显微镜下观察含糊化淀粉粒薄壁细胞， 单个散离或破碎，呈类圆形、椭圆形或不规则形，充满糊化的淀粉粒，壁有时可察见，草酸钙 簇晶直径11 M 35 μ m，偶见方晶。非腺毛大多为单细胞，平直或弯曲成镰刀状，淡黄 棕色，胞腔内常充满暗棕色物”。对于该品种的质量控制方法而言，显然十分的模糊和不足。 原有标准中仅有乌梅及白芍等部分中药显微鉴别特征的描述，对于质量控制标准而言，远 远不够，应该添加对照药材和对照品作为薄层色谱鉴别检验方法的依据。没有特征药材的 鉴别和反映药物内在质量的指标成分的含量测定项，无法在生产中有效的保证产品的内在 质量，药效也得不到保证。发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种能够定性并且定量妇科调 经用中药制剂湿消丸的质量控制方法，本方法具有检测手段简单、检测结果准确的特点。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的
一种妇科调经用中药制剂湿消丸的质量控制方法，步骤是
(1)性状鉴别;
(2)鉴别木瓜采用薄层色谱法以木瓜为对照药材，鉴别湿消丸处方中是否含有 木瓜成分；
(3)鉴别乌梅采用薄层色谱法以乌梅为对照药材，鉴别湿消丸处方中是否含有 乌梅成分；
(4)鉴别白芍采用薄层色谱法以芍药苷为对照品，鉴别湿消丸处方中是否含有 白芍成分；
(5)测定白芍采用高效液相法以芍药苷为对照品，测定湿消丸处方中的白芍含量。
而且，所述性状鉴别是
①性状描述为黑褐色的大蜜丸，味甜、微酸；
②置显微镜下观察薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物，分 泌细胞类圆形，含淡黄棕色至红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列；纤维束红棕色，纤 维细，直径8 10 μ m。
而且，所述薄层色谱法鉴别木瓜的方法是
①将湿消丸样品制成供试品溶液；
②取木瓜为对照药材制成对照药材溶液；
③阴性样品溶液的制备；
④薄层色谱检测取①、②、③溶液于同一硅胶薄层板上，以体积比甲苯乙酸乙 酯甲酸=5 1 0.1为展开剂展开，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；
⑤结果分析将薄层板置紫外光灯365nm波长下检视，确定供试样品中是否含有 木瓜成分。
而且，所述薄层色谱法鉴别乌梅的方法是
①取木瓜鉴别剩下的药渣制成供试品溶液；
②取乌梅对照药材制成对照药材溶液；
③阴性样品溶液的制备；
④薄层色谱检测取①、②、③溶液于同一硅胶薄层板上，以体积比甲苯乙酸乙 酯甲酸=5 3 1为展开剂展开，喷以5%香草醛硫酸溶液溶液，加热至斑点显色清晰；
⑤结果分析分析硅胶薄层板上相同颜色的斑点的位置，确定供试样品中是否含 有乌梅成分。
而且，所述薄层色谱法鉴别白芍的方法是
①取乌梅鉴别剩下的药渣制成供试品溶液；
②取芍药苷对照品，加乙醇制成对照品溶液；
③阴性样品溶液的制备；
④薄层色谱检测取①、②、③溶液于同一硅胶薄层板上，以体积比三氯甲烷乙 酸乙酯甲醇甲酸=40 5 10 0.2为展开剂展开，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热 至斑点显色清晰；
⑤结果分析分析硅胶薄层板上相同颜色的斑点的位置，确定供试样品中是否含 有白芍成分。
而且，所述高效液相法测定白芍的方法是
①液相色谱条件的设定；
②标准品溶液的制备；
③供试品溶液的制备；
④阴性样品溶液的制备；
⑤测定白芍色谱⑥结果分析根据色谱图可推算得到湿消丸中白芍的含量。
本发明的优点和积极效果是
1、本发明的检测方法在《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册原标准的基础 上，对性状和显微鉴别进行了修订，增加了对照药材和对照品的薄层鉴别检验方法；并制定 了高效液相色谱法进行含量测定的方法。
2、本发明在湿消丸的检测方法中增加对照药材、对照品的薄层色谱法鉴别以及高 效液相鉴别等检验项目，更有利于中药制剂的质量控制，从而更加准确地检验出假药和劣 药，对于中药现代化和中药走出国门意义重大。
3、本发明对湿消丸的质量标准进行了提高、完善，在原标准基础上，修订了湿消丸 的性状和显微鉴别特征，增加了处方中木瓜、乌梅及白芍的薄层鉴别检验方法，以芍药苷为 对照品，制定了采用高效液相色谱法测定处方中自芍的含量；修订后的质量标准，提高了湿 消丸质量标准的可控性，进一步确保产品内在质量和疗效，而且对促进产品销售、增加产品 的市场竞争力、保证患者用药安全意义重大。
图1和图2分别为本发明供试样品中木瓜在日光及波长为365nm紫外光灯下的检 视图，其中，图1和图2中条带从左至右依次为1.供试品溶液1(批号200601),2.供试品 溶液2 (批号20060 ，3.供试品溶液3 (批号20060 ，4.木瓜对照药材，5.木瓜阴性样品O
图3为本发明供试样品中乌梅在日光下的检视图；其中条带从左至右依次为 1.供试品溶液1 (批号200601)，2.供试品溶液2 (批号20060 ，3.供试品溶液3 (批号 200603),4.乌梅对照药材，5.乌梅阴性样品。
图4为本发明供试样品中白芍在日光下的检视图，其中条带从左至右依次为 1.供试品溶液1 (批号200601)，2.供试品溶液2 (批号20060 ，3.供试品溶液3 (批号 200603),4.芍药苷对照品(中检所)，5.白芍阴性样品。
图5为本发明芍药苷对照品(中检所)的液相色谱图6为本发明供试样品的液相色谱图7为本发明白芍阴性样品的液色相图谱。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的， 不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
一种妇科调经的中药制剂湿消丸的质量控制方法，其方法的步骤是
(1)性状鉴别
性状描述为湿消丸为黑褐色的大蜜丸；味甜、微酸。置显微镜下观察薄壁组织 灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物(熟地黄)。分泌细胞类圆形，含淡黄棕色至 红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列；纤维束红棕色，纤维细，直径8 ΙΟμπι(香附)。
(2)薄层色谱法鉴别木瓜采用薄层色谱法，以木瓜为对照药材，鉴别湿消丸处方 中木瓜。
①供试品溶液的制备据文献报道，木瓜中含有酸性皂苷类，如熊果酸等，故试验 中采用乙醚作为提取溶剂进行了试验。取湿消丸1丸，剪碎，加硅藻土 2. 5g，研勻，加乙醚超 声处理两次，每次30ml，每次10分钟，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作 为供试品溶液。
②对照药材溶液的制备取木瓜对照药材lg，加乙醚超声处理两次，同法制成对 照药材溶液。
③阴性样品溶液的制备按处方配比，取处方药材4g(木瓜除外)，加炼蜜适量，加 乙醚30ml，按照《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册原标准上制法制备，作为阴性对 照溶液。
④薄层检测照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取供 试品溶液及阴性样品溶液各10 μ 1、对照药材溶液6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 甲苯乙酸乙酯甲酸=5 1 0. 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶 液，加热至斑点显色清晰。
⑤结果分析不同生产批次湿消丸供试品的检测结果见图1及图2。日光下，供试 品色谱中，在与木瓜对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰；置 紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与木瓜对照药材色谱相应的位置上，显相同颜 色的荧光斑点，阴性样品亦无干扰，表明供试样品含有木瓜成分。
(3)薄层色谱法鉴别乌梅采用薄层色谱法，以乌梅为对照药材，鉴别湿消丸处方 中乌梅。
①供试品溶液的制备取木瓜鉴别项下乙醚提取后的药渣，加乙酸乙酯40ml，加 热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。
②对照药材溶液的制备另取乌梅对照药材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成对照 药材溶液。
③阴性样品溶液的制备按处方配比，取处方药材4g(乌梅除外)，加炼蜜适量，加 乙醚30ml，再按照《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册原标准上制法制备，作为阴性 样品溶液。
④薄层检测照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上7述三种溶液各6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=5 :3:1 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰
⑤结果分析不同生产批次湿消丸供试品的检测结果见图3。供试品色谱中，在与 乌梅对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。表明供试样品含有乌 梅成分。
(4)薄层色谱法鉴别白芍采用薄层色谱法以芍药苷为对照品，鉴别湿消丸处方 中的白芍。
①供试品溶液的制备取乌梅鉴别项下的药渣，加水饱和的正丁醇40ml，超声处 理60分钟，滤过，正丁醇液蒸干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作 为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备按处方配比，取处方药材4g(白芍除外)，加炼蜜适量，按 照《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册原标准上制法制备，作为阴性样品溶液。
④薄层检测照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验吸取上述 三种溶液各6μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸= 40 5 10 0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色 清晰。
⑤结果分析不同生产批次湿消丸供试品的检测结果见图4。供试品色谱中，在与 芍药苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。表明供试品含有白 芍成分；
(5)高效液相法测定白芍采用高效液相法测定湿消丸处方中的白芍，以芍药苷 为对照品。
①液相色谱条件的设定参照《中国药典》2005年版一部有关测定方法，确定检测 波长为230nm。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以四氢呋喃磷酸盐缓冲液〔l/15mol/ L磷酸二氢钠-l/15mol/L磷酸氢二钠溶液(5 1) ) = 15 85为流动相；理论板数按芍 药苷峰计算应不低于3000。
②标准品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每Iml含 0. Img的溶液，即得。液相色谱检测结果见图5;
③供试品溶液的制备取湿消丸适量，剪碎，取2g，精密称定，精密加入稀乙醇 50ml，称定重量，超声处理(功率^OW,频率33kHz) 60分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补 足减失的重量，摇勻，离心(转速为每分钟3000转)5分钟，取上清液，用0. 45 μ m微孔滤膜 过滤，取续滤液，即得。液相色谱检测结果见图6。
④阴性样品溶液的制备按处方取除白芍的其他各味，按照《卫生部药品标准》中 药成方制剂第二十册原标准上制法制得样品，再按上述供试品溶液制备方法，制得阴性样 品溶液。再按同样的色谱条件分析，阴性样品在芍药苷相应的保留时间处未见色谱峰。结 果表明，阴性样品对检测无干扰。液相色谱检测结果见图7。
⑤测定分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶各10 μ 1，注入液相 色谱仪，测定，即得。
⑥结果分析由保留时间可以确定供试样品中含有芍药苷。参照《中国药典》2005年版一部白芍项下含量限度计算，每g样品含芍药苷应为0. 97mg。根据色谱图可推算得到 湿消丸中芍药苷的含量，该含量与国家药典进行比较，即可判断供试样品的白芍含量是否 合格，进而判断不同厂家、不同批次的湿消丸的品质。本实验样品湿消丸处方中，白芍占处 方总量的12. 74%，制剂中按每IOOg生粉加炼蜜IlOg计算，每g样品含白芍应为60. 7mg, 鉴于湿消丸为生粉入药，按照国家药典委员会要求，生粉入药按80%转移率计算，为每g含 白芍以芍药苷(C23H28O11)计，为0. 78mg，若按每丸含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，应不得少于 7. Omg0
权利要求
1.一种妇科调经用中药制剂湿消丸的质量控制方法，其特征在于方法的步骤是(1)性状鉴别；(2)鉴别木瓜采用薄层色谱法以木瓜为对照药材，鉴别湿消丸处方中是否含有木瓜 成分；(3)鉴别乌梅采用薄层色谱法以乌梅为对照药材，鉴别湿消丸处方中是否含有乌梅 成分；(4)鉴别白芍采用薄层色谱法以芍药苷为对照品，鉴别湿消丸处方中是否含有白芍 成分；(5)测定白芍采用高效液相法以芍药苷为对照品，测定湿消丸处方中的白芍含量。
2.根据权利要求1所述的一种妇科调经用中药制剂湿消丸的质量控制方法，其特征在 于所述性状鉴别是①性状描述为黑褐色的大蜜丸，味甜、微酸；②置显微镜下观察薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物，分泌细 胞类圆形，含淡黄棕色至红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列；纤维束红棕色，纤维细， 直径8 10 μ m。
3.根据权利要求1所述的一种妇科调经用中药制剂湿消丸的质量控制方法，其特征在 于所述薄层色谱法鉴别木瓜的方法是①将湿消丸样品制成供试品溶液；②取木瓜为对照药材制成对照药材溶液；③阴性样品溶液的制备；④薄层色谱检测取①、②、③溶液于同一硅胶薄层板上，以体积比甲苯乙酸乙酯 甲酸=5 1 0.1为展开剂展开，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；⑤结果分析将薄层板置紫外光灯365nm波长下检视，确定供试样品中是否含有木瓜 成分。
4.根据权利要求1所述的一种妇科调经用中药制剂湿消丸的质量控制方法，其特征在 于所述薄层色谱法鉴别乌梅的方法是①取木瓜鉴别剩下的药渣制成供试品溶液；②取乌梅对照药材制成对照药材溶液；③阴性样品溶液的制备；④薄层色谱检测取①、②、③溶液于同一硅胶薄层板上，以体积比甲苯乙酸乙酯 甲酸=5 3 1为展开剂展开，喷以5%香草醛硫酸溶液溶液，加热至斑点显色清晰；⑤结果分析分析硅胶薄层板上相同颜色的斑点的位置，确定供试样品中是否含有乌 梅成分。
5.根据权利要求1所述的一种妇科调经用中药制剂湿消丸的质量控制方法，其特征在 于所述薄层色谱法鉴别白芍的方法是①取乌梅鉴别剩下的药渣制成供试品溶液；②取芍药苷对照品，加乙醇制成对照品溶液；③阴性样品溶液的制备；④薄层色谱检测取①、②、③溶液于同一硅胶薄层板上，以体积比三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=40 5 10 0.2为展开剂展开，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑 点显色清晰；⑤结果分析分析硅胶薄层板上相同颜色的斑点的位置，确定供试样品中是否含有白 芍成分。
6.根据权利要求1所述的一种妇科调经用中药制剂湿消丸的质量控制方法，其特征在 于所述高效液相法测定白芍的方法是①液相色谱条件的设定；②标准品溶液的制备；③供试品溶液的制备；④阴性样品溶液的制备；⑤测定白芍色谱图；⑥结果分析根据色谱图可推算得到湿消丸中白芍的含量。
全文摘要
本发明涉及一种妇科调经用中药制剂湿消丸的质量控制方法，步骤是(1)性状鉴别；(2)薄层色谱法鉴别木瓜；(3)薄层色谱法鉴别乌梅；(4)薄层色谱法鉴别白芍；(5)高效液相法测定白芍。本发明对湿消丸的质量标准进行了提高、完善，在原标准基础上，修订了湿消丸的性状和显微鉴别特征，增加了处方中木瓜、乌梅及白芍的薄层鉴别检验方法，以芍药苷为对照品，制定了采用高效液相色谱法测定处方中自芍的含量；修订后的质量标准，提高了湿消丸质量标准的可控性，进一步确保产品内在质量和疗效，而且对促进产品销售、增加产品的市场竞争力、保证患者用药安全意义重大。
文档编号G01N30/36GK102028839SQ200910070659
公开日2011年4月27日 申请日期2009年9月28日 优先权日2009年9月28日
发明者刘彤, 刘雅华, 孙宝珍, 李艳钰 申请人:天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂