专利名称：一种测定罗红霉素的方法
技术领域：
本发明涉及罗红霉素的测定方法，特别是基于乙基紫荷移反应光度法测定罗红霉 素的方法。
背景技术：
罗红霉素为红霉素A的衍生物，是一个相对较新的半合成大环内酯类抗生素，它 保留了红霉素原有的抗菌活性和杀菌机制，并提高了化学稳定性和亲脂性，自问世以来一 直是临床上广谱的抗菌药物，对革兰氏阳性菌，包括金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、表皮葡 萄球菌、肺炎链球菌以及部分革兰氏阴性菌和厌氧菌、支原体、衣原体、军团菌都具有较强 的抗菌活性。罗红霉素具有用量小、吸收快、作用时间长等特点，其不良反应为常见的恶 心、腹痛、腹泻等消化道反应，还可发生头痛、头晕、皮疹和瘙痒等，特别是对肝、肾功能不良 者，孕妇、哺乳期妇女要慎用。为了科学合理、安全有效地使用这类抗生素，建立准确、快速 的血药浓度的监测方法是临床医学中一项十分重要的工作。目前，测定罗红霉素的主要方 法有微生物效价测定法(MA)、分光光度法、高效液相色谱法(HPLC)、反相高效液相色谱法 (RHPLC)等，但MA法烦琐、费时，不能满足临床上急危重病人需快速检测血药浓度的要求， 已逐渐被淘汰；HPLC法和RHLPC法测定准确，但仪器昂贵，样品预处理复杂。由于分光光度 法仪器简单、操作快捷、测定成本低且条件易于控制、灵敏度高，已成为药物分析不可缺少 的方法之一。目前用于测定罗红霉素的显色剂主要有甲酚红、茜素、二甲胺基苯甲醛、紫色 素、7，7，8，8_四氰基对二次甲基苯醌(TCNQ)等，这些方法的表观摩尔吸光系数ε为IO3 IO4L · πιοΓ1 · cnT1。乙基紫是一种摩尔吸光系数较大的试剂，在分析化学中应用较多，但基 于乙基紫荷移反应光度法测定罗红霉素的方法目前尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于乙基紫荷移反应光度法测定罗红霉素的方法。具体步骤为于IOmL 比色管中依次加入 0. 0,0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5,3. OmL 0. 50 0. 55mg/ L罗红霉素溶液，0. 5 2. 5mL 4. 8 5. 2 X l(T4mol/L乙基紫溶液，0. 2 1. OmL 0. 09 0. 15mol/L HCl溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇勻。于45 55°C水浴中加热lOmin，取 出冷却至室温，于紫外可见分光光度计上，用Icm比色皿，以二次蒸馏水为参比，在637nm 波长处分别测定加有罗红霉素溶液的吸光度值A63ta和不加罗红霉素的试剂空白溶液的吸 光度值Atl，计算吸光度差值AA63ta = A637nm-Atl,其吸光度差值AA63ta与罗红霉素浓度C在 O 0. 156mg/L范围内成线性关系，线性回归方程为Δ A637nm = 3. 9904C+0. 0065，相关系数 0. 9990，表观摩尔吸光系数ε 637 = 3. 34X IO6L -moF1 .cm—1 ；另取罗红霉素片(罗红霉素胶 囊)2 10片(粒)，磨细混勻后称取0. 0050 0. 0250g,用乙醇溶解、定容，同法测定吸光 度值，计算出罗红霉素片(罗红霉素胶囊)中罗红霉素的含量。本发明反应的原理罗红霉素是电子给予体，乙基紫是电子接受体，两者可以进行荷移反应。本发明的测定方法以乙基紫为光度试剂，所建立的测定罗红霉素的方法的灵敏度 高，表观摩尔吸光系数ε可达3. !MXlOfiL* mortem—1。选择性好、简便、快捷、仪器价廉。
图1为本发明实施例2空白与0. 052mg/L罗红霉素的紫外-可见吸收光谱图；图中标记a:空白；b :0. 052mg/LL罗红霉素-7. 6 X l(T5mol/L乙基 紫-6. 25Xl(T3mol/L HCl。图2为本发明的反应原理图。
具体实施例方式实施例1:于IOmL 比色管中依次加入 0. 0,0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5,3. OmL 0. 52mg/L 罗红霉 素溶液，1.5mL 5. 067X10_4mol/L乙基紫溶液，再加入0. 5mL 0. 125mol/LHCl溶液，用二 次蒸馏水稀释至刻度，摇勻。于50°C水浴中加热lOmin，取出冷却至室温，于紫外可见分 光光度计上，用Icm比色皿，以二次蒸馏水为参比，在637nm波长处分别测定加有罗红霉 素溶液的吸光度值A63ta和不加罗红霉素的试剂空白溶液的吸光度值Atl，计算吸光度差值 Δ A637nm = A637nm-A。。其吸光度差值AA637nm与罗红霉素浓度C的线性回归方程为AA63^m = 3. 9904C+0. 0065，相关系数 0. 9990，表观摩尔吸光系数 ε 637 = 3. 34X IO6L .ι οΓ1 .cnT1。另 取两片罗红霉素片(标示量150mg/片)研磨成粉末，混勻后准确称量0.0050g(相当于含 罗红霉素2. 841mg)，用无水乙醇溶解，过滤，滤液定容于IOOmL容量瓶中(约20 %乙醇)，然 后取ImL上述溶液定容于50mL容量瓶(约20%乙醇)作为待测液，取ImL待测液同法测定 吸光度值，代入上述回归方程，计算出罗红霉素片中罗红霉素的含量为152. 7mg/片。实施例2:于IOmL 比色管中依次加入 0,0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5,3. OmLO. 52mg/L 罗红霉素溶 液，1. 5mL 5. 067X 10_4mOl/L乙基紫溶液，再加入0. 5mL0. 125mol/LHCl溶液，用二次蒸馏水 稀释至刻度，摇勻。于50°C水浴中加热lOmin，取出冷却至室温，于紫外可见分光光度计上， 用Icm比色皿，以二次蒸馏水为参比，在637nm波长处分别测定加有罗红霉素溶液的吸光度 值八63^和不加罗红霉素的试剂空白溶液的吸光度值Atl，计算吸光度差值Δ A63^m = A637nm-Atl， 其吸光度差值Δ A63^m与罗红霉素浓度c的线性回归方程为Δ A63^m = 3. 9904c+0. 0065，相 关系数0.9990，表观摩尔吸光系数ε 637 = 3. MXlO6I^mor1 · cm—1。另取罗红霉素胶囊 (标示量150mg/粒)3粒，将其内容物全部倾出，混勻，准确称重为0. 8414g，而后再准确称 取0. 0052g(相当于含罗红霉素2. 78Img)，加入无水乙醇溶解，过滤，定容于IOOmL容量瓶 中(约20%乙醇)，然后取ImL上述溶液定容于50mL (约20%乙醇)容量瓶作为待测液，取 ImL待测液同法测定吸光度值，代入上述回归方程，计算出罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量 为 148. 4mg/粒。测定罗红霉素的吸收光谱图见图1。
权利要求
1. 一种测定罗红霉素的方法，其特征在于具体步骤为于 IOmL 比色管中依次加入 0. 0,0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5,3. OmL 0. 50 0. 55mg/L 罗红 霉素溶液，0. 5 2. 5mL 4. 8 5. 2 X l(T4mol/L 乙基紫溶液，0. 2 1. OmL 0. 09 0. 15mol/ L HCl溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇勻；于45 55°C水浴中加热lOmin，取出冷却至室 温，于紫外可见分光光度计上，用Icm比色皿，以二次蒸馏水为参比，在637nm波长处分别测 定加有罗红霉素溶液的吸光度值和不加罗红霉素的试剂空白溶液的吸光度值Atl，计算 吸光度差值Δ A637nm = A637nm-A0,其吸光度差值Δ A637nm与罗红霉素浓度C在O 0. 156mg/L 范围内成线性关系，线性回归方程为AA63ta = 3. 9904C+0. 0065，相关系数0.9990，表观摩 尔吸光系数ε 637 = 3. 34X IO6L-moF1 .cnT1 ；另取罗红霉素片或罗红霉素胶囊2 10片或 粒，磨细混勻后称取0. 0050 0. 0250g，用乙醇溶解、定容，同法测定吸光度值，计算出罗红 霉素片或罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量。
全文摘要
本发明公开了一种测定罗红霉素的方法。于10mL比色管中依次加入0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL 0.50～0.55mg/L罗红霉素溶液，0.5～2.5mL4.8～5.2×10-4mol/L乙基紫溶液，0.2～1.0mL 0.09～0.15mol/L HCl溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀；于45～55℃水浴中加热10min，取出冷却至室温，于紫外可见分光光度计上，用1cm比色皿，以二次蒸馏水为参比，在637nm波长处分别测定加有罗红霉素溶液的吸光度值A637nm和不加罗红霉素的试剂空白溶液的吸光度值A0，计算吸光度差值ΔA637nm＝A637nm-A0；另取罗红霉素片或罗红霉素胶囊2～10片或粒，磨细混匀后称取0.0050～0.0250g，用乙醇溶解、定容，同法测定吸光度值。本发明测定方法灵敏度高、操作简便、快捷、仪器价廉。
文档编号G01N21/33GK102095697SQ20101057988
公开日2011年6月15日 申请日期2010年12月7日 优先权日2010年12月7日
发明者唐宁莉, 夏海鸣, 蒙兴龙, 邓志业 申请人:桂林理工大学