专利名称：一种测定硫酸庆大霉素的方法
技术领域：
本发明涉及硫酸庆大霉素的测定方法，特别是四羧基铝酞菁褪色分光光度法测定 硫酸庆大霉素的方法。
背景技术：
硫酸庆大霉素(Gentamycinsulfate，GEN)属氨基糖苷类抗生素，具有水溶性好、 抗菌谱广、细菌耐药性低、血浆蛋白结合率低、用药方便和价格便宜等优点，是临床上常用 的抗感染药物，但这类抗生素对耳、肾有一定的毒性，临床使用时需严格控制剂量，因此对 硫酸庆大霉素的定量测定具有非常重要的意义。这类抗生素的含量测定多采用微生物法， 但这种方法繁琐、费时、费用高，不适于快速检测。此外的测定方法还有高效液相色谱法、荧 光法和分光光度法等。由于分光光度法具有方法简便、分析精度高、重复性好、可测范围广、 仪器价廉等优点，是药物分析中应用较多的一类方法。四羧基铝酞菁(AlC4Pc)是一种性能 优异、对光和热有较好稳定性的物质，作为光度试剂可测定蛋白质，但目前应用四羧基铝酞 菁为指示物，以褪色分光光度法测定硫酸庆大霉素的方法尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种四羧基铝酞菁褪色分光光度法测定硫酸庆大霉素的方 法。具体步骤为于IOmL 比色管中依次加入 0. 1,0. 2,0. 5,1. 0,2. 0,2. 5mL 8 11 μ g/mL 的硫酸庆 大霉素溶液，0. 05 1. 5mL ρΗ6· 6的克拉克-鲁布斯(Clark-Lub's C-L)缓冲溶液，0. 5 2. OmL 0. 9 1. 1 X lO^mol/L的四羧基铝酞菁溶液，以不加硫酸庆大霉素的溶液为试剂空 白，二次蒸馏水定容至刻度，摇勻。于紫外可见分光光度计上，用Icm比色皿，以二次蒸馏水 为参比，在波长690nm处分别测定含硫酸庆大霉素溶液的吸光度值A69tlnm和试剂空白的吸光 度值Atl，计算吸光度差值AA69tlnm = Atl-A69tlnm值，其吸光度差值AA69tlnm与硫酸庆大霉素浓度 C在0. 1 2. 5 μ g/mL范围内成线性关系，线性回归方程为=AA690nm = 0. 2896C+0. 0052，相 关系数0. 9998，检出限0. 087 μ g/mL ；另取硫酸庆大霉素注射液1 2mL，稀释后同法测定 吸光度值，计算出硫酸庆大霉素注射液中硫酸庆大霉素的含量。本发明测定方法灵敏度高、选择性好、简便、快捷、仪器价廉。
附图为本发明实施例空白与1. 0 μ g/mL硫酸庆大霉素的紫外吸收光谱图。图中标记 a 空白；b :1· 0 μ g/mL GEN_pH6. 6C-L-1. 0 X 10_5mol/L AlC4Pc。
具体实施例方式实施例
于IOmL比色管中依次加入0. 1,0. 2,0. 5,1. 0,2. 0,2. 5mL 10 μ g/mL的硫酸庆大霉 素溶液，0. 5mL pH6. 6 的克拉克-鲁布斯(Clark-Lub，s，C-L)缓冲溶液，ImL 1. 0 X 10_4mol/L 的四羧基铝酞菁溶液，以不加硫酸庆大霉素的溶液为试剂空白，二次蒸馏水定容至刻度，摇 勻。于紫外可见分光光度计上，用Icm比色皿，以二次蒸馏水为参比，在波长690nm处分别测 定含硫酸庆大霉素溶液的吸光度值A69tlnm和试剂空白的吸光度值Atl，计算吸光度差值AA69tlnm = Aci-A69cinm值，其吸光度差值AA69tlnm与硫酸庆大霉素浓度C的线性回归方程为AA69tlnm = 0. 2896C+0. 0052，相关系数0. 9998，检出限0. 087 μ g/mL ；另取三批硫酸庆大霉素注射液各 一支，各自取ImL分别放入IOOmL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇勻。各取2. 5mL分别放入 IOOmL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇勻。分别取ImL上述溶液进行测定，并进行回收率实 验，结果见表1。表1硫酸庆大霉素注射液测定结果(n = 5)
权利要求
1. 一种测定硫酸庆大霉素的方法，其特征在于具体步骤为于IOmL比色管中依次加入 0. 1、0. 2、0. 5、1. 0、2. 0、2. 5mL 8 11 μ g/mL 的硫酸庆大霉素溶液，0. 05 1. 5mL pH6. 6 的 克拉克-鲁布斯缓冲溶液，0. 5 2. OmL 0. 9 1. lX10_4mol/L的四羧基铝酞菁溶液；以不 加硫酸庆大霉素的溶液为试剂空白，二次蒸馏水定容至刻度，摇勻；于紫外可见分光光度计 上，用Icm比色皿，以二次蒸馏水为参比，在波长690nm处分别测定含硫酸庆大霉素溶液的 吸光度值A69tlnm和试剂空白的吸光度值Atl，计算吸光度差值Δ A690nm = A0-A690nm值，其吸光度 差值Δ A690nm与硫酸庆大霉素浓度C在0. 1 2. 5 μ g/mL范围内成线性关系，线性回归方程 为Δ A690nm = 0. 2896C+0. 0052，相关系数0. 9998，检出限0. 087 μ g/mL ；另取硫酸庆大霉素 注射液1 2mL，稀释后同法测定吸光度值，计算出硫酸庆大霉素注射液中硫酸庆大霉素的 含量。
全文摘要
本发明公开了一种测定硫酸庆大霉素的方法。于10mL比色管中依次加入0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、2.5mL 8～11μg/mL的硫酸庆大霉素溶液，0.05～1.5mLpH6.6的克拉克-鲁布斯缓冲溶液，0.5～2.0mL 0.9～1.1×10-4mol/L的四羧基铝酞菁溶液；以不加硫酸庆大霉素的溶液为试剂空白，二次蒸馏水定容至刻度，摇匀；于紫外可见分光光度计上，用1cm比色皿，以二次蒸馏水为参比，在波长690nm处分别测定含硫酸庆大霉素溶液的吸光度值A690nm和试剂空白的吸光度值A0，计算吸光度差值ΔA690nm＝A0-A690nm值；另取硫酸庆大霉素注射液1～2mL，稀释后同法测定吸光度值，计算出硫酸庆大霉素注射液中硫酸庆大霉素的含量。本发明测定方法灵敏度高、选择性好、简便、快捷、仪器价廉。
文档编号G01N21/27GK102128796SQ20101057990
公开日2011年7月20日 申请日期2010年12月7日 优先权日2010年12月7日
发明者凌悦菲, 唐宁莉, 杨兰玲, 蒙兴龙 申请人:桂林理工大学