一种水洗一次的革兰染色二步法
【专利摘要】本发明公开了一种水洗一次的革兰染色二步法，包括：在室温下，将待检材料均匀涂在玻片上，干燥，固定，再将初染剂滴加到涂片上，染色，倾去初染剂后直接滴加复染剂，染色，水洗一次，干后镜检，在涂片中央是染成紫色的革兰阳性菌和染成红色的革兰阴性菌。与现有技术相比，本发明大大减少了染料和水的用量，并且缩短了初染和复染的时间，提高染色效率的同时节约了50%的染料和50%的水，适用于大批量的检验操作。
【专利说明】一种水洗一次的革兰染色二步法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种革兰染色法，特别是涉及一种水洗一次的革兰染色二步法。
【背景技术】
[0002]革兰染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫革兰氏阳性菌(G+)，后者叫革兰氏阴性菌(G-)。为了观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽孢的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。
[0003]革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫-碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。
[0004]传统的革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是:1)涂片固定，2)草酸铵结晶紫染I分钟，3)水冲洗，4)加碘液覆盖涂面染I分钟，5)水洗，用吸水纸吸除水分，6)加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分，
7)蕃红染色液染10秒钟后，自来水冲洗，干燥镜检。其中在初染、媒染、脱色、复染每一步骤之后都需要水洗除去染料，避免附着的染料对染色效果的影响，革兰染色四步法效果好，但操作比较复杂，质量控制不易进行，难以做到标准化，同时消耗大量的染料和水，容易造成资源的浪费和环境的污染。
[0005]目前在专利CN101126689B中公开了一种水洗两次的革兰染色二步法，主要包括初染和复染两步，在每一步骤之后同样需要水洗除去附着的染料，该方法较传统的革兰氏染色四步法，操作更简便且方法可靠，但此方法同样消耗较多的染料和水，并且初染和复染的时间较长，不适于大批量的检验操作。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是针对目前革兰染色二步法染料和水消耗较大，染色时间较长的问题，提供一种水洗一次的革兰染色二步法，该方法染料和水的用量小，初染和复染时间短，适用于大批量的检验操作。
[0007]本发明的目的可以通过以下技术方案实现:
[0008]一种水洗一次的革兰染色二步法，包括:[0009]在室温下，将待检材料均匀涂在玻片上，干燥，固定，再将初染剂滴加到涂片上，染色，倾去初染剂后直接滴加复染剂，染色，水洗一次，干后镜检，在涂片中央是染成紫色的革兰阳性菌和染成红色的革兰阴性菌，
[0010]其中所述初染剂为含有质量百分数0.03125%结晶紫的水溶液；所述复染剂为含有以下质量百分数组分的乙醇溶液，其中0.0625%碱性品红、0.005%碘化钾、0.001%碘。
[0011]在传统的革兰染色方法和改进的二步染色法中，由于所用染料量较多，水洗被认为是不可缺少的一步，因为通过水洗可除去附着在涂片上的染料，避免对染色效果的影响，然而发明人经过研究发现，使用稀释的染色液，减少染料的用量，省去初染后的水洗步骤对染色效果没有影响，染色效果仍与已知的方法一样好。
[0012]本发明优选地，所述初染剂的滴加量为I?4ml，初染剂染色时间为10?50秒；所述复染剂的滴加量为0.8?2ml，复染剂染色时间为I?5秒。
[0013]本发明更优选为所述初染剂的滴加量为2ml，初染剂染色时间为30秒，所述复染剂的滴加量为1ml，复染剂染色时间为2秒。
[0014]优选地，所述涂在玻片上的待检材料的直径为1.0?2.0cm0
[0015]本发明中，所述待检材料优选为细菌培养物或送检分泌物。
[0016]本发明的水洗一次革兰染色二步法具有以下优点:
[0017]1.与现有的水洗两次革兰染色二步法相比，本发明的方法省略了初染后的水洗一步，简化了操作步骤，方法更为简便并且染色效果和水洗两次革兰染色二步法一样，该方法与现有技术相比可节约50%的水。
[0018]2.该方法大大减少了染料的用量，并且缩短了初染和复染的时间，提高染色效率的同时节约了 50%的染料，减少了对环境的污染。
【具体实施方式】
[0019]下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0020]本发明中所使用的玻片、初染剂、复染剂以及用于镜检的仪器均采用常规的材料和设备，镜检的方法采用现有技术中的常规检测方法。
[0021]实施例1
[0022]取洁净的玻片，在室温下，将细菌培养物均匀涂在玻片上，干燥，固定，其中涂片的直径为1.0cm，再滴加Iml由含有0.03125%结晶紫水溶液配成的初染剂到涂片上，染色10秒，倾去初染剂后不水洗，直接滴加0.8ml由含有0.0625%碱性品红、0.005%碘化钾、0.001%碘的乙醇溶液配成的复染剂，染色I秒后水洗，干后镜检，在涂片中央可见到染成紫色的革兰阳性菌和染成红色的革兰阴性菌，对比鲜明。
[0023]实施例2
[0024]取洁净的玻片，在室温下，将送检分泌物均匀涂在玻片上，干燥，固定，其中涂片的直径为1.5cm,再滴加2ml由含有0.03125%结晶紫水溶液配成的初染剂到涂片上，染色30秒，倾去初染剂后不水洗，直接滴加Iml由含有0.0625%碱性品红、0.005%碘化钾、0.001%碘的乙醇溶液配成的复染剂，染色2秒后水洗，干后镜检，在涂片中央可见到染成紫色的革兰阳性菌和染成红色的革兰阴性菌，对比鲜明。
[0025]实施例3
[0026]取洁净的玻片，在室温下，将送检分泌物均匀涂在玻片上，干燥，固定，其中涂片的直径为2.0cm，再滴加4ml由含有0.03125%结晶紫水溶液配成的初染剂到涂片上，染色50秒，倾去初染剂后不水洗，直接滴加2ml由含有0.0625%碱性品红、0.005%碘化钾、0.001%碘的乙醇溶液配成的复染剂，染色5秒后水洗，干后镜检，在涂片中央可见到染成紫色的革兰阳性菌和染成红色的革兰阴性菌，对比鲜明。
[0027]以上所述，仅为本发明较佳【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限与此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种水洗一次的革兰染色二步法，包括: 在室温下，将待检材料均匀涂在玻片上，干燥，固定，再将初染剂滴加到涂片上，染色，倾去初染剂后直接滴加复染剂，染色，水洗一次，干后镜检，在涂片中央是染成紫色的革兰阳性菌和染成红色的革兰阴性菌， 其中所述初染剂为含有质量百分数0.03125%结晶紫的水溶液； 所述复染剂为含有以下质量百分数组分的乙醇溶液，其中0.0625%碱性品红、0.005%碘化钾、0.001%碘。
2.如权利要求1所述的水洗一次的革兰染色二步法，其特征在于，所述初染剂的滴加量为I?4ml，初染剂染色时间为10?50秒；所述复染剂的滴加量为0.8?2ml，复染剂染色时间为I?5秒。
3.如权利要求2所述的水洗一次的革兰染色二步法，其特征在于，所述初染剂的滴加量为2ml，初染剂染色时间为30秒，所述复染剂的滴加量为1ml，复染剂染色时间为2秒。
4.如权利要求1所述的水洗一次的革兰染色二步法，其特征在于，所述涂在玻片上的待检材料的直径为1.0?2.0cm0
5.如权利要求1所述的水洗一次的革兰染色二步法，其特征在于，所述待检材料为细菌培养物或送检分泌物。
【文档编号】G01N1/30GK103674660SQ201210336839
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年9月12日 优先权日:2012年9月12日
【发明者】叶元康 申请人:无锡飞伊生物科技有限公司