专利名称：一种新型巯基显色剂、其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新型巯基显色剂、其制备方法与应用，该新型巯基显色剂为5，5' -二硫双-(2-硝基苯乙酸)，可用于测定胆碱酯酶、硫代糖苷水解酶的活性，可用于检测体液中胆碱酯酶及酶标免疫分析中胆碱酯酶类标记酶的活性。
背景技术：
目前检测巯基或硫醇常用显色剂是5，5' 二硫代双-(2-硝基苯甲酸)，即Ellman试剂，简称DTNB ;其显色反应所释放有色产物简称NTB且吸收峰在410nm附近。当利用等吸收波长实现两种酶活性同步测定时，用碱性磷酸酶水解4-硝基-1-萘基磷酸酯的最大等吸收波长在405nm ;如同步测定碱性磷酸酶水解4-硝基-1-萘基磷酸酯和胆碱酯酶水解硫代乙酰胆碱或硫代丁酰胆碱的活性，则需要巯基显色剂的吸收峰越靠近405nm越好。因此，本发明设计合成了新型巯基显色剂，使其显色产物差吸收峰更靠近405nm，用于测定各种类型的烷基硫醇、测定胆碱酯酶活性，尤其适用于滤光片式酶标仪同步测定碱性磷酸酶和胆碱酯酶活性。
发明内容
本发明设计的新型巯基显色剂5，5' - 二硫双-(2-硝基苯乙酸)，简称DTNA，其被烷基硫醇即RSH选择性还原断裂二硫键后所得有色产物称NTA，其差吸收峰刚好在405nm附近；该显色剂5，5' - 二硫双-(2-硝基苯乙酸)的结构如下:
权利要求
1.一种新型巯基显色剂、其制备方法与应用，该新型巯基显色剂为5，5' -二硫双-(2-硝基苯乙酸)，结构如下:
2.据权利要求1，此新型巯基显色剂5，5'- 二硫双-(2-硝基苯乙酸)制备过程特征步骤包括: (一)3_氯苯乙酸在二氯甲烷中，20 45°C下与硝酸或硝酸与硫酸混合物反应，而用混合物酸时硝酸浓度从20% 65%、硫酸浓度从5% 40%均有效；反应2 8小时后收集二氯甲烷层，减压蒸去二氯甲烷得到黄色固体，将黄色固体残留物用水洗至洗涤液PH在6.0 7.0后，残留固体为2-硝基-5-氯-苯乙酸。
(二)2-硝基-5-氯苯乙酸在pH8 12的NaOH水溶液中，30 80°C间与Na2S2反应IOmin到10小时，再调pH至3 1，收集生成的黄色沉淀后用乙醇重结晶，得到产物为5，5' - 二硫双-(2-硝基苯乙酸)。
3.据权利要求1，此新型巯基显色剂5，5'- 二硫双-(2-硝基苯乙酸)与烷基硫醇或巯基在PH6.5以上反应，其二硫键被选择性还原而断裂，所释放的(2-硝基-5-巯基)-苯乙酸相对于此新巯基显色剂的差吸收峰在405nm附近；这种光谱特性使得该显色剂适于滤光片式酶标仪及分光光度计测定吸收定量巯基，从而跟踪水解硫酯或硫代糖苷键释放硫醇的水解酶反应过程，包括但不限于用硫代乙酰胆碱测定乙酰胆碱酯酶、用硫代丁酰胆碱测定丁酰胆碱酯酶活性。`
全文摘要
一种新型巯基显色剂、其制备方法与应用，该新型巯基显色剂为5，5′-二硫双-(2-硝基苯乙酸)，用3-氯苯乙酸硝化、与二硫化钠反应制备；该显色剂与烷基硫醇或巯基反应时二硫键被还原断裂，所释放的(2-硝基-5-巯基)-苯乙酸相对此显色剂的差吸收峰在405nm附近，适合用滤光片式酶标仪及分光光度计测定。
文档编号G01N21/78GK103105391SQ20121057157
公开日2013年5月15日 申请日期2012年12月26日 优先权日2012年12月26日
发明者廖飞, 刘霖, 杨晓兰, 刘红博, 王昕 , 李元丽 申请人:重庆医科大学