一种道地药材川楝子的质量检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种道地药材川楝子的质量检测方法，属于医药【技术领域】。用以川楝素及多种苦味三萜成分如苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-O-乙酰川楝子三醇，21-O-甲基川楝子五醇为指标，采用薄层色谱：TLC和高效液相色谱：HPLC分析方法，建立川楝子药材的质量检测方法；本发明在川楝子质量检测方法中，在进行ＴＬＣ检测同时，增加川楝素含量测定为指标，从而确保能采购到正宗的川楝子药材，确保其临床使用的有效性和安全性。
【专利说明】一种道地药材川楝子的质量检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种道地药材川楝子的质量检测方法，属于医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002]川楝子又名金铃子，中药材，为楝科落叶乔木川楝树的成熟果实。主要产于中国的南方各地，以四川的产者最为上乘，故又名川楝子。川楝子性寒，味苦，沉降，是行气药的一种。主要入肝经，疏泄肝热，行气止痛，有除湿热、清肝火、止痛、杀虫的功能。主治:胸胁、脘腹胀痛、疝痛、虫积腹痛。治气郁而有热之证尤宜。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于解决因产地不同引起的川楝子药材检测不规范、质量差异较大的问题，从而提供一种道地药材川楝子的质量检测方法。
[0004]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
一种道地药材川楝子的质量检测方法，它包括如下检测步骤:
用以川楝素及多种苦味三萜成分如苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇为指标，采用薄层色谱:TLC和高效液相色谱:HPLC分析方法，建立川楝子药材的质量检测方法；
A)、TLC鉴别
取待测粉末2g，加水80ml，超声处理I小时，放冷，离心，取上清液，用二氯甲烷振摇提取3次，每次25 ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液；另取川楝子对照药材2g，同法制成对照药材溶液，再取川楝素对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄板上，以重量比为16:1的二氯甲烷一甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲醛试液，在105°C加热至斑点显色清新；
供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同色的斑点；
B)、含量测定
照高效液相色谱一质谱法测定；
色谱、质谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以重量比为31:69D已腈一 0.01%甲酸溶液为流动相，采用单级四极杆质谱检测器，电喷雾离子化和负离子模式下选择质荷比573离子进行检测.理论板数按川楝素峰计算应不低于8000;
对照品溶液制备:取川楝素对照品，加甲醇制成每I ml含2ug的溶液.即得；
供试品溶液制备:取待测品中粉0.25g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50 ml，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；测定法:分别精密吸取对照品溶液2ul，与供试品溶液I 一 2ul，注入液相一质谱联用仪，测定，以川楝素两个峰面积之和计算，即得；
C)、线性关系考察 分别取川楝素、苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇对照品溶液6、5、5、5、5ml，置于25 ml量瓶中，摇匀，加甲醇定容；
吸取定容后的溶液0.5、1.0、2.0、5.0、10.01111，置10 ml量瓶中，摇匀，加甲醇定容，按上述色谱条件进样测定；
D)、精密度试验
取混合对照品溶液适量，按上述色谱条件连续进样5次，记录峰面积；
E)、稳定性试验
取同一供试品溶液适量，分别于0、2、4、8、12 h进样，记录峰面积；
F)、重复性试验
取同批次样品适量，分别按B)、含量测定项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样，记录峰面积，计算样品含量；
G)、加样回收率试验
取已知含量的样品约0.5 g，分别加入对照品溶液，按按B)、含量测定项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样，记录峰面积，计算样品含量和加样回收率；
H)、样品含量测定
称取川楝子样品各适量，分别按B)、含量测定项下方法制备供试品溶液；各吸取10U I分别注入HPLC仪，照上述色谱条件测定峰面积，按外标一点法计算样品中川楝素成分的含量，检测结果得出。
[0005]本发明的有益效果:
本发明在川楝子质量检测方法中，在进行T L C检测同时，增加川楝素含量测定为指标，从而确保能采购到正宗的川楝子药材，确保其临床使用的有效性和安全性。
【具体实施方式】
[0006]下面结合实施例对本发明进行详细描述:
以川楝素及多种苦味三萜成分如苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇为指标，采用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)分析方法，建立川楝子药材的质量评价标准。结果:6批川楝子的TLC中均检出川楝素的特征斑点。川楝素、苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇的质量浓度分别在 0.06 — 0.20 ,0.003 08 ?0.061 54、0.003 74 ?0.074 88、0.002 90 ?0.057
60,0.00106 - 0.00856 mg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系(r均为0.9999);五者的平均加样回收率分别为100.00%,99.39%,99.81%,97.86%,96.98% ；RSD分别为 1.80%、1.11 %、1.41 %、1.25%、1.36% (n = 6)。结论:TLC 鉴别方法专属性强；HPLC 含量测定方法精密度高、重复性好、简便、快捷，可用于控制川楝子是否地道药材的检测及含量测定，使川楝子质量标准更具有科学性。
[0007]1.2 试剂
川楝素对照品(供含量测定用)与川楝子对照药材(中国食品药品检定研究院，批号分别为 110827-201008、110826-200712、120945-200707 );川楝素对照品(单位自制，经 HPLC测定、面积归一化法计算纯度>98%);乙腈(色谱纯，美国Fisher公司);水为超纯水，其他试剂均为分析纯。[0008]1.3 药材
6批川楝子药材均采自于四川遂宁市，经成都中医药大学张艺研究员鉴定为真品。川楝子样品来源见表1
【权利要求】
1.一种道地药材川楝子的质量检测方法，其特征在于:它包括如下检测步骤: 用以川楝素及多种苦味三萜成分如苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇为指标，采用薄层色谱:TLC和高效液相色谱:HPLC分析方法，建立川楝子药材的质量检测方法； A)、TLC鉴别 取待测粉末2g，加水80ml，超声处理I小时，放冷，离心，取上清液，用二氯甲烷振摇提取3次，每次25 ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液； 另取川楝子对照药材2g，同法制成对照药材溶液，再取川楝素对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄板上，以重量比为16:1的二氯甲烷一甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲醛试液，在105°C加热至斑点显色清新； 供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同色的斑点； B)、含量测定 照高效液相色谱一质谱法测定； 色谱、质谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以重量比为31:69D已腈一 0.01%甲酸溶液为流动相，采用单级四极杆质谱检测器，电喷雾离子化和负离子模式下选择质荷比5`73离子进行检测.理论板数按川楝素峰计算应不低于8000; 对照品溶液制备:取川楝素对照品，加甲醇制成每I ml含2ug的溶液.即得； 供试品溶液制备:取待测品中粉0.25g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50 ml，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得； 测定法:分别精密吸取对照品溶液2ul，与供试品溶液I 一 2ul，注入液相一质谱联用仪，测定，以川楝素两个峰面积之和计算，即得； C)、线性关系考察 分别取川楝素、苦楝子酮、脂苦楝子醇，21-0-乙酰川楝子三醇，21-0-甲基川楝子五醇对照品溶液6、5、5、5、5ml，置于25 ml量瓶中，摇匀，加甲醇定容； 吸取定容后的溶液0.5、1.0、2.0、5.0、10.01111，置10 ml量瓶中，摇匀，加甲醇定容，按上述色谱条件进样测定； D)、精密度试验 取混合对照品溶液适量，按上述色谱条件连续进样5次，记录峰面积； E)、稳定性试验 取同一供试品溶液适量，分别于0、2、4、8、12 h进样，记录峰面积； F)、重复性试验 取同批次样品适量，分别按B)、含量测定项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样，记录峰面积，计算样品含量； G)、加样回收率试验 取已知含量的样品约0.5 g，分别加入对照品溶液，按按B)、含量测定项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样，记录峰面积，计算样品含量和加样回收率； H)、样品含量测定 称取川楝子样品各适量，分别按B)、含量测定项下方法制备供试品溶液；各吸取10μ I分别注入HPLC仪，照上述色谱条件测定峰面积，按外标一点法计算样品中川楝素成分的含量，检测结果 得出。
【文档编号】G01N30/02GK103675191SQ201310716878
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月24日 优先权日:2013年12月24日
【发明者】黄凤林, 熊建英, 邵青文, 陈颖 申请人:江西南昌制药有限公司