一种二氧化硫残留量检测试剂盒及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种用于检测二氧化硫残留量的试剂盒，所述试剂盒包括检测试纸和标准比色卡；本发明还提供了所述试剂盒的制备方法和使用方法，以及上述检测试剂盒、其制备方法在检测中药材或中药材饮片中二氧化硫残留量的应用。与现有技术相比，本申请所使用的药均对人体无毒副作用的试剂，反应产物也无毒；使用方便，无需实验室专业测试人员和检测设备，适宜日常检测；稳定性好，溶液中添加了碘化钾后单质碘就和碘化钾形成碘配离子，使碘不易挥发，并且增加了碘的溶解度；颜色变化明显，实验前后颜色变化明显。因此，本申请的试剂盒和检测方法在普通商品的检测中有很大的应用前景。
【专利说明】一种二氧化硫残留量检测试剂盒及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明属于中药检测领域，涉及一种中药材及饮片中二氧化硫残留量的检测，尤其涉及一种用于检测中药材及饮片中二氧化硫残留量的试纸及其制备方法。
【背景技术】
[0002]为了方便运输和提高储藏质量，很多中药材必须经过严格的干燥，但是常规干燥方法成本高、效果差。硫磺燃烧生成的二氧化硫具有漂白作用，具有很好的防虫、防霉和防腐等效果；而且方法简便，成本低。因此，硫磺熏蒸被广泛应用于中药材或食品的加工中。硫磺熏蒸产生的二氧化硫会以游离型和结合型的SO广形式残留在药材或食品中，从而产生一系列的食用安全问题。但是，由于缺乏更加有效、廉价的药材保存方法，目前还不能完全禁止硫磺在中药材中的使用。因此，为了解决中药材加工过程中滥用硫磺熏蒸的问题，保证中药的食用安全性，在2010年版《中国药典》第二增补本(2013年)中，国家药典委员会规定了二氧化硫残留限量标准:山药、牛膝、粉葛、天麻、天冬、天花粉、白及、白芍、白术、党参等10种传统习用硫磺熏蒸的中药材及其饮片，亚硫酸盐残留量(以二氧化硫计)不得超过400mg/kg ;其他中药材及饮片(矿物来源的中药材除外，下同)中亚硫酸盐残留量(以二氧化硫计)不得过150mg/kg。上述限量标准均在世界卫生组织(WHO)认可的安全标准范围内。
[0003]现在不仅是中药材或食品生产者、加工者和经销者需要监控二氧化硫的残留量，而且普通消费者也需要了解商品的安全性，因此，二氧化硫的检测方法就显得非常重要了。对于有条件的中药材生产者、加工者和经销者，可以完全依照《中国药典》(2010年版)“附录IX U 二氧化硫残留量测定法”进行检测，但是这种检测方法的装置很复杂，操作过程很繁琐，待测物的处理需要氮气瓶、回流装置、电炉、盐酸、处理时间长，虽然定量准确。但是只适用于检测机构使用。已公开的中国专利，如CN2015619 33U公开了一种检测二氧化硫残留的装置，其中待测物的处理需要窄口容器，瓶口塞上带有导气孔的导气塞，导气塞上方紧贴碘化钾淀粉试纸，试纸上方用带有导气孔的上压盖固定密封。CN202126407U公开了一种二氧化硫残留量限量的快速检测装置，待测物的处理需要锥形瓶、导气管、旋塞、旋塞盖，导气管通过磨口连接在锥形瓶上；旋塞的中央有圆孔，导气管套入旋塞的圆孔内；旋塞盖中央有圆孔，置于旋塞上，并与旋塞吻合。CN102590193A以鲁米诺作为发光剂，空气中的氧气作为氧化剂，亚硫酸根作为敏化剂，硫酸钴作为鲁米诺-空气-亚硫酸根离子化学发光体系的催化剂，通过测定加入亚硫酸盐溶液前后体系的发光总强度的变化，与标准系列比较，可确定亚硫酸盐的浓度，进而确定食品中二氧化硫含量。需要用到化学发光测量仪暗室等。CN102749410A将待测中药材样品采用加酸蒸馏法制成供试品溶液；精密吸取供试品溶液，采用离子色谱，色谱柱为1nPac/AS-11-HC，保护柱为1nPac/AG-11-HC，进样，测定，用标准曲线法计算样品中硫酸根含量，折算成样品中二氧化硫的含量。
[0004]上述现有的检测方法虽然对《中国药典》上的方法做了一定的改进，但也必需配备一定的设备和装置，过程繁琐，不适宜普通消费者的日常使用。普通消费者需要的是一种便宜、方便、直观、不需要任何仪器的二氧化硫检测方法，这种方法能快速地判断市售商品中是否有二氧化硫的残留，以及大概的残留量范围，但不需要准确定量。而且，它不仅能用于检测中药材的二氧化硫残留，也能用于食品的检测。但是目前市面上还没有这样一种二氧化硫快速检测方法。
【发明内容】
[0005]因此，针对目前硫熏在中药材和食品加工的普遍现象，本发明提供了一种快速鉴别硫熏的检测试纸，以满足普通消费者的需要，同时本发明还提供了该试纸的制备方法。
[0006]本发明检测试纸的检测原理:碘遇淀粉溶液会变蓝色，亚硫酸根离子与碘发生氧化还原反应使单质碘变成碘离子，蓝色褪去。其化学反应方程式如下:
[0007]SO32 +Ι2+Η20 — 21 +SO42 +2H.[0008]一种用于检测二氧化硫残留量的试剂盒，所述试剂盒包括检测试纸和标准比色卡;
[0009]其中，所述检测试纸含有层析滤纸，所述层析滤纸使用浸溃液浸溃；其中所述浸溃液由溶液A和溶液B按体积比为1000:3的比例混合而成，溶液A为含有I~5%w/v的淀粉，0.05~0.2%w/v的羧甲基纤维素钠，0.05~0.5%w/v的碘化钾的水溶液；溶液B为5~15%w/V碘的无水乙醇溶液；
[0010]所述标准比色卡标识不同的二氧化硫标准溶液的浓度范围，优选地，所述标准比色卡标识的二氧化硫浓度的范围为O~1300mg/kg，所述标识的二氧化硫浓度的精度为50 ~100mg/kg。
[0011]优选地，所述标准比色卡标识的二氧化硫浓度的精度为50mg/kg，所述浓度范围为O ~1300mg/kg,
[0012]优选地，所述标准比色卡有十三个浓度范围，标识的二氧化硫浓度为100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300mg/kg。优选地，所述标准比色卡有十五个浓度范围，标识的二氧化硫浓度为50、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300mg/kg。
[0013]优选地，所述浸溃液由溶液A和溶液B按体积比为1000:3的比例混合而成，溶液A为含有2~3%w/v的淀粉，0.1~0.2%w/v的羧甲基纤维素钠，0.1~0.4%w/v的碘化钾的水溶液；溶液B为5~15%w/v碘的无水乙醇溶液；
[0014]优选地，所述浸溃液由溶液A和溶液B按体积比为1000:3的比例混合而成，溶液A为含有2%w/v的淀粉,0.l%w/v的羧甲基纤维素钠,0.2%w/v的碘化钾的水溶液；溶液B为10%w/V碘的无水乙醇溶液；
[0015]一种用于检测二氧化硫残留量的试剂盒的制备方法，所述方法包括以下步骤:
[0016]I)检测试纸的制备:
[0017]将层析滤纸在浸溃液中浸溃I~2min ;然后将浸溃后的层析滤纸在_20°C的冰箱中冷藏20~30min，取出自然干燥，既得；
[0018]其中，所述浸溃液由溶液A和溶液B按体积比为1000:3的比例混合而成，溶液A为含有I~5%w/v的淀粉，0.05~0.2%w/v的羧甲基纤维素钠，0.05~0.5%w/v的碘化钾的水溶液；溶液B为5~15%w/v碘的无水乙醇溶液；
[0019] 优选地，所述溶液A配制方法如下:取I~5mg的淀粉和0.05~0.2!1^的羧甲基纤维素钠溶于IOOmL水中，加热煮沸使上述两种物质充分溶解，冷却,然后添加0.05?0.5mg的碘化钾；
[0020]优选地，将所述干燥后的层析滤纸截切成长为4.0?6.0cm,宽为0.8?1.2cm的试纸条；
[0021]2)标准比色卡的制备，以检测时取样量为0.1g药材溶于2mL水中计，用亚硫酸氢钠配制不同标识浓度(以二氧化硫计)的溶液，分别将根据步骤I)制得的检测的试纸一端浸润到溶液中3秒后拿出，观察试纸颜色变化并与浸润了水的试纸比较，将显色后的试纸扫描，依浓度梯度制作成标准比色卡；
[0022]优选地，所述标识浓度为100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300mg/kg ；
[0023]优选地，所述标识浓度为50、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300mg/kg ；
[0024]一种二氧化硫残留量的检测方法，所述方法包括以下步骤:
[0025]I)称取待测的中药材或饮片溶于水中，其中所述中药材或饮片与水的质量体积之比为0.1g:2mL，震荡l_3min，静置至不溶物沉淀并呈现上清液；
[0026]2)取所述的检测试纸浸润到步骤I)的上清液中，观察试纸的颜色变化并与浸润了水的试纸比较；
[0027]若蓝色褪去或颜色与浸润了水的试纸比较变浅了，则该被测中药材或饮片中含有二氧化硫，可与制作的标准比色卡对照，确定中药材或饮片的二氧化硫残留含量。
[0028]上述检测试剂盒、其制备方法在检测中药材或中药材饮片中二氧化硫残留量的应用。
[0029]上述检测试剂盒、其制备方法在检测食品中二氧化硫残留量的应用。
[0030]与现有技术相比，本申请具备以下优点:
[0031]1.安全无毒:所使用的药均对人体无毒副作用的试剂，反应产物也无毒；
[0032]2.使用方便，无需实验室专业测试人员和检测设备，适宜日常检测；
[0033]3.稳定性好，溶液中添加了碘化钾后单质碘就和碘化钾形成碘配离子，使碘不易挥发，并且增加了碘的溶解度；
[0034]4.颜色变化明显，实验前后颜色变化明显。
[0035]5.检测限低，实验室研究表明，该试纸的检测限可以达到50mg/kg (以二氧化硫计)；能粗略定量，可比照二氧化硫标准比色卡初步确定中药材及饮片中的二氧化硫残留量，确定中药材及饮片中的二氧化硫残留量是否超过《中国药典》(2010年版)第二增补本(2013年)的限量标准。
[0036]试纸采用避光的塑料盒包装，保存期一年。
[0037]本发明能用于检测含有二氧化硫或亚硫酸根的待测物，包括中药材、食品等。
[0038]由于硫熏技术或二氧化硫消毒技术在各行业的应用很广泛，导致很多可食性商品含有不同程度的二氧化硫残留；加上人们对食品安全问题也来越重视，急需一种快速检测方法。但是现有的二氧化硫检测都需要专业的设备和技术，目前缺乏适合普通消费者使用的技术。本发明能够弥补市场的空白，因此在普通商品的检测中有很大的应用前景。【专利附图】
【附图说明】
[0039]以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中:
[0040]图1为本发明的二氧化硫残留量标准比色卡；
[0041]图2为根据本发明的试剂检测药材含硫量的结果，其中，A:无硫山药、B:高硫熏山药(SO2 残留约为 1300mg/kg)、C:低硫山药(SO2:70mg/kg)、D:硫熏白苟(SO2:1000mg/kg)。
【具体实施方式】
[0042]实施例1本发明的试剂盒的制备
[0043]将层析滤纸在室温浸溃液中浸溃I?2min后，取出放在平板上，在_20°C的冰箱中冷藏20?30min后,取出自然干燥，然后截切成长为4.0?6.0cm,宽为0.8?1.2cm的试纸条。
[0044]所述浸溃液由溶液A和溶液B按1000:3混合而成,溶液A配制方法如下:取Img的淀粉和0.05mg的羧甲基纤维素钠溶于IOOmL水中，加热煮沸使上述两种物质充分溶解，冷却，然后添加0.05mg的碘化钾；溶液B为5?15% (w/v)碘的无水乙醇溶液。
[0045]标准比色卡制备:以检测时取样量为0.1g药材溶于2mL水中计，用亚硫酸氢钠配制浓度分别为 50、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300mg/kg (以二氧化硫计)的溶液，分别用检测的试纸一端浸润到溶液中约3秒后拿出，观察试纸颜色变化并与浸润了水的试纸比较，将显色后的试纸扫描，依浓度梯度制作成标准比色卡。
[0046]实施例2本发明的试剂盒的制备
[0047]将层析滤纸在室温浸溃液中浸溃I?2min后，取出放在平板上，在_20°C的冰箱中冷藏20?30min后,取出自然干燥，然后截切成长为4.0?6.0cm,宽为0.8?1.2cm的试纸条。
[0048]所述浸溃液由溶液A和溶液B按1000:3混合而成,溶液A配制方法如下:取5mg的淀粉和0.2mg的羧甲基纤维素钠溶于IOOmL水中，加热煮沸使上述两种物质充分溶解，冷却，然后添加0.5mg的碘化钾；溶液B为15% (w/v)碘的无水乙醇溶液。
[0049]标准比色卡制备:以检测时取样量为0.1g药材溶于2mL水中计，用亚硫酸氢钠配制浓度分别为 50、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300mg/kg (以二氧化硫计)的溶液，分别用检测的试纸一端浸润到溶液中约3秒后拿出，观察试纸颜色变化并与浸润了水的试纸比较，将显色后的试纸扫描，依浓度梯度制作成标准比色卡。
[0050]实施例3本发明的试剂盒的制备
[0051]将层析滤纸在室温浸溃液中浸溃I?2min后，取出放在平板上，在_20°C的冰箱中冷藏20?30min后,取出自然干燥，然后截切成长为4.0?6.0cm,宽为0.8?1.2cm的试纸条。
[0052]所述浸溃液由溶液A和溶液B按1000:3混合而成，溶液A配制方法如下:取2mg的淀粉和0.1mg的羧甲基纤维素钠溶于IOOmL水中，加热煮沸使上述两种物质充分溶解，冷却，然后添加0.2mg的碘化钾；溶液B为10% (w/v)碘的无水乙醇溶液。
[0053]标准比色卡制备:以检测时取样量为0.1g药材溶于2mL水中计，用亚硫酸氢钠配制浓度分别为 50、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300mg/kg(以二氧化硫计)的溶液，分别用检测的试纸一端浸润到溶液中约3秒后拿出，观察试纸颜色变化并与浸润了水的试纸比较，将显色后的试纸扫描，依浓度梯度制作成标准比色卡，见图1。
[0054]实施例4本发明的试剂盒的使用
[0055]称取待测的中药材或饮片0.1g溶于2mL水中，震汤Imin,待不溶物沉淀后检测。
[0056]取一张试纸条浸润到溶液中约3秒，观察试纸的颜色变化并与浸润了水的试纸比较，若蓝色褪去或颜色与浸润了水的试纸比较变浅了，则该被测中药材或饮片中含有二氧化硫，可与制作的标准比色卡对照，确定中药材或饮片的二氧化硫残留含量。
[0057]实施例5本发明的试剂盒的使用
[0058]选取如下药材进行试验，A:无硫山药、B:高硫熏山药(SO2残留约为1300mg/kg)、C:低硫山药(SO2:70mg/kg)、D:硫熏白苟(SO2:1000mg/kg)分别称取上述药材各0.1g溶于2mL水中，震荡lmin，待不溶物沉淀后用本发明的试纸根据实施例4的方法进行检测，试验结果详见附图2。通过试纸检测结果和使用《中国药典》(2010年版)“附录IX U 二氧化硫残留量测定法”进行检测结果比较接近，该试纸可以准确地确定中药材及饮片是否被硫熏，并且能根据颜色变化深浅得知SO2的残留量。
【权利要求】
1.一种用于检测二氧化硫残留量的试剂盒，所述试剂盒包括检测试纸和标准比色卡； 其中，所述检测试纸为层析滤纸，所述层析滤纸使用浸溃液浸溃；所述浸溃液溶液A和溶液B按体积比为1000:3的比例混合而成，溶液A为含有I~5%w/v的淀粉，0.05~0.2%w/V的羧甲基纤维素钠，0.05~0.5%w/V的碘化钾的水溶液；溶液B为5~15%w/v碘的无水乙醇溶液； 所述标准比色卡标识不同的二氧化硫标准溶液的浓度范围。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述标准比色卡标识的二氧化硫浓度的范围为0~1300mg/kg,标识精度为50~100mg/kg ； 优选地，所述标准比色卡标识的二氧化硫浓度的精度为50mg/kg。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述标准比色卡有十三个浓度范围，标识的二氧化硫浓度为 100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300mg/kg ； 优选地，所述标准比色卡有十五个浓度范围，标识的二氧化硫浓度为50、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300mg/kg。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其中，所述浸溃液由溶液A和溶液B按体积比为1000:3的比例混合而成，溶液A为含有2~3%w/v的淀粉，0.1~0.2%w/v的羧甲基纤维素钠，0.1~0.4%w/v的碘化钾的水溶液；溶液B为5~15%w/v碘的无水乙醇溶液。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，所述浸溃液由溶液A和溶液B按体积比为1000:3的比例混合而成，溶液A为含有2%w/v的淀粉，0.l%w/v的羧甲基纤维素钠，0.2%w/v的碘化钾的水溶液；溶液B为10%w/v碘的无水乙醇溶液。
6.权利要求1-5中任一项所述的试剂盒的制备方法，所述方法包括以下步骤: 1)检测试纸的制备: 将层析滤纸在浸溃液中浸溃I~2min ;然后将浸溃后的层析滤纸在-20°c的冰箱中冷藏20~30min，取出自然干燥，既得； 其中，所述浸溃液由溶液A和溶液B按体积比为1000:3的比例混合而成，所述溶液A配制方法如下:取I~5mg的淀粉和0.05~0.2mg的羧甲基纤维素钠溶于IOOmL水中，加热煮沸使上述两种物质充分溶解，冷却，然后添加0.05~0.5mg的碘化钾； 溶液B为5~15%w/v碘的无水乙醇溶液； 优选地，将所述干燥后的层析滤纸截切成长为4.0~6.0cm,宽为0.8~1.2cm的试纸条; 2)标准比色卡的制备，以检测时取样量为0.1g药材溶于2mL水中计，用亚硫酸氢钠配制以二氧化硫计不同标识浓度的溶液，分别将根据步骤I)制得的检测的试纸一端浸润到溶液中3秒后拿出，观察试纸颜色变化并与浸润了水的试纸比较，将显色后的试纸扫描，依浓度梯度制作成标准比色卡； 优选地，所述标识浓度为 100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300mg/kg ； 优选地，所述标识浓度为 50、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300mg/kg。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述浸溃液由溶液A和溶液B按体积比为1000:3的比例混合而成，所述溶液A配制方法如下:取2~3mg的淀粉和0.1~0.2mg的羧甲基纤维素钠溶于IOOmL水中，加热煮沸使上述两种物质充分溶解，冷却，然后添加0.1~0.4mg的碘化钾； 溶液B为5~15%w/v碘的无水乙醇溶液； 优选地，所述浸溃液由溶液A和溶液B按体积比为1000:3的比例混合而成，所述溶液A配制方法如下:取2mg的淀粉和0.1mg的羧甲基纤维素钠溶于1OOmL水中，加热煮沸使上述两种物质充分溶解，冷却，然后添加0.2mg的碘化钾； 溶液B为10%w/v碘的无水乙醇溶液。
8.—种二氧化硫残留量的检测方法，所述方法包括以下步骤: 1)称取待测的中药材或饮片溶于水中，其中，所述中药材或饮片与水的质量体积之比为0.1g:2mL，震荡l_3min，静置至不溶物沉淀并呈现上清液； 2)取所述的检测试纸浸润到步骤1)的上清液中，观察试纸的颜色变化并与浸润了水的试纸比较； 3)若蓝色褪去或颜色与浸润了水的试纸比较变浅了，则该被测中药材或饮片中含有二氧化硫，可与制作的标准比色卡对照，确定中药材或饮片的二氧化硫残留含量范围。
9.如权利要求1-5中任一项所述的检测试剂盒，权利要求6或7所述的制备方法，或权利要求8所述的检测方法在检测中药材或中药材饮片中二氧化硫残留量中的应用。
10.如权利要求1-5中任一项所述的检测试剂盒，权利要求6或7所述的制备方法，或权利要求8所述的检测方法 N在检测食品中二氧化硫残留量的应用。
【文档编号】G01N21/78GK103940811SQ201410088695
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年3月11日 优先权日:2014年3月11日
【发明者】郑玉忠, 张勇, 张振霞, 曹晖, 贺震旦, 詹华强, 向飞军, 许冬瑾, 马兴田 申请人:康美药业股份有限公司, 广东康美药物研究院有限公司