一种测定动物组织中残留苯并咪唑类药物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种测定动物组织中残留苯并咪挫类药物的方法。
【背景技术】
[0002] 寄生虫病是养殖业中最常见的一类疾病，每年造成了巨大的经济上损失，其中一 些寄生虫可W传播给人类，造成人体的感染。目前在肉产品中残留并对人具有较大危害的 主要是苯并咪挫类驱虫药。人们食用苯并咪挫类药物残留量超标的肉品后，就会造成严重 的不良影响，对人体造成直接的或通过环境和食物链的作用间接的产生急、慢性毒性作用， 引起寄生虫耐药性增强，从长远角度来看还会影响到养殖业的发展和市场的正常秩序。现 有的设及肉品中的该类风险因子主要包含W下几种：奥芬达挫、芬苯达挫、阿苯达挫、甲苯 咪挫、氣苯咪挫、嚷苯咪挫、丙氧苯咪挫等。因此为了保证广大民众的饮食安全，非常有必要 建立起准确度高的肉品中苯并咪挫类药物残留的检测方法。
[0003] 文献"高效液相色谱法同时测定动物组织中16种苯并咪挫类药物残留，林海丹等， 食品科学，2011，第32卷02期，第231-236页"公开了一种同时测定动物组织中包括阿苯咪 挫、奥芬达挫、芬苯达挫、氣苯咪挫、甲苯咪挫、嚷苯咪挫和丙氧苯咪挫等16种残留苯并咪挫 类药物的方法，在该方法中，用乙酸乙醋提取动物组织样品中的残留苯并咪挫类药物后，由 于动物组织样品成分复杂，需要先用正己烧脱除提取液中的类脂物，然后用MCX固相萃取柱 净化，去除基质干扰后，再上机检测。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是克服现有高效液相色谱法测定动物组织中苯并咪挫 类药物残留时需要经过复杂的脱脂和固相萃取净化处理的缺陷，提供了一种测定动物组织 中残留苯并咪挫类药物的方法，本发明样品预处理更为简单。
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：
[0006] -种测定动物组织中残留苯并咪挫类药物的方法，包括如下步骤：
[0007] (1)动物组织样品用乙酸乙醋提取，提取液蒸干；
[000引（2)将步骤（1)蒸干余下的残渣溶解，调节溶液至酸性后，加入净化剂聚N-乙締化 咯烧酬-二乙締苯横酸钢进行吸附，分离，再用碱液对净化剂进行解吸，得到的解吸液挥干；
[0009] (3)步骤（2)挥干得到的残渣用流动相溶解之后上高效液相色谱仪，进行色谱测 定。
[0010] 进一步，所述苯并咪挫类药物为阿苯达挫亚讽、阿苯达挫-2-氨基讽、阿苯达挫讽、 径基嚷苯咪挫、嚷苯达挫、奥苯达挫、2-氨基氣苯咪挫、芬苯达挫讽、奥芬达挫、甲苯咪挫、氣 苯咪挫、阿苯达挫、芬苯达挫。
[0011] 进一步，步骤(1)提取时，加入碱和抗氧化剂。
[0012] 更进一步，所述碱为氨氧化钢或氨氧化钟，所述抗氧化剂为二叔下基苯酪。
[0013] 更进一步，所述碱的浓度为l-5g/L。
[0014] 进一步，步骤(1)蒸干余下的残渣用乙腊溶解。
[0015] 进一步，步骤(2)调节溶液至酸性后，氨离子浓度为1-1.5mol/L。
[0016] 进一步，步骤(2)所述碱液为氨化乙腊。
[0017]进一步，所述氨化乙腊中氨的浓度化-2mol/L。
[0018] 进一步，步骤(3)的色谱条件:Ci8柱，流动相为乙腊-0.025mol/L乙酸锭溶液，梯度 洗脱，其中流动相中乙腊的体积百分比随时间的变化如下：
[0019] 0~15min，由20%线性变化至25%;
[0020] 15~28min，由25%线性变化至30%;
[0021] 28~38min，由30 %线性变化至60 %;
[0022] 38111111后，20%。
[0023] 本发明方法在测定动物组织中残留的苯并咪挫类药物时具有良好的准确度、灵敏 度和重现性。与现有高效液相色谱法测定动物组织中残留的苯并咪挫类药物样品前处理需 要经过复杂的脱脂和固相萃取柱处理相比，本发明采用聚N-乙締化咯烧酬-二乙締苯横酸 钢作为苯并咪挫类药物的净化剂，使净化操作更为简单便捷。
【附图说明】
[0024] 附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实 施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
[00巧]图1是13种苯并咪挫类化合物的色谱图。
【具体实施方式】
[0026] W下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实 施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[00打]一、测定方法 [002引1、样品前处理过程
[0029] 准确称取5. Og的肉品样品，加入20血的乙酸乙醋，0.15mL 50wt %氨氧化钢溶液和 1血Iwt %二叔下基苯酪溶液。超声提取lOmin之后，W1000化/min的转速离屯、5min，用一次 性滴管吸取上清液到茄型瓶中，提取两次，合并提取液，旋转蒸干。
[0030] 上述蒸干后余下的残渣用1.5mL乙腊溶解，满旋5min之后加入4.5mL 1.5mol/L盐 酸溶液，满旋均匀，震荡5min，将上述溶液转移到15ml离屯、管中，加入0.3g净化剂DVB-NVP- S化Na，震荡lOmin，完成之后W5000r/min的转速离屯、5min，倾倒出上层液，再向离屯、管中加 入lOmL 10%的氨化乙腊，满旋均匀之后，震荡10min，W5000r/min的转速离屯、lOmin，上清 液转移到另一离屯、管中，用氮气吹干。
[0031] 上清液吹干后所得的残渣用0.5mL乙腊溶解，超声5min，再加1.5mL 0.025mol/L乙 酸锭溶液，混合均匀，过0.22um复合滤膜，供高效液相色谱仪测定。
[0032] 氨化乙腊的配制:将市售25-28wt%浓氨水和乙腊按照体积比为10:90混合得到。
[0033] 2、色谱条件
[0034] Waters高效液相色谱仪带有二级阵列管检测器，采用waters公司Xbridge C18 (5um*4.6um*250um)色谱分离柱，流动相为乙腊(A)-0.025mol/L的乙酸锭溶液(B)，采用梯 度洗脱，流速为1.0ml/min，柱溫为30°C，进样量为10化L，梯度洗脱程序如下：
[00巧]0~15min，流动相中乙腊(A)的体积百分比由20%线性变化至25% ;
[0036] 15~28min，流动相中乙腊(A)的体积百分比由25%线性变化至30% ;
[0037] 28~38min，流动相中乙腊(A)的体积百分比由30%线性变化至60% ;
[0038] 38min后，流动相中乙腊(A)的体积百分比为20%。
[0039] 使用W上色谱条件，所有的13种苯并咪挫类化合物（阿苯达挫亚讽、阿苯达挫-2- 氨基讽、阿苯达挫讽、径基嚷苯咪挫、嚷苯达挫、奥苯达挫、2-氨基氣苯咪挫、芬苯达挫讽、奥 芬达挫、甲苯咪挫、氣苯咪挫、阿苯达挫、芬苯达挫)都能够很好的分离，其他杂质峰较少，能 够实现定性和定量判断，色谱图见图1。
[0040] 采用单因实验，在其他条件不变的情况下，改变净化剂的用量，探究加标回收率和 净化剂用量之间的关系，结果如表1所示：
[0041] 表1净化剂的用量对目标苯并咪挫化合物净化效果的影响
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[0043] 当净化剂用量在0.4g、0.5g和0.6g时，和0.3g的用量相比之下，回收率没有明显的 变化，从经济的角度出发，选择每5g样品加入净化剂0.3g。
[0044] 采用单因实验，在其他条件不变的情况下，改变氨化乙腊的用量，探究加标回收率 和氨化乙腊用量之间的关系，如表2所示。
[0045] 表2氨化乙腊对回收率的影响
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[0047] 氨化乙腊用量在14血、17mL和20mL时，和llmL的用量相比之下，回收率没有明显的 变化，从经济的