专利名称：：棉籽中敌草隆及其代谢产物残留量的测定方法
技术领域：
：本发明属于植物中农药残留量的测定
技术领域：
，涉及棉籽中敌草隆及其代谢产物残留量测定方法。
背景技术：
：除草剂(herbicide)是指可使杂草彻底地或选择地发生枯死的药剂。氯酸钠、硼砂、砒酸盐、三氯醋酸对于任何种类的植物都有枯死的作用，但由于这些均具有残留影响，所以不能应用于田地中。敌草隆为苯基取代脲类化合物，化学名称为N-(3，4-二氯苯基)-N',N'-二甲基脲。属于内吸型除草剂，能够抑制作物光合作用，用于防除非耕作区一般杂草。主要用于棉花、玉米、高梁、甘蔗、水稻、茶园、果园、葡萄园以及非耕地。其测定方法有液相方法、气相方法等。申请号200710022396公开了一种去除水中除草剂敌草隆的方法，它是采用介质阻挡放电方法对含除草剂敌草隆的水进行处理，将水体中的敌草隆降解；将污染物降解为二氧化碳、水和简单有机物，反应条件温和，可控制性较强，反应器设备及其操作比较简单。其他有关敌草隆及其代谢物在棉籽中的残留检测分析，目前国内并未见公开报道。
发明内容为了评价敌草隆及其代谢物在棉花中使用后的安全性，本发明公开了使用气相色谱-氮磷检测器(GC-NPD)法测定棉籽中敌草隆及其代谢产物残留量的方法，将敌草隆及其代谢物全部水解转化为3，4-DCA进行测定。最后使用气相色谱-氮磷检测器(GC-NPD)法测定。为实现上述目的，本发明提供如下的技术方案棉籽中敌草隆及其代谢产物残留量的测定方法，其特征在于按如下的步骤进行(1)水解反应1)称取20.Og样品置于30mL33%HCl溶液中；2)加入少量玻璃珠防暴沸，加入250mL40%冷却的NaOH溶液，加入20mL止泡剂，混合均勻；再加入2-5gZn和5-7mLTiCl3,加热回流反应2小时；蒸馏收集液体，并将反应液放于冰箱中冷藏；(2)萃取反应1)将收集的液体转入分液漏斗中，测其PH值，测其PH值。用20_40mL正己烷洗涤接收瓶，洗后转入上述分液漏斗中，振摇2-5min，收集下层水层。弃去上层。2)向下层水相中滴加2滴酚酞指示剂，搅拌下滴加40%NaOH溶液，至溶液变为粉红色并在Imin内不变回无色，再加2滴NaOH溶液，冷却15_20min；3)用正己烷50mLX2萃取，每次萃取振摇2-5min，静置10-15min，收集上层有机相经无水硫酸钠脱水，过滤，30°C水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，定容，采用气相色谱-氮磷检测器进行检测。本发明所述的测定方法，其中的止泡剂为二甲基硅油。本发明所述的测定方法，其中所述的样品包括棉花、棉籽、玉米、高梁、甘蔗、水稻或葡萄等残留量的测定。本发明所述的敌草隆(Diuron)3-(3，4-dichlorophenyl)-l，1-dimethylurea及其可转化为3，4-dichl0r0aniline的代谢物。化学名称N-3，4-二氯苯基-N’，N’-二甲基脲为内吸传导型谱除草剂。本发明测定棉籽中敌草隆及其代谢产物残留量的具体方法如下1试验材料1.1仪器与试剂仪器PEAutoSystemXL气相色谱仪(带氮磷检测器)色谱柱DB-l(30mX0.25mmX0.25μm)试剂HC1(分析纯)，NaOH(分析纯)，正己烷(色谱纯)，无水硫酸钠(分析纯)，酚酞指示剂(Ig酚酞，溶解于IOOmL乙醇中)，二甲基硅油，Zn,TiC13，标准样品敌草隆(99.6%),3，4-DCA(99.0%),敌草隆代谢物DCPU(99.5%),DCPMU(99.0%)反应装置图1。1.2色谱条件进样口温度250°C;检测器温度250°C；柱温80°C保持Imin，20°C/min到250°C保持3min；载气:N2(彡99.999%)；流速2·OmL/min；氢气流速2·OmL/min；空气流速100mL/min；补充气30mL/min；进样量2yL。1.3标准溶液配制准确称取敌草隆、DCPU,DCPMU、3，4-DCA各10.Omg,于50mL容量瓶中丙酮定容至刻。2样品制备2.1水解反应1)制备30mLHCL溶液IOmL浓盐酸+20mL蒸馏水放置于300mL接受瓶(三角瓶)中。称取20.Og样品置于IL反应瓶中(磨口圆底烧瓶)。2)加入少量玻璃珠防暴沸，加入250mL40%冷却的NaOH溶液，混合均勻。加入20mL二甲基硅油(止泡剂)，混合均勻。加入2gZn和5mLTiCL3，加后迅速将回流和蒸馏装置接好，蒸馏阀关闭，接上1中的接受瓶。冷凝管通自来水。(注若有油状或难溶物可加75mL正己烧。)3)加热，控制液体从回流冷凝管最下边的球状管中冷凝，回流反应2小时，计时从开始回流起。4)回流2小时后，打开蒸馏阀，稍提高加热温度进行蒸馏，收集120mL液体。5)将收集瓶放置于冷藏冰箱中。2.2萃取反应1)将冷却的蒸馏馏分转入分液漏斗中，测其PH值。用25mL正己烷洗涤接收瓶，洗后转入上述分液漏斗中，振摇2min，收集下层水层。弃去上层。2)向下层水相中滴加2滴酚酞指示剂，搅拌下滴加40%NaOH溶液，至溶液变为粉红色并在Imin内不变回无色，再加2滴NaOH溶液。冷却15min。3)用正己烷50mL，50mL萃取，每次萃取振摇2min，静置lOmin，收集上层有机相经无水硫酸钠脱水。过滤，并用正己烷洗涤无水硫酸钠。合并。30°C水浴下减压浓缩近干，氮气吹干。定容，GC检测。3、方法的检出限应用上述方法操作，在棉籽中分别添加敌草隆及其代谢物DCPU、DPCMU，添加浓度为0.05mg/kg。以仪器3倍信噪比S/N设定为仪器检出限，则方法最低检出浓度(mg/kg)=仪器检出限(ng)*稀释体积(mL)/[进样体积(ul)*取样量(g)。最后计算得方法检出限为0.05mg/kgo4、回收率和精密度实验在空白棉籽中添加敌草隆及其代谢物DCPU、DCPMU标准溶液，按上述方法进行提取、净化和测定。回收率见表1。试验表明，回收率符合农残检测要求，证明了该方法有较好的回收率和重复性。表1敌草隆及其代谢产物添加回收率试验<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>本发明公开的测定棉籽中敌草隆及其代谢产物残留量的具体方法与现有技术相比所具有的积极效果在于传统方法检测棉籽中敌草隆及其代谢物残留量，往往受杂质干扰强烈，3，4_二氯苯胺(3，4-DCA)稳定且易检测。因此，将敌草隆及其代谢物全部转化为3，4-DCA后用气谱测定，可准确测得敌草隆及其代谢物的残留量。本发明利用气相色谱来分析敌草隆及其代谢产物，重现性好，杂质干扰极少，准确度好，精密度高，能够满足农药残留检测的需要。图1反应装置图；图2.3，4_DCA标样图；图3棉籽添加图；图4棉籽空白图。具体实施例方式为了更充分的解释本发明的实施方法，提供了棉籽中敌草隆及其代谢产物残留量测定方法的制备实施实例。这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。其中所用的原料均有市售。实施例11)称取20.Og棉籽置于30mL33%HCl溶液中；2)加入少量玻璃珠防暴沸，加入250mL，40%冷却的NaOH溶液，加入止泡剂二甲基硅油，混合均勻；再加入3gZn和5mLTiCl3,加热回流反应2小时；蒸馏收集液体，并将反应液放于冰箱中冷藏；3)将收集的液体转入分液漏斗中，测其PH值，测其PH值。用20mL正己烷洗涤接收瓶，洗后转入上述分液漏斗中，振摇3min，收集下层水层。弃去上层4)向下层水相中滴加2滴酚酞指示剂，搅拌下滴加40%NaOH溶液，至溶液变为粉红色并在Imin内不变回无色，再加2滴NaOH溶液，冷却15min；5)用正己烷50mLX2萃取，每次萃取振摇2min，静置lOmin，收集上层有机相经无水硫酸钠脱水，过滤，30°C水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，定容，采用气相色谱-氮磷检测器进行检测。实施例21)称取10.Og玉米置于30mL33%HCl溶液中；2)加入少量玻璃珠防暴沸，加入250mL，40%冷却的NaOH溶液，加入止泡剂二甲基硅油，混合均勻；再加入3gZn和6mLTiCl3,加热回流反应2小时；蒸馏收集液体，并将反应液放于冰箱中冷藏；3)将收集的液体转入分液漏斗中，测其PH值，测其PH值。用40mL正己烷洗涤接收瓶，洗后转入上述分液漏斗中，振摇3min，收集下层水层。弃去上层4)向下层水相中滴加2滴酚酞指示剂，搅拌下滴加40%NaOH溶液，至溶液变为粉红色并在Imin内不变回无色，再加2滴NaOH溶液，冷却15min；5)用正己烷50mLX2萃取，每次萃取振摇2min，静置lOmin，收集上层有机相经无水硫酸钠脱水，过滤，30°C水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，定容，采用气相色谱-氮磷检测器进行检测。实施例31)称取20.Og高粱置于30mL33%HCl溶液中；2)加入少量玻璃珠防暴沸，加入250mL40%冷却的NaOH溶液，加入20mL止泡剂，混合均勻；再加入3gZn和6mLTiCl3,加热回流反应2小时；蒸馏收集液体，并将反应液放于冰箱中冷藏；3)将收集的液体转入分液漏斗中，测其PH值，测其PH值。用30mL正己烷洗涤接收瓶，洗后转入上述分液漏斗中，振摇3min，收集下层水层。弃去上层。4)向下层水相中滴加2滴酚酞指示剂，搅拌下滴加40%NaOH溶液，至溶液变为粉红色并在Imin内不变回无色，再加2滴NaOH溶液，冷却15_20min；5)用正己烷50mLX2萃取，每次萃取振摇3min，静置12min，收集上层有机相经无水硫酸钠脱水，过滤，30°C水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，定容，采用气相色谱-氮磷检测器进行检测。在详细说明的较佳实施例之后，熟悉该项技术人士可清楚地了解，在不脱离上述申请专利范围与精神下可进行各种变化与修改，凡依据本发明的技术实质对以上实施例所作任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围。且本发明亦不受说明书中所举实例实施方式的限制。权利要求棉籽中敌草隆及其代谢产物残留量的测定方法，其特征在于按如下的步骤进行(1)水解反应1)称取20.0g样品置于30mL33％HCl溶液中；2)加入少量玻璃珠防暴沸，加入250mL40％冷却的NaOH溶液，加入20mL止泡剂，混合均匀；再加入2-5gZn和5-7mLTiCl3，加热回流反应2小时；蒸馏收集液体，并将反应液放于冰箱中冷藏；(2)萃取反应1)将收集的液体转入分液漏斗中，测其PH值，测其PH值。用20-40mL正己烷洗涤接收瓶，洗后转入上述分液漏斗中，振摇2-5min，收集下层水层。弃去上层。2)向下层水相中滴加2滴酚酞指示剂，搅拌下滴加40％NaOH溶液，至溶液变为粉红色并在1min内不变回无色，再加2滴NaOH溶液，冷却15-20min；3)用正己烷50mL×2萃取，每次萃取振摇2-5min，静置10-15min，收集上层有机相经无水硫酸钠脱水，过滤，30℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，定容，采用气相色谱-氮磷检测器进行检测。2.权利要求1所述的测定方法，其中的止泡剂为二甲基硅油。3.权利要求1所述的测定方法，反应物水解时，若有油状或难溶物可加75mL正己烷。4.权利要求1所述的测定方法，其中所述的样品包括棉花、棉籽、玉米、高梁、甘蔗、水稻或葡萄等残留量的测定。全文摘要本发明涉及棉籽中敌草隆及其代谢产物残留量的测定方法，包括称取20.0g样品置于200mL10％HCl溶液中，加入少量玻璃珠防暴沸，加入250mL，40％冷却的NaOH溶液，再加入止泡剂，混合均匀；再加入2gZn和5mLTiCl3，加热回流反应2-4小时；蒸馏，将收集的液体分层，收集水层，弃去上层；向水层中滴加2滴酚酞指示剂，搅拌下滴加40％NaOH溶液，至溶液变为粉红色并在1min内不变回无色，再加2滴NaOH溶液，冷却15-20min；用正己烷50mLX2萃取，每次萃取振摇2min，静置10min，收集上层有机相经无水硫酸钠脱水，过滤，30℃水浴下减压浓缩近干，氮气吹干，定容，采用GC-NPD进行检测。本发明将敌草隆及其代谢物全部转化为3，4-DCA后用气谱测定，可准确测得敌草隆及其代谢物的残留量，能够满足农药残留检测的需要。文档编号G01N30/06GK101832979SQ20091022893公开日2010年9月15日申请日期2009年12月2日优先权日2009年12月2日发明者刘磊,宋淑荣,张玉婷,李娜,李辉,程奕,邵辉,郭永泽申请人:天津市农业科学院中心实验室