一种测定化妆品中激素残留量的方法

一种测定化妆品中激素残留量的方法
【专利摘要】本发明建立一种高效液相色谱-串联质谱同时测定化妆品中雌二醇、雌三醇、雌酮残留量的分析方法。不同品种的化妆品样品以甲醇为提取溶剂，超声提取30min，样品提取液经12000r/min的速度离心20min。选择乙腈和水(40∶60体积比)为流动相进行等梯度洗脱，流速为0.2mL／min，柱温为25℃，采用EclipseXDB-C18(2.1mm*150mm，5μm粒径)色谱柱进行分离。结果表明：三种激素的线性回归方程相关系数R在0.9983～0.9998之间，回收率在95.21％～106.19％之间。精密度在1.70％～4.82％之间。该方法简便，灵敏，快速，可靠，重现性好，适用于化妆品中激素的含量分析检测。
【专利说明】一种测定化妆品中激素残留量的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及对化妆品进行处理并同时测定化妆品中三种雌激素残留量的方法。
【背景技术】
[0002]雌激素主要具有控制附性器官和第二性征的作用，对体内糖、脂肪、蛋白质、盐等物质的代谢有不同程度的影响。直接作用于皮肤，具有促进毛发生长、防止皮肤老化、除皱、增加皮肤弹性等作用。但长期使用添加雌激素的化妆品会对人体产生有害作用并有致癌的危险。长期使用含雌性激素的化妆品会导致细胞癌、子宫内膜癌、乳腺癌和儿童性早熟等疾病。1987年，我国制订了《化妆品卫生标准》(GB7916-1987)，即现行《化妆品卫生规范》(2007)的最早版本，均明确规定:雌激素为禁用物质。因此，如何快速准确地测定化妆品中雌激素的残留量至关重要。
[0003]雌激素的检测方法主要有免疫法和色谱法。其中高效液相色谱(HPLC)法发展非常迅速，其主要优点是分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，可通过流动相的优化达到高的分离效率。同时质谱(MS)分析具有灵敏度高，样品用量少，分析速度快的特点。而高效液相色谱-串联质谱联(HPLC-MS)用则具有分离和鉴定同时进行的优点。研究发现，未见对化妆品中雌激素残留测定的HPLC-MS方法的相关报道。
[0004]本方法选用甲醇作为提取液，经过超声过滤后直接进样；以水-乙腈作为流动相，三种激素能够得到完全分离。本实验采用HPLC-MS的方法对化妆品中的雌激素残留进行定量分析检测。

【发明内容】

[0005]本发明的目的是提供一种同时测定化妆品中三种雌激素残留量的方法。
[0006]本发明的技术方案为:首先甲醇作为提取液，经过超声对化妆品进行处理，以水-乙腈作为流动相，用高效液相色谱-串联质谱的方法对化妆品中的雌激素进行定量分析检测。具体步骤如下:
[0007](I)样品处理
分别准确称7种待测试样各Ig置于25mL容量瓶中，先加入少量甲醇，超声30min使完全溶解，然后用甲醇定容至刻度，再以12000r / min的速度离心20min，取上清液经
0.45 μ m滤膜过滤放入进样瓶中，待测。
[0008](2)色谱及质谱条件
EclipseXDB_C18 色谱柱(150mmX2.1mm, 5 μ m 粒径)；流动相:乙腈:水(40: 60 体积比);检测波长:280nm ;流速:0.2mL / min ;压力:8.76MPa ;柱温:25°C。电离源=ESF电喷雾离子源；毛细管电喷雾电压:5.0kV ;加热毛细管温度为350°C，鞘气流速:1.2L / min ；辅助气流速:0.2L / min ;扫描范围:50?700m / z全离子质谱扫描。
[0009](3)混合标准溶液的配置
分别准确称三种激素标准品各0.00125g置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇勻。再分别将该浓度的混标液稀释成0.5 μ g / mL>l μ g / mL>5 μ g / mL>10 μ g /mL>15 μ g / mL>20 μ g / mL>50 μ g / mL经0.45 μ m滤膜过滤,取少许放入进样瓶中，待测。
[0010](4)结果精密度和准确度分析
在同一化妆品溶液中加入不同检测激素的标准溶液，在同样的色谱质谱优化条件下对样品进行加标回收实验，该方法所测元素回收率均在95.58%?106.19%范围内，证明该方法准确度高。并对该加标样品溶液中检测激素进行精密度分析，每种元素连续检测6次，相对标准偏差在1.70%?4.82%之间，证明该方法精密度好。
[0011]本发明用甲醇作为提取液，经过超声对化妆品进行处理，本实验采用HPLC-MS的方法对化妆品中的雌激素进行定量分析检测。该方法简单、准确、有效，能较好地应用于实际样品的分析。
【专利附图】

【附图说明】
图1是雌三醇、雌二醇和雌酮3种激素的全波长吸收色谱图；图2是雌三醇、雌二醇和雌酮3种激素的色谱图；图3是雌三醇、雌二醇和雌酮混合标准溶液的全扫描质谱图；图4是雌三醇、雌二醇和雌酮3种激素的质谱图。
【具体实施方式】
[0012]以下结合实施例进一步描述本发明。应该指出，本发明并非局限于下述实施例。
[0013]实施例
(I)样品处理
用环己烷萃取样品，萃取率低；且存在杂质干扰问题。目前，国内已有报道着重于样品的预处理方法和色谱条件选择，但烦琐的预处理过程导致回收率偏低。本实验拟选用甲醇作为提取液，经过超声过滤后直接进样，简化预处理步骤；以水-乙腈作为流动相，三种激素能够得到完全分离。而且在此色谱条件下，三种激素和样品中的峰能完全分离。
[0014](2)检测波长的选择
分别对雌三醇、雌二醇和雌酮的甲醇溶液(20yg / mL)进行全波长扫描，结果发现三种雌激素在207?280nm处有最大吸收，在280nm处三种激素的检测灵敏度高，分离效果好，故选择280nm作为检测波长，3种激素的最大吸收波长如【专利附图】

【附图说明】图1所示。
[0015](3)色谱流动性的选择
在化妆品卫生规范中，用甲醇和水作为流动相，反相C18柱对三种激素进行分离。但是按照规范的流动相条件，三种激素在这些反相色谱柱条件下均得不到完全分离，即使调整甲醇和水的比例也不能得到较好的分离。加入乙腈，用甲醇-乙腈-水作为流动相分离效果有所改善，调节不同的比例，结果表明体积比为40: 60的乙腈-水溶液为流动相时分离效佳，3种激素的色谱图如【专利附图】

【附图说明】图2所示。
[0016](4)流速的选择
在流动相V(乙腈):V(水)=40: 60条件下，考察了不同流速:0.2、0.4、0.6、0.8mL /min对分离度的影响,发现流速越小越好,且出峰较快,故选择0.2mL / min作为测定流速。
[0017](5)质谱条件的选择
根据3种激素化合物的化学电离性质，分别选用ESI+和ESI_作为离子化模式进行全扫描以选择适当的电离方式和分子离了峰。实验结果表明，三种激素在离子源ESI_电离方式下，可获得较为丰富的[Μ-Η]-母离子。3种混合标准溶液的全扫描质谱图如【专利附图】

【附图说明】图3所示，3种激素的质谱图如【专利附图】

【附图说明】图4所示。
[0018](3) HPLC-MS法所测三种雌激素的线性方程及相关系数
取 0.5 μ g / mL、lyg / mL>5 μ g / mL> 10 μ g / mL> 15 μ g / mL>20 μ g / mL、50yg / mL混合标准溶液，按上述色谱条件进行测定，记录峰面积，以进样浓度为横坐标，以峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，由下表中数据可以看出，各种待测元素的线性系数在
0.9983~0.9998之间。结果表明三种激素具有良好的线性关系。3种激素的线性方程及相关系数如表1所示。
表13种激素的线性方程及相关系数
【权利要求】
1.一种测定化妆品中激素残留量的方法，首先甲醇作为提取液，经过超声对化妆品进行处理，以水-乙腈作为流动相，用高效液相色谱-串联质谱的方法对化妆品中的雌激素进行定量分析检测。其特征步骤为: (1)色谱及质谱条件 EclipseXDB_C18 色谱 柱(150mmX2.1mm, 5 μ m 粒径)；流动相:乙腈:水(40: 60 体积比);检测波长:280nm ;流速:0.2mL / min ;压力:8.76MPa ;柱温:25°C。电离源=ESF电喷雾离子源；毛细管电喷雾电压:5.0kV ;加热毛细管温度为350°C，鞘气流速:1.2L / min ；辅助气流速:0.2L / min ;扫描范围:50~700m / z全离子质谱扫描。 (2)在同一化妆品溶液中加入不同检测激素的标准溶液，在同样的色谱质谱优化条件下对样品进行加标回收实验，该方法所测元素回收率均在95.58%~106.19%范围内，证明该方法准确度高。并对该加标样品溶液中检测激素进行精密度分析，每种元素连续检测6次，相对标准偏差在1.70%~4.82%之间，证明该方法精密度好。
【文档编号】G01N30/02GK103901126SQ201410013942
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年1月14日 优先权日:2014年1月14日
【发明者】闫清华, 杨理, 张文博, 解博红, 杨丽娟 申请人:新乡医学院