专利名称：一种中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法
技术领域：
本发明涉及化学物质的理化分析，具体涉及一种中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法。
背景技术：
科学研究表明长期或大剂量摄入亚硫酸盐可造成胃肠、肝脏的危害，二氧化硫可对雄性小鼠生殖系统产生损伤作用。自20世纪80年代起，对亚硫酸盐的安全性问题研究已越来越弓I起各国关注和重视。硫磺熏蒸或浸泡中药材的传统加工方法会导致中药材原药残留大量的二氧化硫及砷、汞等有毒有害物质。因此，《中华人民共和国药典》(2000年版)规定，除山药外，其他所有中药材原药不能用硫磺熏蒸或浸泡；2004年，国家食品药品监督管理局下发了《关于对中药材采用硫磺熏蒸问题的函复》(食药监市函[2004] 137号)，明确规定“对于在市场流通领域的部分中药材和中药饮片，通过采用硫磺熏蒸或浸泡达到外观漂白的行为， 应按违反《药品管理法》第四十九条、第七十五条的规定进行查处。” 2005年版药典则删除了山药、葛根两种仅存的允许在加工中使用硫磺熏蒸方法，并在增补本中增加了 “二氧化硫残留量检测法” ；2010年版药典全面取消硫磺熏蒸工艺，并正式收载“二氧化硫残留量测定法”(附录IX U)。《关于印发食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单(第一批)的通知》中也公布了可能违法添加的非食用物质吊白块及工业硫磺，表明国家不允许使用硫磺熏蒸或吊白块等亚硫酸盐处理中药材、中药饮片及食品以达到漂白、 增艳、保鲜、防腐等作用。硫磺熏蒸过程中产生二氧化硫气体，二氧化硫遇药材中的水分部分转化为亚硫酸盐，部分则与药材中的醇、醛、酮等以结合态亚硫酸盐类形式存在。亚硫酸盐(如亚硫酸钠 Na2SO3)、亚硫酸氢盐(如亚硫酸氢钠NaHSO3)、焦亚硫酸盐(如焦亚硫酸钠或偏重亚硫酸钠， Na2S2O5)、低亚硫酸盐(如连二亚硫酸钠，俗称保险粉，Na2S2O4)和次硫酸氢钠甲醛(俗称吊白块，NaHSO2 · HCHO · 2H20)等简称“亚硫酸盐”系列物质。由于该类物质具有与二氧化硫同样的强还原性，因而有很好的漂白、抗氧化和防腐等作用，同样，也给安全使用中药材、中药饮片带来极大隐患。目前检测中药材、中药饮片中是否存在二氧化硫残留的法定方法为蒸馏滴定法，该法使用玻璃仪器装置，体形较大，连接部件多，且使用氮气，操作时间过长， 必须在实验室内进行；而有部分研究尝试借鉴食品中二氧化硫的玫瑰副苯胺比色法或离子色谱法检测，但要么使用了有毒试剂四氯汞齐及处理条件较高，要么使用的仪器设备价格昂贵、体积较大、检测环境要求较高、处理条件严格，不便于开展现场监督使用。目前未见采用化学方法类的简便快速检测方法的研究，尤其未见利用滤纸作为分离、扩散、化学反应显色载体同时半定量检测中药材、中药饮片残留无机化学成分的方法研究，因此，本法的研究对于监督现场快速检测、及时暂扣不良商家违法加工、使用漂白增色剂的中药材、中药饮片更具现实意义。
发明内容
为克服上述技术缺陷，本发明的目的是提供一种中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，能快速半定量的实现对中药材、中药饮片中漂白增色剂残留检测。为实现上述目的，采用如下的技术方案本发明的一种中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法是将处理后的样品与氢氧化钠溶液反应，取上层澄清溶液2ml作为供试液；将所述2ml供试液加入装有无砷锌粒的西林瓶中，再加入2ml盐酸，混合均勻后，立即将铅或铜离子类试纸紧贴置于瓶口 ；如在10分钟内显黄棕色至银黑色，则初步判断样品中含有漂白增色剂。优选的，所述处理后的样品按如下方法得到取0. 5-2. Og的中药材、中药饮片，用剪刀剪成细小颗粒或研磨成细小颗粒。优选的，所述氢氧化钠溶液的质量体积百分比浓度为0. 125%。所述氢氧化钠溶液的体积为10ml。所述装有氢氧化钠溶液的具塞西林瓶的规格为15ml。优选的，所述无砷锌粒的总质量为0. 1-0. 3克。所述装有无砷锌粒的西林瓶的规格为IOml0优选的，所述铅铜离子类试纸选用直径为1. 5-2. 5cm的定性滤纸。所述铅或铜离子类试纸为醋酸铅试纸、醋酸铜试纸或硫酸铜试纸。优选的，所述漂白增色剂包括二氧化硫、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、低亚硫酸盐、焦亚硫酸盐和吊白块中的一种或多种。与现有技术相比，本发明的中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法具有携带方便、操作简单、检测快速、成本低廉、半定量测定、准确度高等优点；同时由于利用气体反应，可消除供试液背景颜色干扰，减少因样品背景颜色去除的繁杂处理过程，灵敏度高，专属性强，定位准确，效果理想。本发明检测方法极大缩短检测时间，适用于监督现场快速筛查中药材、中药饮片中漂白增色剂残留，同时进行半定量分析，既可在户外监督现场，又可在户内固定场所进行操作，无需其他检测仪器辅助检测，无检测环境与条件限制。 “亚硫酸盐”系列物质在碱性溶液中被吸收成游离的亚硫酸根而溶出，由于亚硫酸根较不稳定，故在无砷锌粒及盐酸溶液中，亚硫酸根与新产生的氢气反应生成硫化氢，从而可以与醋酸铅或硫酸铅、铜等起化学反应而形成硫化铅或硫化铜等棕褐色至黑色沉淀，进而据此判断样品中是否含亚硫酸盐类物质。同时本发明的方法利用一定直径圆形滤纸的扩散作用、 过滤作用达到消除样品溶液颜色背景干扰和复杂基质干扰，达到同时进行多组份半定量分离检测的目的。显色反应时形成的二氧化硫迅速与显色剂反应，并在滤纸上形成深浅不一的颜色，显色时间及颜色深浅随亚硫酸盐残留量的不同而不同，残留量大时则几乎立即显示棕色，在5-10分钟形成均勻颜色，并随时间的推移，颜色逐渐加深，最终变为棕褐色至银
里任
图1是检测亚硫酸钠及亚硫酸氢钠标准溶液反应60分钟显色图；图2是检测亚硫酸钠标准溶液反应10分钟显色图；图3是检测亚硫酸氢钠标准溶液反应10分钟显色4
图4是检测样品中部分样品的显色图；图5为用醋酸铅、醋酸铜、硫酸铜浸润试纸后，分别检测0.01 %,0. 005 %, 0. 002%,0. 001%,0. 0005%,0. 0002%,0. 0001% 的 Na2SO3 和 NaHSO3 以及用多种样品的实验结果图；图6是用离子色谱法检测二氧化硫的标准曲线图；图7是用离子色谱法检测二氧化硫的检测限图谱；图8是用离子色谱法检测甲醛溶液的图谱；图9是用离子色谱法检测亚硫酸钠标准品溶液的图谱；图10是用离子色谱法检测阳性样品(45#，麦冬)溶液的图谱；图11是用离子色谱法检测阳性样品(37#，太子参)溶液的图谱；图12是用离子色谱法检测阳性样品(42#，蒌皮)溶液的图谱；图13是用离子色谱法检测阴性样品(四#，桂枝)溶液的图谱。
具体实施例方式为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。实施例中所用到的仪器型号等信息如下天平Sartorius CP-225D。实施例中所用到的试剂来源等信息如下氢氧化钠分析纯，广州化学试剂厂，批号20080503-1，含量96. 0% ；盐酸分析纯，广州化学试剂厂(规格500ml，批号20090206-1，含量36. 0 % 38. 0% )；无砷锌粒分析纯，天津市化学试剂一厂，批号071013 ；醋酸铅(三水合乙酸铅)分析纯，广州化学试剂厂，批号20060501_1，含量 ^ 99. 5% ；硫酸铜分析纯，广州化学试剂厂，批号20060501-1，含量> 99.5% ；醋酸(36%乙酸)分析纯，广州化学试剂厂，20050501-2，含量36.0% 37.0% ；定性滤纸中性102，杭州新华纸业有限公司(Φ12. 5cm)；塑料吸管姜堰市康辉医疗器械有限公司C3ml，带刻度，一次性使用)；亚硫酸盐类标准品无水亚硫酸钠分析纯，广州化学试剂厂，批号20090201-2，含量> 97.0% ；亚硫酸氢钠分析纯，广州化学试剂厂，批号20060201-2，含量(以SO2 计)彡 58. 5% ；偏重亚硫酸钠分析纯，广州化学试剂厂，批号20081001-2，含量=96.0% ；样品57批(均采购自药房或超市)。实施例1 利用本发明的方法进行标准品的显色反应在本实施例中，以亚硫酸钠及亚硫酸氢钠为标准品。取亚硫酸钠及亚硫酸氢钠标准品各约IOg置IOOml量瓶中，加纯化水或蒸馏水适量溶解并稀释至刻度，作为各自的标准品贮备液。
取上述贮备液分别配制成质量体积百分比浓度为0. 0001%,0. 0002%,0. 0005%, 0. 001 %,0. 002 %,0. 005 %,0. 01 %,0. 02%,0. 05 % ,0. 1 % ,0. 2 % ,0. 5 % U % >2 % ,5 %,
10%等标准溶液，并分别取2ml按如下步骤进行显色反应(1)样品处理中药材、中药饮片取样量约为lg。将样品用剪刀(或研磨)剪成(或磨成)细小颗粒，待用。(2)供试液制备将上述样品置于装有IOml 0. 125%氢氧化钠溶液的具塞西林瓶中，该瓶的规格为 15ml，拧紧瓶塞，用力振摇1-2分钟，静置片刻，取上层澄清溶液2ml作为供试液。氢氧化钠溶液也可以这样配置得到在IOml纯化水中加入10%氢氧化钠溶液5-10滴。(3)显色反应与结果判断将上述2ml供试液加入装有无砷锌粒的西林瓶中，其中，该无砷锌粒2-3粒，约 0. 2g，该西林瓶的规格为10ml，再加入2ml的盐酸溶液，轻轻摇动使混合均勻，并立即将醋酸铅试纸紧贴置于瓶口。如在10分钟内显黄棕色至银黑色，则可判断样品中可能含有二氧化硫、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、低亚硫酸盐、焦亚硫酸盐、吊白块等漂白增色剂。本实施例的结果见图1-3。其中，图1是本实施例中亚硫酸钠及亚硫酸氢钠标准溶液反应60分钟的显色图；图2是本实施例中亚硫酸钠标准溶液反应10分钟的显色图；图3 是本实施例中亚硫酸氢钠标准溶液反应10分钟的显色图。结合该三组结果图，醋酸铅试纸从棕褐色逐渐变为黑色，浓度越高，显色越深，显色越快，几乎即时显示棕褐色。而且浓度为 0.2%以上的溶液亦立即变为乳白色至乳黄色混浊液。实施例2 利用本发明的方法进行样品的显色反应首先，制备供试液。将处理后的样品置于装有IOml 0. 125%氢氧化钠溶液的具塞西林瓶中，该瓶的规格为15ml，拧紧瓶塞，用力振摇1-2分钟，静置片刻，待分层，取上层溶液anl (必要时可过滤)作为供试液。然后进行显色反应。将上述供试液2ml置于装有无砷锌粒的西林瓶中，其中，该无砷锌粒2-3粒，约0. 2g，该西林瓶的规格为10ml，再加入2ml 的盐酸溶液，轻轻摇动使混合均勻，并立即将醋酸铅试纸紧贴置于瓶口。最后判断结果。如在10分钟内显黄褐色至银黑色，则可判断样品中可能含有二氧化硫、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、低亚硫酸盐、焦亚硫酸盐、吊白块等漂白增色剂。部分样品显色结果见图4。图4中，A 为样品14 (党参)处理后与试纸反应5分钟后的结果，B为样品24 (板蓝根)处理后与试纸反应4分钟后的结果，C为样品21 (黄芩)处理后与试纸反应8分钟后的结果，D为样品 19(牛膝)处理后与试纸反应20分钟后的结果，E为样品39(百部)处理后与试纸反应10 分钟后的结果，F为样品50 (猪苓)处理后与试纸反应10分钟后的结果，G为样品46 (桔梗)处理后与试纸反应10分钟后的结果，H为样品31 (当归)处理后与试纸反应10分钟后的结果，I为样品36 (知母)处理后与试纸反应10分钟后的结果，J为样品43 (山药)处理后与试纸反应10分钟后的结果。由图4可见，发应后出现黄棕色或银黑色，因此图中的样品都为阳性结果样品，即含有漂白增色剂残留。实施例3 滤纸的选择选用定性分析滤纸，剪成直径约2cm圆形(与西林瓶口吻合)，实验时分别先用醋酸铅、醋酸铜、硫酸铜等试液浸润后待用。实验时分别用上述已制备好的滤纸置于西林瓶
6口反应，实验结果见图5，图5为用醋酸铅、醋酸铜、硫酸铜浸润试纸后，分别检测0. 01 %、 0. 005%,0. 002%,0. 001%,0. 0005%,0. 0002%,0. 0001% 的 Na2SO3 和 NaHSO3 以及用多种样品的实验结果图。由图5可见，浓度大于0.002%时，亚硫酸盐标准溶液及样品均能有较好的显色反应。故根据日常实验要求，选用实验室常用试液醋酸铅进行浸润作用本方法显色滤纸，其他品种亦可作为替代品。实施例4 样品取样量及供试品液体积确定为了适应快筛方法要求的实验器材简便、小巧的特点，本方法首先将15ml以下的西林瓶及塑料瓶确定为实验用瓶进行试验。由于药材切碎后较为蓬松，尤其是花类、果实及种子类、菌、藻、地衣类、皮类等药材，为了确保残留亚硫酸盐类物质的充分提取，以及检测限的确定，经试验摸索，确定样品取样量为0. 5-2. Og,以Ig作为基础，可根据实验现象进行适当调整取样量，特别是含淀粉类较多的药材，可适当减少取样量，以免显色时形成浆糊状液而妨碍反应，影响显色效果。而供试液则取2ml作为基础，再根据样品的具体情况适当增减，以提高检出率。实施例5 显色条件的确定(1)显色时间选用不同浓度亚硫酸钠、亚硫酸氢钠系列标准溶液，按上述检测与评价方法进行显色试验，结果见表1和表2，其中，表1是亚硫酸钠标准溶液的显色结果记录表，表2是亚硫酸氢钠标准溶液的显色结果记录表。表 权利要求
1.一种中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，其特征在于，将处理后的样品与氢氧化钠溶液反应，取上层澄清溶液2ml作为供试液；将所述2ml供试液加入装有无砷锌粒的西林瓶中，再加入2ml盐酸，混合均勻后，立即将铅或铜离子类试纸紧贴置于瓶口 ；如在10分钟内显黄棕色至银黑色，则初步判断样品中含有亚硫酸盐类漂白增色剂。
2.根据权利要求1所述的中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，其特征在于，所述处理后的样品按如下方法得到取0. 5-2. Og的中药材、中药饮片，用剪刀剪成细小颗粒或研磨成细小颗粒。
3.根据权利要求1所述的中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，其特征在于，所述氢氧化钠溶液的质量体积百分比浓度为0. 125%。
4.根据权利要求1所述的中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，其特征在于，所述氢氧化钠溶液的体积为10ml。
5.根据权利要求1所述的中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，其特征在于，所述装有氢氧化钠溶液的具塞西林瓶的规格为15ml。
6.根据权利要求1所述的中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，其特征在于，所述无砷锌粒的总质量为0. 1-0. 3克。
7.根据权利要求1所述的中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，其特征在于，所述装有无砷锌粒的西林瓶的规格为10ml。
8.根据权利要求1所述的中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，其特征在于，所述铅或铜离子类试纸选用直径为1. 5-2. 5cm的定性滤纸。
9.根据权利要求1所述的中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，其特征在于，所述铅或铜离子类试纸为醋酸铅试纸、醋酸铜试纸或硫酸铜试纸。
10.根据权利要求1所述的中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，其特征在于，所述漂白增色剂包括二氧化硫、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、低亚硫酸盐、焦亚硫酸盐和吊白块中的一种或多种。
全文摘要
本发明提供了一种中药材、中药饮片中漂白增色剂残留的半定量检测方法，将处理后的样品与氢氧化钠溶液反应，取上层澄清溶液2ml作为供试液；将所述2ml供试液加入装有无砷锌粒的西林瓶中，再加入2ml盐酸，混合均匀后，立即将铅或铜离子类试纸紧贴置于瓶口；如在10分钟内显黄棕色至银黑色，则初步判断样品中含有亚硫酸盐类漂白增色剂。铅或铜离子类试纸为醋酸铅试纸、醋酸铜试纸或硫酸铜试纸。本发明的检测方法具有携带方便、操作简单、检测快速、成本低廉、半定量测定、准确度高等优点；极大缩短检测时间，适用于监督现场快速筛查中药材、中药饮片中漂白增色剂残留，同时进行半定量分析。
文档编号G01N21/78GK102156123SQ20101011650
公开日2011年8月17日 申请日期2010年2月12日 优先权日2010年2月12日
发明者严全鸿, 林奇艺, 林锦锋, 谢志洁 申请人:广东省药品检验所