无糖型赖氨葡锌颗粒及其质量检测方法
【专利摘要】本发明涉及无糖型赖氨葡锌颗粒及其质量检测方法。具体地说，本发明属于医药【技术领域】，涉及一种补充赖氨酸和锌特别是葡萄糖酸锌的组合物，特别是涉及一种用于补充赖氨酸和锌特别是葡萄糖酸锌的颗粒剂，更特别地是涉及一种用于补充赖氨酸和锌特别是葡萄糖酸锌的无糖型颗粒剂。本发明还涉及一种对所述无糖型赖氨葡锌颗粒进行质量检测的方法。本发明提供的赖氨葡锌颗粒为矿物质类非处方药药品。临床上用于防治小儿及青少年因缺乏赖氨酸和锌而引起的生长发育迟缓、营养不良及食欲缺乏等。赖氨葡锌颗粒所含赖氨酸是维持人体氮平衡的必须氨基酸之一，具有促进人体生长的作用；锌为体内多种酶的重要组成成份，具有促进生长发育、改善味觉的作用。
【专利说明】无糖型赖氨葡锌颗粒及其质量检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，涉及一种补充赖氨酸和锌特别是葡萄糖酸锌的组合物，特别是涉及一种用于补充赖氨酸和锌特别是葡萄糖酸锌的颗粒剂，更特别地是涉及一种用于补充赖氨酸和锌特别是葡萄糖酸锌的无糖型颗粒剂。本发明还涉及一种对所述无糖型赖氨葡锌颗粒进行质量检测的方法。
【背景技术】
[0002]赖氨酸，也称为L-赖氨酸盐酸盐，是一种必需氨基酸。赖氨酸英文名lysine，缩写Lys，氨基酸单字母缩写K，其化学式为H2NCH2CH2CH2CH2CH (NH2)COOH,分子式=C6H14N2O2，分子量146.19，CAS号56-87-1，化学结构式为:
[0003]
【权利要求】
1.测定无糖型赖氨葡锌颗粒剂中盐酸赖氨酸含量的方法，其中所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂包括:盐酸赖氨酸、葡萄糖酸锌、枸橼酸和甘露醇，该方法是使用柱前衍生化高效液相色谱法进行测定的。
2.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项: 其是先使供试品进行柱前衍生化反应，再对该反应产物进行高效液相色谱法测定； 其中进行柱前衍生化的衍生化试剂是2，4- 二硝基氟苯； 其中进行柱前衍生化反应是在弱碱存在下进行的； 所述弱碱选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾； 在进行柱前衍生化反应时，盐酸赖氨酸与所述弱碱的重量比为1:20?200,例如重量比为1:30?150，例如重量比为1:40?120，例如重量比为1:50?100 ； 其中在进行柱前衍生化反应时，盐酸赖氨酸与所述2，4-二硝基氟苯的重量比为1:5?15，例如重量比为1:7.5?12.5，例如重量比为1:10 ； 其中所述柱前衍生化的反应是照如下方式进行的:取含盐酸赖氨酸25mg的供试品(即本发明的无糖型赖氨葡锌颗粒剂)，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液Iml置50ml量瓶中，加浓度为4_6%的弱碱溶液(盐酸赖氨酸与所述弱碱的重量比为1:20?200，例如重量比为1:30?150，例如重量比为1:40?120，例如重量比为1:50?100)与浓度为0.8?1.2%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液(盐酸赖氨酸与所述2，4-二硝基氟苯的重量比为1:5?15，例如重量比为1:7.5?12.5，例如重量比为1:10)，摇勻，置60°C水浴中暗处加热，间隔1min振摇I次，经过30min后取出，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，作为测试溶液；和/或 所述柱前衍生化的反应是照如下方式进行的:取含盐酸赖氨酸25mg的供试品(即本发明的无糖型赖氨葡锌颗粒剂)，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液Iml置50ml量瓶中，加5%碳酸氢钠溶液1.0ml与1%的2，4-二硝基氟苯乙腈溶液1.0ml,摇勻，置60°C水浴中暗处加热，间隔1min振摇I次,经过30min后取出，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，作为测试溶液。
3.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项: 所述高效液相色谱法使用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱； 所述高效液相色谱法使用的流动相为乙腈与磷酸二氢钾缓冲液以体积比40?60:50(例如50:50)的混合液； 所述磷酸二氢钾缓冲液是照如下方法配制的:称取磷酸二氢钾2.72g，用水100ml溶解，加25%的四甲基氢氧化铵4-6ml (例如4.5-5.5ml，例如5ml)，摇匀，用磷酸调节pH3.2，即得； 所述高效液相色谱法使用的柱温为35?45°C，例如38-42°C，例如40°C ； 所述高效液相色谱法使用的检测波长为350-370nm，例如360nm ;和/或 其包括以下步骤: 照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸二氢钾缓冲液(称取磷酸二氢钾2.72g，用水100ml溶解，加25 %的四甲基氢氧化铵5ml，摇匀，用磷酸调节PH3.2) (50:50);柱温40°C ;检测波长360nm ;理论塔板数按盐酸赖氨酸峰计算不低于5000 ;赖氨酸与相邻杂质峰的分离度符合要求； 测定法:取供试品适量(约相当于盐酸赖氨酸25mg)，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液Iml置50ml量瓶中，加5%碳酸氢钠溶液1.0ml与1%的2，4-二硝基氟苯乙腈溶液1.0ml，摇匀，置60°C水浴中暗处加热，间隔1min振摇I次，经过30min后取出，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10 μ I注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸赖氨酸对照品适量，同法处理并测定；按外标法以峰面积计算供试品中盐酸赖氨酸的含量，即得。
4.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项: 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中葡萄糖酸锌的量为30?40重量份，例如32?38重量份，例如34?36重量份，例如35重量份； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中枸橼酸的量为10?15重量份,例如11?14重量份,例如12?13重量份,例如12.5重量份； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中甘露醇的量为2000?3500重量份，例如2500?3000重量份，例如2600?2800重量份，例如2650?2750重量份； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂中还包括淀粉； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中淀粉的量为50?200重量份，例如75?175重量份，例如100?150重量份； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂在温度25±1°C、相对湿度75%的条件下放置24小时，吸湿增重百分数小于10%,例如小于5%,例如小于4%,例如小于3% ； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂照中国药典2010年版二部附录IX E第二法双筛分法检查，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不超过供试量的15%，例如不超过供试量的10% ；所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂照中国药典2010年版二部附录珊L干燥失重测定法测定，在105°C干燥至恒重，减失重量小于5%，例如小于4%，例如小于3%，例如小于2% ； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂中所述淀粉是以粘合剂的形式添加到所述组合物中的；所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂中所述淀粉是以湿法制粒的粘合剂的形式添加到所述组合物中的； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂是通过湿法制粒的方式制备得到的； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂是通过在流化床中进行湿法制粒并干燥的方式制备得到的；和/或 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂基本上是通过包括如下步骤的方法制备得到的: (1)使枸橼酸溶解于适量水(例如水的量为枸橼酸重量的70?120倍，例如80?110倍)中，再依次加入葡萄糖酸锌、盐酸赖氨酸并使其溶解，得到澄清溶液； (2)再将适量淀粉(例如约占处方量的40?60%，例如约占处方量的50%)用2倍重量的水调成糊状，再与步骤(I)所得溶液混合均匀，搅拌同时开启加热升温至60°C?80°C，得溶液I，备用； (3)将余量淀粉用6?10倍(例如8倍)重量的水调成糊状，搅拌同时开启加热升温至60°C?80°C，得溶液II，备用； (4)将处方量的甘露醇投入流化床制粒机中，混合5min，开启加热至60°C?80°C，喷入液溶I，接着喷入溶液II; (5)使物料在流化床中在60V?80 °C温度下干燥30?60min,至干燥失重测定法测定的减失重量小于1.5%，出料备用； (6)整粒:将颗粒过筛，收集15-50目之间的颗粒，密封包装，即得。
5.测定无糖型赖氨葡锌颗粒剂中盐酸赖氨酸有关物质含量的方法，其中所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂包括:盐酸赖氨酸、葡萄糖酸锌、枸橼酸和甘露醇，该方法是使用柱前衍生化高效液相色谱法进行测定的。
6.根据权利要求5的方法，其特征在于以下任一项或多项: 其是先使供试品进行柱前衍生化反应，再对该反应产物进行高效液相色谱法(通常亦可称为HPLC)测定； 其中进行柱前衍生化的衍生化试剂是2，4- 二硝基氟苯； 其中进行柱前衍生化反应是在弱碱存在下进行的； 所述弱碱选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾； 在进行柱前衍生化反应时，盐酸赖氨酸与所述弱碱的重量比为1:20?200,例如重量比为1:30?150，例如重量比为1:40?120，例如重量比为1:50?100 ； 在进行柱前衍生化反应时，盐酸赖氨酸与所述2，4- 二硝基氟苯的重量比为1:5?15,例如重量比为1:7.5?12.5，例如重量比为1:10 ； 其中所述柱前衍生化的反应是照如下方式进行的:取含盐酸赖氨酸25mg的供试品(即本发明的无糖型赖氨葡锌颗粒剂)，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液Iml置1ml量瓶中，加浓度为4_6%的弱碱溶液(盐酸赖氨酸与所述弱碱的重量比为1:20?200，例如重量比为1:30?150，例如重量比为1:40?120，例如重量比为1:50?100)与浓度为0.8?1.2%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液(盐酸赖氨酸与所述2，4-二硝基氟苯的重量比为1:5?15，例如重量比为1:7.5?12.5，例如重量比为1:10)，摇勻，置60°C水浴中暗处加热，间隔1min振摇I次，经过30min后取出，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，作为测试溶液；和/或 所述柱前衍生化的反应是照如下方式进行的:取含盐酸赖氨酸25mg的供试品(即本发明的无糖型赖氨葡锌颗粒剂)，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液Iml置1ml量瓶中，加5%碳酸氢钠溶液2.0ml与1%的2，4-二硝基氟苯乙腈溶液1.0ml,摇勻，置60°C水浴中暗处加热，间隔1min振摇I次,经过30min后取出，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，作为测试溶液。
7.根据权利要求5的方法，其特征在于以下任一项或多项: 所述高效液相色谱法使用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱； 所述高效液相色谱法使用两种流动相进行梯度洗脱，其中流动相A为磷酸二氢钾缓冲液，流动相B为乙腈。在一个实施方案中，所述磷酸二氢钾缓冲液是照如下方法配制的:称取磷酸二氢钾2.72g，用水100ml溶解，加25%的四甲基氢氧化铵4_6ml (例如4.5-5.5ml，例如5ml)，摇匀，用磷酸调节pH3.2，即得。在一个实施方案中，所述梯度洗脱的程序为:
时间(min)流动相A(%)流动相B(%)OSO2058020206040604060702575 70.018020 758020 ； 所述高效液相色谱法使用的柱温为25?35°C，例如28-32°C，例如30°C ； 所述高效液相色谱法使用的检测波长为350-370nm，例如360nm ;和/或 其包括以下步骤: 溶液配制:取供试品适量(约相当于盐酸赖氨酸25mg)，精密称定，置25ml量瓶中，力口水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液Iml置1ml量瓶中，加5%碳酸氢钠溶液2.0ml与1%的2，4-二硝基氟苯乙腈溶液1.0ml，摇匀，置60°C水浴中暗处加热，间隔1min振摇I次，经过30min后取出，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取Iml置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取处方比例的空白辅料，按供试品溶液配置方法同法操作，作为空白辅料溶液； 照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定， 色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为磷酸二氢钾缓冲液(称取磷酸二氢钾2.72g，用水100ml溶解，加25%的四甲基氢氧化铵5ml，摇匀，用磷酸调节PH3.2);流动相B为乙腈，按下表进行线性梯度洗脱；检测波长为360nm ;柱温30°C ;理论塔板数按盐酸赖氨酸峰计算不低于3000，盐酸赖氨酸与相邻杂质峰的分离度应符合要求；
时间(min)流动相A(%)流动相B(%)OSI)205802020604060406070257570.018020 7580—,II ； 测定:取对照溶液10 μ I注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液、对照溶液和空白辅料溶液各10μ 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图； 计算:供试品溶液色谱图中如有杂质峰，扣除空白辅料峰，扣除任何小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰，按自身对照法计算各单一杂质的量，即得。
8.根据权利要求5的方法，其特征在于以下任一项或多项: 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中葡萄糖酸锌的量为30?40重量份，例如32?38重量份，例如34?36重量份，例如35重量份； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中枸橼酸的量为10?15重量份,例如11?14重量份,例如12?13重量份,例如12.5重量份； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中甘露醇的量为2000?3500重量份，例如2500?3000重量份，例如2600?2800重量份，例如2650?2750重量份； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂中还包括淀粉； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中淀粉的量为50?200重量份，例如75?175重量份，例如100?150重量份； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂在温度25土1°C、相对湿度75%的条件下放置24小时，吸湿增重百分数小于10%,例如小于5%,例如小于4%,例如小于3% ； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂照中国药典2010年版二部附录IX E第二法双筛分法检查，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不超过供试量的15%，例如不超过供试量的10% ；所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂照中国药典2010年版二部附录珊L干燥失重测定法测定，在105°C干燥至恒重，减失重量小于5%，例如小于4%，例如小于3%，例如小于2% ； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂中所述淀粉是以粘合剂的形式添加到所述组合物中的；所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂中所述淀粉是以湿法制粒的粘合剂的形式添加到所述组合物中的； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂是通过湿法制粒的方式制备得到的； 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂是通过在流化床中进行湿法制粒并干燥的方式制备得到的；和/或 所述无糖型赖氨葡锌颗粒剂基本上是通过包括如下步骤的方法制备得到的: (1)使枸橼酸溶解于适量水(例如水的量为枸橼酸重量的70?120倍，例如80?110倍)中，再依次加入葡萄糖酸锌、盐酸赖氨酸并使其溶解，得到澄清溶液； (2)再将适量淀粉(例如约占处方量的40?60%，例如约占处方量的50%)用2倍重量的水调成糊状，再与步骤(I)所得溶液混合均匀，搅拌同时开启加热升温至60°C?80°C，得溶液I，备用； (3)将余量淀粉用6?10倍(例如8倍)重量的水调成糊状，搅拌同时开启加热升温至60°C?80°C，得溶液II，备用； (4)将处方量的甘露醇投入流化床制粒机中，混合5min，开启加热至60°C?80°C，喷入液溶I，接着喷入溶液II ; (5)使物料在流化床中在60V?80 °C温度下干燥30?60min,至干燥失重测定法测定的减失重量小于1.5%，出料备用； (6)整粒:将颗粒过筛，收集15-50目之间的颗粒，密封包装，即得。
9.一种的组合物，其为无糖型赖氨葡锌颗粒剂，并且其包括:盐酸赖氨酸、葡萄糖酸锌、枸橼酸和甘露醇。
10.根据权利要求9的组合物，其特征在于以下任一项或多项: 以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中葡萄糖酸锌的量为30?40重量份，例如32?38重量份，例如34?36重量份，例如35重量份； 以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中枸橼酸的量为10?15重量份，例如11?14重量份，例如12?13重量份，例如12.5重量份； 以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中甘露醇的量为2000?3500重量份，例如2500?3000重量份，例如2600?2800重量份，例如2650?2750重量份； 其中还包括淀粉； 以每125重量份的盐酸赖氨酸计，其中淀粉的量为50?200重量份，例如75?175重量份，例如100?150重量份； 其在温度25土 I°C、相对湿度75%的条件下放置24小时，吸湿增重百分数小于10%，例如小于5%，例如小于4%，例如小于3% ； 其照中国药典2010年版二部附录IX E第二法双筛分法检查，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不超过供试量的15%，例如不超过供试量的10% ； 其照中国药典2010年版二部附录VDIL干燥失重测定法测定，在105°C干燥至恒重，减失重量小于5%，例如小于4%，例如小于3%，例如小于2% ； 其中所述淀粉是以粘合剂的形式添加到所述组合物中的； 其中所述淀粉是以湿法制粒的粘合剂的形式添加到所述组合物中的； 其是通过湿法制粒的方式制备得到的； 其是通过在流化床中进行湿法制粒并干燥的方式制备得到的；和/或 其基本上是通过包括如下步骤的方法制备得到的: (1)使枸橼酸溶解于适量水(例如水的量为枸橼酸重量的70?120倍，例如80?110倍)中，再依次加入葡萄糖酸锌、盐酸赖氨酸并使其溶解，得到澄清溶液； (2)再将适量淀粉(例如约占处方量的40?60%，例如约占处方量的50%)用2倍重量的水调成糊状，再与步骤(I)所得溶液混合均匀，搅拌同时开启加热升温至60°C?80°C，得溶液I，备用； (3)将余量淀粉用6?10倍(例如8倍)重量的水调成糊状，搅拌同时开启加热升温至60°C?80°C，得溶液II，备用； (4)将处方量的甘露醇投入流化床制粒机中，混合5min，开启加热至60°C?80°C，喷入液溶I，接着喷入溶液II ; (5)使物料在流化床中在60°C?80 °C温度下干燥30?60min,至干燥失重测定法测定的减失重量小于1.5%，出料备用； (6)整粒:将颗粒过筛，收集15-50目之间的颗粒，密封包装，即得； 进一步地，如本发明说明书第四、五、六任一方面任一实施方案所述。
【文档编号】G01N30/02GK104173327SQ201410459820
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年9月10日 优先权日:2014年9月10日
【发明者】郑敬操 申请人:郑敬操