一种海水中氟甲喹手性对映体的检测方法
【专利摘要】一种海水中氟甲喹手性对映体的检测方法，其特征在于步骤：取养殖海水80?llOmL于烧杯中，加入氟甲喹标准品lmg?2mg，超声使其完全溶解，取3?5mL过HLB固相萃取小柱，经4?6mL去离子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脱；洗脱液氮吹至近干，乙醇复溶，定溶至3mL，过0.22?0.45ym微孔滤膜后得到溶液A;以正己烷与乙醇体积比为10?40:90?60做为流动相，并在流动相中添加体积含量为0.1%?0.3%的甲酸和乙酸铵水溶液（5mnol/L)对氟甲喹对映体进行分离；用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测，选用CHIRALCEL0D-H手性柱，柱温为室温，流速为0.5mL/min?0.7mL/min,波长为254nm0本发明能成功实现氟甲喹手性对映体的拆分，从而检测海水中氟甲喹对映体的残留量，为海水养殖中氟甲喹的残留风险评估及合理、安全使用提供依据。
【专利说明】一种海水中氟甲喹手性对映体的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种海水中氟甲喹手性对映体的检测方法。
【背景技术】
[0002] 氟甲喹（FLU)为第二代氟喹诺酮类抗菌药，是动物专用抗菌药物，对治疗革兰氏 阴性菌感染，特别是对大肠杆菌、支原体、嗜水气单胞菌引起的畜、禽及水产动物疾病有较 好疗效。其作用机理主要是抑制DNA旋转酶A亚单位，破坏它的活性，结果使脱氧核糖核酸、 核糖核酸及蛋白质的合成受干扰，使细胞不能再进行分裂，从而起到杀菌作用。由于氟甲喹 具有高安全性、耐受性和独特的高渗透性，其在水产动物的细菌性疾病的预防和治疗中已 经得到广泛应用。氟甲喹在淡水中溶解度不高，但能溶于pH值较高的海水中，因此，氟甲喹 常用于海水鱼的鱼体浸浴消毒。然而，带有氟甲喹残留的废水往往直接排入河流或海洋中， 这将直接或间接地危害环境及人类健康。已有研究发现高剂量氟甲喹可引起大鼠胚胎发育 畸变，虽然低剂量氟甲喹对人体的危害尚未见报道，但长期摄入有氟甲喹残留的食品，其潜 在风险不容低估。
[0003] 氟甲喹是一种手性药物，具有一个手性碳原子，两个手性对映体，其对映体结构式 如图1所示。手性药物的不同对映体间往往显示出不同的药效学、药动学和毒理学特征，因 此，对手性药物的不同对映体进行检测尤为重要。目前，针对氟甲喹外消旋体在水产品中的 残留检测研究不少，但是尚没有针对氟甲喹对映体在海水中的残留检测。因此，开展检测海 水中氟甲喹对映体的研究，将为氟甲喹在海水中残留的风险评估以及合理、安全使用提供 依据。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种海水中氟甲喹手性对映体的检测方法，采 用高效液相色谱法手性固定相法检测海水中氟甲喹对映体的残留量，可成功实现氟甲喹手 性对映体的拆分。
[0005] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种海水中氟甲喹手性对映体的 检测方法，其特征在于包括以下步骤：
[0006] 1)取养殖海水80?110mL于烧杯中，加入氟甲喹标准品1?2mg，超声使其完全 溶解，取3?5mL过HLB固相萃取小柱，经4?6mL去离子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脱， 洗脱液收集于容量瓶中；
[0007] 2)将步骤1)的洗脱液氮吹至近干，用乙醇复溶，定溶至3mL，过0. 22?0. 45 μ m 微孔滤膜后得到溶液A;
[0008] 3)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL 0D-H手 性柱，手性柱的柱温为室温，流动相为正己烷和乙醇，其体积比为40?10:60?90,流动相 中添加甲酸（色谱纯，纯度3 98wt% )和乙酸铵水溶液，使它们体积含量分别为0. 1%? 0. 3%，乙酸铵水溶液浓度4. 5?5. 5mmol/L，检测时的流速为0. 5mL/min?0. 7mL/min，波 长为254nm。
[0009] 作为改进，所述步骤1)的HLB固相萃取小柱是经甲醇+水活化。
[0010] 作为优选，所述步骤3)的正己烷和乙醇的体积比为20:80。
[0011] 作为改进，所述步骤3)的CHIRALCEL 1C手性柱的填料为5 μ m硅胶表面涂布纤维 素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯]。
[0012] 作为优选，所述乙酸铵水溶液浓度5mmol/L。
[0013] 作为优选，所述步骤3)的检测时的流速为0. 6mL/min。
[0014] 最后，所述步骤3)流动相中添加甲酸和乙酸铵水溶液，使它们体积含量分别为 0· 2%。
[0015] 与现有技术相比，本发明的优点在于：采用高效液相色谱法手性固定相法检测海 水中氟甲喹对映体的残留量，成功实现了氟甲喹手性对映体的拆分，从而可对海水中氟甲 喹对映体的残留量进行检测，为海水中氟甲喹的合理、安全使用提供理论依据。其中，对映 体在0.04mg/L?10mg/L浓度范围内与其响应值呈良好的线性关系，左氟甲喹和右氟甲喹 的回归方程及相关系数分别为 y = 113. 93χ-7· 2217、R2 = 0· 9994 及 y = 117. 71χ-9· 9342、 R2 = 0. 9998,样品平均回收率分别为88. 53 %和89. 26%，日间精密度分别为5. 71 %和 4. 25%，定量限均为(λ 04mg/L。
【专利附图】
【附图说明】
[0016] 图1是本发明提供的氟甲喹对映体结构式；
[0017] 图2是本发明实施例中氟甲喹的色谱图。
【具体实施方式】
[0018] 以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0019] 一种海水中氟甲喹手性对映体的检测方法，包括以下步骤：
[0020] (1)取养殖海水100mL于烧杯中，加入氟甲喹标准品lmg?2mg，超声使其完全溶 解，取3?5mL过HLB固相萃取小柱（经5mL甲醇+5mL水活化），经5mL去离子水淋洗后用 5?10mL甲醇洗脱，洗脱液收集于10mL容量瓶中；
[0021] (2)将步骤（1)中的洗脱液甲醇氮吹至近干，残液乙醇溶解并定溶至3mL，采用 0. 22 μ m微孔滤膜进行过滤后得到溶液A ;
[0022] (3)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL 0D-H手 性柱，该手性柱的填料为5 μ m硅胶表面涂布纤维素-三[3, 5-二甲苯基氨基甲酸酯]，柱温 为室温；正己烷：乙醇按照40?10:60?90 (v:v)作为流动相；甲酸和乙酸铵水溶液的添 加量各为〇. 1 (v) %?0. 3 (v) % ;甲酸为色谱纯，纯度会98wt %，乙酸铵水溶液浓度4. 5? 5. 5mmol/L，检测时的流速为 0· 5mL/min ?0· 7mL/min，波长为 254nm。
[0023] 在本实施例中，步骤（3)中使用正己烷与乙醇体积比分别为40:60、30:70、20:80 和10:90的流动相对氟甲喹进行手性拆分，拆分结果如表1所示，可以看出，随着流动相中 乙醇比例的增大，分离度增加，但柱压也随之增高。因此，所使用流动相正己烷与乙醇的最 佳体积比为20:80,在该流动相配比条件下，对映体分离效果良好且柱压较低。
[0024] 表 1
[0025]
【权利要求】
1. 一种海水中氟甲喹手性对映体的检测方法，其特征在于包括以下步骤： 1) 取养殖海水80?llOmL于烧杯中，加入氟甲喹标准品1?2mg，超声使其完全溶解， 取3?5mL过HLB固相萃取小柱，经4?6mL去离子水淋洗后用5?10mL甲醇洗脱，洗脱 液收集于容量瓶中； 2) 将步骤1)的洗脱液氮吹至近干，用乙醇复溶，定溶至3mL，过0. 22?0. 45 μ m微孔 滤膜后得到溶液A; 3) 采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL 0D-H手性 柱，手性柱的柱温为室温，流动相为正己烷和乙醇，其体积比为40?10:60?90,流动相 中添加甲酸和乙酸铵水溶液，使它们体积含量分别为〇. 1%?〇. 3%，甲酸为色谱纯，纯度 兰98wt%，乙酸铵水溶液浓度为4. 5?5. 5mmol/L，检测时的流速为0· 5mL/min?0· 7mL/ min,波长为 254nm。
2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤1)的HLB固相萃取小柱是 经甲醇+水活化。
3. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤3)的正己烷和乙醇的体积 比为20:80。
4. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤3)的CHIRALCEL 1C手性 柱的填料为5 μ m娃胶表面涂布纤维素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯]。
5. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述乙酸铵水溶液浓度5mmol/L。
6. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤3)的检测时的流速为 0. 6mL/min〇
7. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤3)流动相中添加甲酸和乙 酸铵水溶液，使它们体积含量分别为〇. 2%。
【文档编号】G01N30/02GK104215710SQ201410459726
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月11日 优先权日:2014年9月11日
【发明者】高小峰, 聂晶, 欧阳小現, 王阳光, 杨立业, 吴伟建, 郁迪, 徐红萍, 李维, 曾浩, 杜军, 李玄 申请人:浙江海洋学院