一种采用高效液相色谱法分离检测阿普斯特及其对映异构体的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体涉及一种用高效液相色谱法分离测定阿普斯特及 其对映异构体的方法。
【背景技术】
[0002] 阿普斯特是一种磷酸二酯酶抑制剂，为首个被FDA在2014年3月21日批准上市、 用于治疗银肩病引起的关节炎的小分子药物，原研公司为Celgene。化学结构式如下：
[0003]
[0004] 含有手性碳原子的对映异构体分离一直是手性药物合成和制剂过程中质量控制 的难点。阿普斯特为手性药物，为保证药物的安全性，在质量标准中需要检测药物中对映异 构体杂质的含量。对映异构体在常规的高效液相色谱法中无法得到分离，必须使用合适的 手性柱才能达到分离。
[0005] 中国专利201410765717. 5公开了一种阿普斯特有关物质的方法，该方法使用 AD-H色谱柱，流动相为正己烷/异丙醇/二乙胺/三氟乙酸=80/20/0. 2/0. 5,流速1.0 mL/ min，柱温40°C，检测波长240nm，但该方法的分离度低。
[0006] 中国专利201510253092. 9公开了一种阿普斯特及其对映异构体的分离检测方 法，该方法使用ChiralPak AD-H色谱柱，该类色谱柱的填料为表面涂敷直链淀粉-三（3， 5-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅胶，流动相为正己烷-无水乙醇-二乙胺=50 : 50 : 0.1， 流速1.0 ml/min，柱温25°C，检测波长240nm。但该方法灵敏度低，分离度小，主峰拖尾严重。
[0007] 中国专利201510188349. 7公开了另一种阿普斯特及其对映异构体的分离检测方 法，该方法使用ChiralPak AD-H色谱柱或ChiralPak AS-H色谱柱，ChiralPakAD-H色谱 柱的填料为表面涂敷直链淀粉-三（3, 5-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅胶，AS-H色谱柱的填 料为表面涂敷直链淀粉-三（S)-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅胶，流动相为正己烷-异丙 醇-甲醇（100 : 900 : 100)，流速l.Oml/min，柱温35°C，检测波长230η。但该方法使用 ChiralPakAD-H色谱柱时分离效果不佳，使用AS-H色谱柱时分离效果较好，但该类色谱柱 价格昂贵。
[0008] 实现阿普斯特与其对映异构体的有效分离在阿普斯特的合成和制剂的质量控制 中具有重要的意义，为了有效控制阿普斯特的质量，需要发明一种能将阿普斯特与其对应 异构体有效分离的高效液相测定方法。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于提供一种用高效液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构 体的方法，该方法能将阿普斯特与其对映异构体有效分离，实现了阿普斯特的质量控制。
[0010] 本发明通过如下技术方案实现：
[0011] -种分离阿普斯特及其对映异构体的高效液相检测方法，该方法采用直链淀粉类 手性柱，其中所述直链淀粉类手性柱为ChiralPak AD、ChiralPak AD-H、S-Chiral，优选 ChiralPak AD-H ;以烷烃-极性有机溶剂为流动相，其中所述烷烃-极性有机溶剂溶液中包 含乙二胺、二乙胺、三乙胺中的一种有机碱，优选乙二胺，所述极性有机溶剂由第一有机溶 剂和第二有机溶剂组成，所述烷烃选自正己烷、己烷，优选己烷，所述第一有机溶剂选自甲 醇、乙醇、异丙醇，优选乙醇，所述第二有机溶剂选自乙腈。流动相中，所述烷烃-第一有机 溶剂-第二有机溶剂的体积比为：40~50 : 40~50 : 5~15,优选45 : 45 : 10,所述 有机碱的浓度（V/V)为0. 05 %~0. 15 %，优选0. 1 %。
[0012] 所述色谱条件还可以进一步优选流动相流速为0. 6~1.0 ml/min，优选0. 8ml/ min ;检测波长200nm~260nm，优选230nm ;柱温：30°C~40°C，优选35°C ;
[0013] 上述实施方案中，本发明的方法，进一步包含以下内容：
[0014] 取阿普斯特适量，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀释制成每1ml约含1.0 mg的溶液， 作为供试品溶液；精密量取适量，用溶剂稀释并制成每1ml中约含10 μ g的溶液。照高效 液相法（中国药典2010年版二部附录V D)测定。用（ChiralPak AD-H)为填充剂，以己 烷-乙醇-乙腈-二乙胺（45 : 45 : 10 : 0. 1)为流动相，柱温35°C，检测波长230nm，流 速为每分钟〇. 8ml。取阿普斯特消旋体适量，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀释并制成每1ml 中约含1.0 mg的溶液，取10 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图，阿普斯特R异构体与阿普斯 特依次流出，阿普斯特与异构体见的分离度应符合要求。精密量取供试品溶液和对照溶液 各10 μ 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中阿普斯特R异构体峰不 得大于对照溶液主峰面积（1. 0% )。
[0015] 本发明的有益效果为：本发明的方法可以将阿普斯特及其对映异构体有效分离， 该方法灵敏度高，柱效高，峰行对称，从而可以准确控制阿普斯特的质量，简单、快速、准确 地分离检测出阿普斯特的对映异构体。
【附图说明】
[0016] 图1空白溶液图谱
[0017] 图2阿普斯特消旋体图谱
[0018] 图3阿普斯特供试品溶液图谱
【具体实施方式】
[0019] 下面的实施例将对本发明作更具体的解释，但本发明并不仅仅局限于这些实施 例，同样这些实施例也不以任何方式限制本发明。
[0020] [实施例1]
[0021] 仪器与条件
[0022] 高效液相色谱仪：Agi lent 1260
[0023] 色谱柱：ChiralPak AD-H (250*4. 6mm，5 μ m)
[0024] 流动相：己烷-乙醇-乙腈-二乙胺（45 : 45 : 10 : 0· I)
[0025] 流速：0· 8ml/min
[0026] 波长：230nm
[0027] 柱温：35°C
[0028] 进样量：10 μ L
[0029] 实验步骤：
[0030] 取阿普斯特5mg，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀释制成每1ml约含1.0 mg的溶液，作 为供试品溶液；取阿普斯特消旋体5mg，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀释并制成每1ml中约 含1.0 mg的溶液，取10 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图，精密量取供试品溶液10 μ 1，分别 注入液相色谱仪，记录色谱图。
【主权项】
1. 一种采用高效液相色谱法分离检测阿普斯特及其对映异构体的方法，其特征在于该 方法色谱条件采用表面涂敷直链淀粉-三（3,5_二甲苯基氨基甲酸酯）硅胶为填料的手性 柱，以己烧 -乙醇-乙臆-二乙胺为流动相。2. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于该方法中所述的表面涂敷直链淀粉-三 (3,5_二甲苯基氨基甲酸酯）的硅胶为填料的手性柱为ChiralPak AD、ChiralPak AD-H、 S-Chiral03. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于该方法中所述流动相己烷-乙醇-乙 腈-二乙胺溶液的体积比为：45 : 45 : 10 : 0.1。4. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于该方法色谱条件中柱温为：30°C~40°C。5. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于该方法色谱条件中流动相的流速为： 0? 6 ~L 0ml/min〇6. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于该方法色谱条件中检测波长为：200nm~ 260nm〇7. 如权利要求4所述的检测方法，其特征在于该方法色谱条件中柱温为：35°C。8. 如权利要求5所述的检测方法，其特征在于该方法色谱条件中流动相的流速为： 0. 8ml/min〇9. 如权利要求6所述的检测方法，其特征在于该方法色谱条件中检测波长为：230nm。
【专利摘要】一种用高效液相色谱法分离检测阿普斯特及其对映异构体的方法，该方法色谱条件采用表面涂敷直链淀粉-三(3，5-二甲苯基氨基甲酸酯)硅胶为填料的手性柱，流动相为己烷-乙醇-乙腈-二乙胺(45∶45∶10∶0.1)，流速为0.8ml/min，波长为230nm，柱温为35℃。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105136933
【申请号】CN201510585123
【发明人】张在富, 吴浩山, 许馨文
【申请人】亿邦国创药物研究院(北京)有限公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月16日