一种血红蛋白d的检测方法【
技术领域：
】[0001]本发明属于医学检验
技术领域：
，具体涉及一种血红蛋白D的检测方法。【
背景技术：
】[0002]血红蛋白病是由于血红蛋白的质和量发生异常而引起的一种遗传性贫血综合症，现代医学称其为分子病。这种病在我国十分常见，目前常见的血红蛋白病有镰状细胞贫血、高铁血红蛋白症、氧亲和力异常血红蛋白症、HbE和HbC等。HbDebrousse(血红蛋白D变异体)是近年来出现的一种罕见的血红蛋白病。PhilippeLacan等在美国血液学杂志发表了一篇题目为《HemoglobinDebrousse(β96[FG3]Leu-Pro):ANewUnstableHemoglobinWithTwofoldIncreasedOxygenAffinity》的论文，该论文公开了HbDebrousse是一种外显子基因突变(hgl9:chrll5，247，832)所致的血红蛋白病，造成在β链96号密码子发生基因序列突变CD96CTG>CCG(HbDebrousse(beta96(FG3)Leu>Pro)。[0003]HbDebrousse是一种不稳定血红蛋白与高亲氧性物质结合而产生的变异体，是在β链96号密码子发生基因序列突变CD96CTG>CCG(beta96(FG3)Leu>Pro)的血红蛋白病。血红蛋白病重症患者在胎儿期就可能死亡，有的终生靠输血维持生命；病症轻者，面色苍白，全身乏力，随时危及生命。因此，找出检测和鉴别血红蛋白病的可靠方法具有重要的意义。[0004]目前，检测血红蛋白变异体的方法有很多，如电泳分析法、反相高效液相色谱法和质谱分析法。电泳法分离异常血红蛋白主要是依赖其不同的带电状态进行分离；而反相高效液相色谱法分离异常血红蛋白主要是基于血红蛋白链的疏水特性。但是，对于罕见的HbDebrousse,目前仅有基因测序方法可以检测出HbDebrousse。由于基因测序法存在操作繁琐、检测成本高和对操作人员要求高的缺陷，对于HbDebrousse的临床检测存在诸多不便。[0005]经研究发现，HbDebrousse会干扰糖化血红蛋白的检测，影响糖尿病患者的血糖监测，不利于糖尿病患者的疾病监控和治疗。因此，寻找出一种操作简单、便捷，检测结果准确的HbDebrousse检测和鉴别方法是当前亟需解决的难题。【
发明内容】[0006]为了弥补现有技术中血红蛋白D检测方法操作繁琐和检测成本高的缺陷，本发明的目的在于提供操作简单、检测结果准确的血红蛋白D的检测方法。[0007]本发明提供的血红蛋白D的检测方法，包括以下步骤:[0008]SI标本溶液处理:取体积比为9:I的血标本和乙二胺四乙酸溶液完全混匀，得混合血标本，接着取混合血标本加入去离子水稀释100倍；[0009]S2样品测定:[0010]高效液相色谱仪的色谱条件:采用双栗系统，所用流动相A为有机溶剂，流速为0.15-2.0mL/min，流动相B为纯化水，流速为0.15-2.0mL/min，使用硼酸基亲和色谱柱，柱流速为0.15-1.0mL/min,温度为25-30°C，进样量为20μL，设定色谱检测波长为413-415nm，分别将标本溶液进行样品测定。[0011]进一步地，所述步骤S2中样品测定还包括内标FASC质控液、ControlI质控液和ControlII质控液的测定步骤。[0012]进一步地，所述步骤S2中流动相A的有机溶剂由0.0006-0.0009%BIS-TRIS盐酸盐、0.025-0.03%氰化钾和96.91-97.44%纯化水组成，有机溶剂进一步优选为0.0008%BIS-TRIS盐酸盐、0.028%氰化钾和97.12%纯化水组成。[0013]进一步地，所述步骤S2中有机溶剂的流速为1.5mL/min。[0014]进一步地，所述步骤S2中纯化水的流速为1.5mL/min。[0015]进一步地，所述步骤S2柱流速为0.8mL/min。[0016]进一步地，所述步骤S2中温度为25°C。[0017]进一步地，所述步骤S2色谱检测波长为413nm。[0018]本发明中的BIS-TRIS盐酸盐的英文名称为BisTriHCL,其CAS号为124763-51-5。[0019]与现有技术相比，本发明的血红蛋白D检测方法具有以下优点:本发明提供的血红蛋白D的检测方法为患有罕见的血红蛋白D的患者提供了新的检测方法，而且本发明的检测方法还具有操作简单、结果准确和检测成本低的优点，更有利于临床应用。【附图说明】[0020]图1为高效液相色谱仪法检测HbDebrousse的色谱图；[0021]图2为HbDebrousse(beta96(FG3)Leu>Pro)的基因片段图。【具体实施方式】[0022]以下通过具体实施例进一步描述本发明，本发明不仅仅限于以下实施例。在本发明的范围内或者在不脱离本发明的内容、精神和范围内，对本发明进行的变更、组合或替换，对于本领域的技术人员来说是显而易见的，且包含在本发明的范围之内。[0023]实施例1、[0024]1、试验对象:患者是来自广东省某医院门诊糖尿病患者，男性，42岁，10岁左右曾经有急性肝炎病史，经糖化血红蛋白检测，其结果达58mg/dl，抽取患者的全血备用。[0025]2、试验方法:[0026]SI标本溶液处理:取2.7ml患者的全血加入0.3ml的乙二胺四乙酸溶液完全混匀，接着取出5ul加入995ul去离子水，充分混匀；[0027]S2内标FASC质控液的配制:吸取已溶化的FASC内标质控液1ul加入790ul去离子水，充分混匀；[0028]S3Control1、II质控溶液的配制:吸取已溶化的Control1、II质控溶液各5ul分别加入995ul去呙子水，充分混勾；[0029]S4样品测定:[0030]高效液相色谱仪的色谱条件:采用双栗系统，所用流动相A由0.0008%BIS-TRIS盐酸盐、0.028%氰化钾和97.12%纯化水组成，流速为1.5mL/min，流动相B为纯化水，流速为1.5mL/min，使用硼酸基亲和色谱柱，柱流速为0.8mL/min，温度为25°C，进样量为20μL，设定色谱检测波长为413nm，分别将标本溶液、内标FASC质控液和Control1、II质控溶液进行样品测定。[0031]3、试验结果:[0032]试验结果如图1所示，图中RT为4.542显示出异常变异体，经与其他贫血患者和正常人的血红蛋白色谱图波峰对比，证明该变异体是HbDebrousse。[0033]实施例2、[0034]1、以实施例1的全血样品进行基因测序，基因测序方法参照PhilippeLacan(菲利普拉康)在美国血液学杂志发表题目为《HemoglobinDebrousse(β96[FG3]Leu-Pro):ANewUnstableHemoglobinWithTwofoldIncreasedOxygenAffinity》的论文中HemoglobinDebrousse的基因测序方法。[0035]2、试验结果:[0036]试验结果如图2所示，证明了该患者的病因是由于β链96号密码子发生基因序列突变CD96CTG>CCG(HbDebrousse(beta96(FG3)Leu>Pro)所致，检测结果如本发明的HbDebrousse检测结果一致，证明本发明提供的血红蛋白D检测方法检测结果准确，同时具有良好的实用性。【主权项】1.一种血红蛋白D的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:SI标本溶液处理:取体积比为9:I的血标本和乙二胺四乙酸溶液完全混匀，得混合血标本，接着取混合血标本加入去离子水稀释100倍；S2样品测定:高效液相色谱仪的色谱条件:采用双栗系统，所用流动相A为有机溶剂，流速为0.15-2.0mL/min，流动相B为纯化水，流速为0.15-2.0mL/min，使用硼酸基亲和色谱柱，柱流速为0.15-1.0mL/min,温度为25-30°C，进样量为20μL，设定色谱检测波长为413-415nm，分别将标本溶液进行样品测定。2.如权利要求1所述的血红蛋白D的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中样品测定还包括内标FASC质控液、ControlI质控液和ControlII质控液的测定步骤。3.如权利要求1所述的血红蛋白D的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中流动相A的有机溶剂由0.0006-0.0009%BIS-TRIS盐酸盐、0.025-0.03%氰化钾和96.91-97.44%纯化水组成。4.如权利要求2所述的血红蛋白D的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中流动相A的有机溶剂由0.0008%BIS-TRIS盐酸盐、0.028%氰化钾和97.12%纯化水组成。5.如权利要求1所述的血红蛋白D的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中有机溶剂的流速为1.5mL/min。6.如权利要求1所述的血红蛋白D的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中纯化水的流速为1.5mL/min07.如权利要求1所述的血红蛋白D的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中柱流速为0.8mL/min。8.如权利要求1所述的血红蛋白D的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中温度为25。。。9.如权利要求1所述的血红蛋白D的检测方法，其特征在于，所述步骤S2的色谱检测波长为413nm。【专利摘要】本发明属于医学检验
技术领域：
，具体涉及一种血红蛋白D的检测方法。本发明的检测方法的高效液相色谱仪的条件：采用双泵系统，所用流动相A为有机溶剂，流速为0.15-2.0mL/min，流动相B为纯化水，流速为0.15-2.0mL/min，使用硼酸基亲和色谱柱，柱流速为0.15-1.0mL/min，温度为25-30℃，进样量为20μL，设定色谱检测波长为413-415nm，分别将标本溶液、内标FASC质控液和Control？I、II质控溶液进行样品测定。本发明提供的血红蛋白D检测方法具有操作简单、结果准确和检测成本低的优点，更有利于临床应用。【IPC分类】G01N30/02,G01N30/06【公开号】CN105136923【申请号】CN201510528056【发明人】张玲【申请人】广州金域医学检验中心有限公司【公开日】2015年12月9日【申请日】2015年8月24日