专利名称：利用毛细管电泳法的血红蛋白分析方法及该方法中使用的添加剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及利用毛细管电泳法的血红蛋白分析方法及该方 法中使用的添加剂。
背景技术：
毛细管电泳法中，集中在毛细管内壁的离子由于施加的电 压而移动，从而产生电渗流，由此试样移动，进行电泳。另一
方面，血液中的血红蛋白(Hb)与血液中的葡萄糖反应，成为 糖化Hb。血液中的糖化Hb由于反映生物体内血糖值的过去经 历，因此成为糖尿病的诊断、治疗等的指标。糖化Hb中，血红 蛋白Alc (HbAlc)作为特别重要的指标，在临床检查等中实施 其测定。HbAlc是(3链N末端的缬氨酸被糖化的产物。另外，在 镰形细胞贫血症(Sickle Cell anemia)中，血红蛋白S(HbS) 是原因分子、且对于诊断很重要。HbS中，卩链第6号的谷氨酸 (Glu)变成缬氨酸(Val)。因此，需求以高精度分析HbAlc 和HbS等各种血红蛋白的技术。血液中的血红蛋白测定方法例 如有琼脂糖电泳法、毛细管电泳法、HPLC法、免疫法、酶法等。 其中，能够检测出血红蛋白的基因突变等微小突变的方法为毛 细管电泳法和HPLC法。另 一方面，要求血红蛋白的分析装置小 型化。就该方面而言，HPLC法难以实现整个装置的小型化。与 此相对，在毛细管电泳法中，通过进行微芯片化，将整个装置 小型化是可能的。
但是，以往的毛细管电泳法的各种血红蛋白的分析精度仍 不充分。与此相对，作为以高精度分析HbAlc的技术，有用蛋 白质覆盖毛细管内壁，进而用多糖类覆盖其上的技术(专利文献l )(以下称作"现有技术(1 )")。但是，在现有技术(1 )
中，具有无法分离正常血红蛋白(HbA0)和HbS、峰重叠的问 题。无法分离HbAO和HbS则无法正确地测定血液中的HbAlc比 例。即，现有技术(l)中，对于镰形细胞贫血症患者而言，具 有HbAlc显示异常低值的问题。作为解决该问题的方法，有不 覆盖毛细管内壁、在两性离子性类型的运行緩冲液中含有脂肪 族二胺等流动抑制剂进行毛细管电泳的方法(专利文献2)(以 下称作"现有技术(2)")。但是，现有技术(2)的测定时间 必须为长时间(例如10分钟)。因此，现有技术(2)在必须短 时间内处理多个试样的临床检查中，基本上无法适用。另外， 现有技术(2)还要求毛细管很长。因此，现有技术(2)无法 寻求装置的小型化。而且，现有技术(2)虽然能够分离HbAO 和HbS,但无法测定HbAlc。
专利文献l:日本特开平9 - 105739号7>才艮 专利文献2:曰本4争开2006 — 145537号7>才艮
发明内容
因此，本发明的目的在于提供可使装置小型化、分析精度 高、可在短时间内分析的利用毛细管电泳法的血红蛋白分析方 法以及该方法中^f吏用的添加剂。
为了达成上述目的，本发明的分析方法为利用毛细管电泳 法的血红蛋白分析方法，其特征在于，包括以下工序准备含 有血红蛋白的试样的试样准备工序；准备含有緩沖液的毛细管 的毛细管准备工序；向上述毛细管的緩冲液中导入上述试样， 在上述毛细管的两端施加电压，使上述试样进行电泳的电泳工 序，其中通过下述(A)和下述(B)中的至少一种方式实施电 泳
5(A) 在上述緩沖液中添加下述(a)表面活性剂来实施上 述电泳。
(a) 表面活性剂具有作为疏水部的烷基、具有作为亲水 部的糖的非离子性表面活性剂
(B) 在上述试样中添加下述(b)表面活性剂来实施上述电泳。
(b) 表面活性剂甜菜碱型两性表面活性剂 本发明的添加剂，其特征在于，其为在上述本发明的分析
方法中4吏用的毛细管电泳用的添加剂，含有下述(a)表面活性 剂和下述(b)表面活性剂中的至少一个。
(a) 表面活性剂具有作为疏水部的烷基、具有作为亲水 部的糖的非离子性表面活性剂
(b) 表面活性剂甜菜碱型两性表面活性剂
本发明的分析方法例如能够将HbAO和HbS分离来进行分 析，且可以使分析时间比现有方法短。另外，本发明的分析方 法例如能够以高精度分析HbAlc,即便是镰形细胞贫血症患者 的血液试样，也可以防止HbAlc异常低值的问题。而且，本发 明的分析方法可以 <吏毛细管的长度比现有方法短，此方面而言， 可以使分析装置比现有方法更加小型化。
图l为表示本发明一实施例中血红蛋白分析结果的图。 图2为表示本发明其它实施例中血红蛋白分析结果的图。 图3为表示本发明另 一个实施例中血红蛋白分析结果的图。 图4为表示本发明另 一个实施例中血红蛋白分析结果的图。 图5为表示本发明另 一 个实施例中血红蛋白分析结果的图。 图6为表示比较例中血红蛋白分析结果的图。图7为表示其它比较例中血红蛋白分析结果的图。
图8为表示本发明另 一 个实施例中血红蛋白分析结果的图。 图9为表示另 一个比较例中血红蛋白分析结果的图。 图IO为表示另 一个比较例中血红蛋白分析结果的图。
具体实施例方式
本发明的上述(A)方式中，优选上述毛细管准备工序中 将上述(a)表面活性剂添加于上述緩冲液中。
本发明的上述(a)表面活性剂，优选烷基的碳原子数为 11~16的范围，糖为单糖或二糖。更优选本发明的上述(a)表 面活性剂中，烷基为碳原子数11或12的直链状烷基、上述糖为 二糖。
本发明的上述(B)方式中，优选在上述试样准备工序中 将上述(b)表面活性剂添加于上述试样中。
本发明的上述(b)表面活性剂优选为磺基甜菜碱型两性表 面活性剂。
本发明的分析方法中，优选向上述緩沖液中添加含阴极性 基团的化合物，使上述血红蛋白与上述含阴极性基团的化合物 的复合体进行电泳。此时，优选在上述毛细管准备工序中，将 上述含阴极性基团的化合物添加于上述緩沖液中。上述含阴极 性基团的化合物优选为含阴极性基团的多糖类。
本发明的分析方法中，优选将HbAO和HbS分离。
本发明的分析方法中，作为分析对象的血红蛋白优选为选 自HbAlc、 HbS、 HbC、 HbM、 HbH和HbF所组成的组中的至少1 个血红蛋白。
接着举例说明本发明。
如上所述，本发明的分析方法具有上述试样准备工序、上述毛细管准备工序和上述电泳工序，以下述(A)和下述(B) 中的至少l种方式进行毛细管电泳。
(A) 在上述緩冲液中添加下述(a)表面活性剂来实施上 述电泳。
(a) 表面活性剂具有作为疏水部的烷基、具有作为亲水 部的糖的非离子性表面活性剂
(B) 在上述试样中添加下述(b)表面活性剂来实施上述 电泳。
(b) 表面活性剂甜菜碱型两性表面活性剂 上述试样准备工序中，准备含血红蛋白的试样。含血红蛋
白的试样例如可举出将全血进行了溶血处理的溶血试样。上述 溶血处理例如可以举出超声波处理、冷冻解冻处理、加压处理、 渗透压处理、表面活性剂处理等。上述溶血试样例如可以用水、 生理盐水、緩冲液等适当稀释。
上述(B)方式中，如上所述，优选在上述试样准备工序 中，将上述(b)表面活性剂添加于试样中。但是，本发明并非 局限于此。例如，也可以在上述电泳工序中，在将上述试样导 入至上述毛细管内的上述緩冲液中之前，向上述试样中添加上 述(b)表面活性剂。
如上所述，上述(b)表面活性剂为甜菜碱型表面活性剂。 上述甜菜碱型表面活性剂例如可以举出羧基甜菜碱型表面活性 剂、磺基甜菜碱型表面活性剂。其中，优选磺基甜菜碱型表面 活性剂。
上述羧基甜菜碱型表面活性剂例如可举出N,N- 二曱基-N-烷基-N -羧基亚烷基铵甜菜碱(N,N- dimethyl - N- alkyl - N - carboxyl alkylene - ammonium betaine )。
上述磺基甜菜碱型表面活性剂例如可举出N，N,N -三烷基-N-磺基亚烷基铵甜菜碱(N，N,N - trialkyl - N - sulpho alkylene ammonium betaine )。上述3个坑基相互相同或不同。上 述烷基的碳原子数例如为14~ 18的范围。上述烷基为直链状烷 基或支链状烷基。上述磺基亚烷基的碳原子数例如为1 ~ 3的范 围。上述磺基甜菜碱型表面活性剂的具体例子例如可举出椋榈 基磺基甜菜碱。
上述(b)表面活性剂在上迷试样中的添加比例相对于上述 试样和上述(b)表面活性剂的总量为例如O.OOl ~ 0.1重量％的 范围、优选为0.005 ~ 0.05重量％的范围、更优选为0.01 ~ 0.03 重量％的范围。
上述毛细管准备工序为准备注入有上述緩冲液的毛细管的 工序。
上述緩冲液并无特别限定，优选使用酸的緩沖液。上述酸 例如有马来酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、邻苯二甲酸、丙二
酸、苹果酸。另外，上述緩冲液优选含有弱碱基团。上述弱碱 基团例如有精氨酸、赖氨酸、组氨酸、Tris等。上述緩冲液的 pH例如为pH4.5 ~ 6的范围。上述緩沖液的种类例如有MES、 ADA、 ACES、 BES、 MOPS、 TES、 HEPES等。
上述緩沖液中，如上所述优选添加上述含阴极性基团的化 合物。通过添加上述含阴极性基团的化合物，在上述电泳工序 中，上述含阴极性基团的化合物和血红蛋白的复合体在上述緩 沖液中泳动。由此，分析精度进一步提高，另外分析时间也能 够进一步缩短，上述毛细管的长度也能够进一步缩短。
上述含阴极性基团的多糖类例如有硫酸化多糖类、羧酸化多糖 类、磺酸化多糖类、磷酸化多糖类，其中优选硫酸化多糖类和 羧酸化多糖类。上述硫酸化多糖类优选硫酸软骨素、肝素等，
9更优选硫酸软骨素。上述羧酸化多糖类优选海藻酸或其盐(例
如海藻酸钠)。錄u酸软骨素有A、 B、 C、 D、 E、 H、 K七种，可 以使用任1种。上述緩冲液中，上述含阴极性基团的化合物的浓 度例如为0.01 ~ 5重量％的范围。
上述(A)方式中，如上所述，优选在上述毛细管准备工 序中，将上述(a)表面活性剂添加至上述緩冲液中。但是，本 发明并非限定于此。例如，还可以在上述电泳工序中，在将上 述试样导入上述毛细管内的上述緩冲液之前，在上述緩冲液中 添加上述(a)表面活性剂。
上述(a)表面活性剂如上所述为具有作为疏水部的烷基、 具有作为亲水部的糖的非离子性表面活性剂。上述烷基例如可 以为直链状烷基、还可以为支链状烷基，优选直链状烷基。上 述烷基的碳原子数例如为1 ~ 18个的范围、优选为11 ~ 16个的范 围、更优选为11或12个。上述烷基的具体例子例如可以举出曱 基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁 基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二 烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、 十八烷基、十九烷基、二十烷基等。上述糖可以为单糖，还可 以为二糖以上。上述糖的数量例如为1 ~ 20个的范围、优选为1 ~ 3个的范围、更优选为二糖。上述(a)表面活性剂的具体例子 例如优选十二烷基-D-麦芽糖苷、蔗糖单月桂酸酯、氧杂十 三烷基-D -甘露糖普(OXATRIDECYL - D - MANNOSIDE )、 十 一 烷基麦芽糖苷、辛基糖苷、蔗糖单癸酸酯(Sucrose monocaprate )、蔗糖单月旦酸酉旨(Sucrose monocholate )等。其中, 优选十二烷基-D-麦芽糖苷，蔗糖单月桂酸酯，氧杂十三烷 基- D -甘露糖苷。上述(a)表面活性剂在上述緩沖液中的浓 度例如为0.001 ~ 1重量％的范围、优选为0.005 ~ 0.05重量％的范围、更优选为0.01 ~ 0.03重量％的范围。
上述毛细管的材质并无特别限定，例如可举出玻璃、熔融 二氧化硅、塑料等。玻璃、熔融二氧化硅制的毛细管内壁通常 为带有阴性电荷的状态。塑料制的毛细管内壁根据塑料中的极 性基团的有无或种类而为带有阳性电荷或阴性电荷的状态，或 者为无电荷(无极性)的状态。另外，即便是不带极性基团的 塑料，通过导入极性基团，也可以成为带有电荷的状态。上述 塑料制的毛细管可以使用市售品，例如可以举出由聚甲基丙烯 酸曱酯、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚四氟乙烯(PTFE)、 聚醚醚酮(PEEK)等形成的毛细管。上述毛细管的内径例如 为10 ~ 200pm的范围、优选为25 ~ 100!im的范围。上述毛细管 的长度例如为10~ 1000mm的范围。
本发明中，还可以用含阳极性基团的化合物覆盖上述毛细 管内壁。上述含阳极性基团的化合物例如可以使用含有上述阳 极性基团和反应基团的化合物。上述毛细管为玻璃或熔融二氧 化硅制时，可以使用具有阳极性基团和硅的化合物(曱硅烷化 剂)。上述阳极性基团优选氨基、铵基。上述含阳极性基团的化 合物优选为具有氨基和铵基中的至少l个阳极性基团的甲硅烷 化剂。氨基可以为伯氨基、仲氨基、叔氨基中的任一个。
上述曱硅烷化剂例如可举出N- (2- 二氨基乙基)-3-丙基三曱氧基硅烷、氨基苯氧基二曱基乙烯基硅烷、3 -氨基丙 基二异丙基乙氧基硅烷、3 -氨基丙基曱基双(三曱基硅氧烷基) 硅烷、3 -氨基丙基五曱基二硅氧烷、3-氨基丙基硅烷三醇、 双(对氨基苯氧基)二甲基硅烷、1，3-双(3-氨基丙基)四 曱基二硅氧烷、双(二甲基氨基)二曱基硅烷、双(二曱基氨 基)乙烯基曱基硅烷、双(2-羟基乙基)-3-氨基丙基三乙 氧基硅烷、3-氰基丙基(二异丙基)二甲基氨基硅烷、(氨基乙基氨基甲基)苯乙基三曱氧基硅烷、N-曱基氨基丙基三乙 氧基硅烷、四(二乙基氨基)硅烷、三(二曱基氨基)氯硅烷、 三(二甲基氨基)硅烷等。
上述曱硅烷化剂中，可以使用将硅原子取代为钛或锆的物 质。上述曱石圭烷化剂可以单独使用l种，还可以并用2种以上。
使用上述甲硅烷化剂的毛细管内壁的覆盖例如如下实施。 首先，将曱硅烷化剂溶解或分散于有机溶剂中，调制处理液。 上述处理液的调制中所使用的上述有机溶剂例如可以使用二氯 曱烷、甲苯等。上述处理液的甲硅烷化剂的浓度并无特别限定。 将该处理液通入玻璃制或熔融二氧化硅制的毛细管中，进行加 热。通过该加热，上述甲硅烷化剂以共价键结合在上述毛细管 内壁上，结果阳极性基团配置在上述毛细管内壁。之后，用有 机溶剂(二氯曱烷、曱醇、丙酮等)、酸性溶液(磷酸等)、碱 性溶液和表面活性剂溶液中的至少l个进行洗涤(后处理)。予 以说明，该洗涤为任选进行，但优选实施。内壁被上述曱硅烷 化剂覆盖的毛细管可以使用市售品。
接着，向上述毛细管的上述緩冲液中导入上述试样，在上 述毛细管的两端施加电压，实施使上述试样进行电泳的上述电 泳工序。上述电泳工序例如可以如下实施。
首先，利用泵等施加压力，将含有硫酸软骨素等含阴极性 基团的化合物的緩沖液通入上述毛细管中。该通液的时间例如 为1~60分钟，通液的压力例如为0.05 ~ O.lMPa。在上述緩沖液 存在于上述毛细管内的状态下，将血红蛋白试样导入上述緩冲 液中，在上述毛细管的两端施加电压，进行电泳。上述试样的 导入从上述毛细管的阳极侧进行。所导入的试样中的血红蛋白 与上述緩冲液中的含阴极性基团的化合物结合，形成复合体。 通过施加电压，在上述毛细管内的緩冲液中产生电渗流，上述
12复合体朝向毛细管的阴极侧移动。上述施加电压的程度例如为
1 ~ 30kV。利用光学方法检测该移动。利用光学方法的检测并 无特别限定，优选在415nm的波长下进行。
上述电泳中，如上所述，通过以上述(A)方式和上述(B ) 方式中的至少l个方式实施电泳，利用上述(a)表面活性剂和 上述(b)表面活性剂中的至少l者的作用，能够将HbAO和HbS 分离。
本发明中，成为分析对象的血红蛋白并无特别限定，例如 有正常血红蛋白(HbA0)、糖化血红蛋白(例如HbAlc、不稳 定型HbAlc、 GHbLys等)、基因突变型血红蛋白(例如HbS、 HbC、 HbM、 HbH)、 HbF等。 实施例
接着， 一并说明本发明的实施例和比4交例。 (实施例1- 1)
准备熔融二氧化硅制的毛细管(全长32cm、有效长8.5cm、 内径50ixm)。另一方面，准备在100mM富马酸和4青氨酸水溶液 中以0.8重量％的比例添加有硫酸软骨素C的緩冲液(p H 4.8 )。 在该緩冲液中，以0.02重量％的比例添加上述(a)表面活性剂 (十二烷基-D-麦芽糖苷、烷基的碳原子数12)。在压力 O.lMPa ( 1000mbar )下将添加有上述(a)表面活性剂的上述 緩沖液通入上述毛细管中。在上述毛细管内填充有上述緩沖液 的状态下，将由血红蛋白溶解于精制水而成的试样注入到上述 毛细管内，以10kV向上述毛细管的两端施加电压，进行电泳。 上述血红蛋白试样的注入从上述毛细管的阳极侧进行。通过 415nm下的吸光度来斥全测移动的血红蛋白。予以说明，上述试 样准备含有HbS的试样和不含HbS的试样2种类，对各个试样进 行电泳。将该结果示于图l的图。该图中，不含HbS的试样的电泳图用虚线表示，含有HbS的试样的电泳图用粗实线表示。如 图所示，本实施例中，能够将HbAO和HbS分离来斥企测。另外， 上述^全测可以在6分钟以内的短时间内实施。 (实施例1 - 2 )
使用蔗糖单月桂酸酯(烷基的碳原子数11)代替十二烷 基-D-麦芽糖苷作为上述(a)表面活性剂。另外，上述试样 仅准备含有HbS的试样，对其进行电泳。除这些之外，与上述 实施例1 - 1同样地实施毛细管电泳。将其结果示于图2的图。 如图所示，本实施例中，可以将HbA0和HbS分离来^r测。另 外，上述检测可以在6分钟以内的短时间内实施。 (实施例l- 3 )
使用氧杂十三烷基-D-甘露糖香(烷基的碳原子数12) 代替十二烷基-D-麦芽糖苷作为上述(a)表面活性剂。另夕卜， 上述试样仅准备含有HbS的试样，对其进行电泳。除这些之外， 与上述实施例1 - 1同样地实施毛细管电泳。将其结果示于图3 的图。如图所示，本实施例中，可以将HbA0和HbS分离来枱r 测。另外，上述检测可以在6分钟以内的短时间内实施。 (实施例1 - 4 )
使用十一烷基-麦芽糖苷(烷基的碳原子数ll)代替十 二烷基-D-麦芽糖苷作为上述(a)表面活性剂。另外，上述 试样仅准备含有HbS的试样，对其进行电泳。除这些之外，与 上述实施例1-1同样地实施毛细管电泳。将其结果示于图4 的图。如图所示，本实施例中，可以将HbA0和HbS分离来抬r 测。另外，上述检测可以在6分钟以内的短时间内实施。 (实施例1 - 5 )
在上述緩沖液中，以0.005重量％的比例添加十六烷基-麦芽糖苷(烷基的碳原子数16)来代替以0.02重量％的比例添加十二烷基-D-麦芽糖苷。另外，上述试样仅准备含有HbS 的试样，对其进行电泳。除这些之外，与上述实施例1 - 1同样 地实施毛细管电泳。将其结果示于图5的图。如图所示，本实 施例中，可以将HbA0和HbS分离来^r测。另夕卜，上述^r测可 以在7分钟以内的短时间内实施。 (比较例l - 1 )
除了不使用上述(a)表面活性剂之外，与上述实施例1 -1同样地实施毛细管电泳。将其结果示于图6的图。该图中， 不含HbS的试样的电泳图以虚线表示，含有HbS的试样的电泳 图以粗实线表示。如图所示，本比较例中，曱基化Hb和HbS 的峰重叠、且无法将HbA0和HbS分离来检测。 (比较例l _ 2)
作为上述(a)表面活性剂，代替十二烷基-D-麦芽糖苷 使用TritonX- 100 (商品名大力，4 f ^夕公司制)。另夕卜， 上述试样仅准备含有HbS的试样，对其进行电泳。除这些之外， 与上述实施例1 - 1同样地实施毛细管电泳。将其结果示于图7 的图。如图所示，本比较例中，Hb的检出时间迟、峰较宽、且 无法将HbA0和HbS分离来^r测。 (实施例2 - 1、比较例2 - 1 )
准备与上述实施例1同样的熔融二氧化硅制的毛细管(全 长32cm、有效长8.5cm、内径50jim)。另一方面，准备在100mM 富马酸和精氨酸水溶液中以0.8重量％的比例添加有石克酸软骨 素C的緩冲液(pH4.8)。在压力O.lMPa ( 1000mbar)下将上 述緩冲液通入上述毛细管中。另一方面，准备将血红蛋白(含 有HbS)溶解于精制水的试样。在上述试样中以1.0重量％的 比例添加上述(b)表面活性剂(棕榈基磺基甜菜碱；商品名 SB16、 Sigma 7>司制)。在上述毛细管内填充有上述緩沖液的状态下，将上述试样注入到上述毛细管内，以10kV向上述毛细 管的两端施加电压，进行电泳。上述血红蛋白试样的注入从上 述毛细管的阳才及侧进^f于。通过415nm下的吸光度来4全测移动的 血红蛋白。予以说明，比较例2- 1为对未添加上述(b)表面 活性剂的试样也同样地进行电泳。将它们的结果示于图8的图。 该图中，含有上述(b)表面活性剂的试样的电泳图(实施例2 -1 )用虚线表示、不含上述(b)表面活性剂的试样的电泳图 (比较例2-2)用粗实线表示。如图所示，本实施例中，能够 将HbA0和HbS分离来冲企测。另外，上述4企测可以在6分钟以 内的短时间内实施。与此相对，本比较例中，无法将HbA0和 HbS分离来4企测。
(比專交例2 - 2)
使用十二烷基-D-麦芽糖苷代替十六烷基磺基甜菜碱作 为上述(b)表面活性剂。除此之外，与上述实施例2- l同样 地实施毛细管电泳。将其结果示于图9的图。如图所示，本比 较例中，虽然能够延迟曱基化Hb的检出时间，但仍无法将HbAO 和HbS分离来检测。 (比4交例2- 3 )
作为上述(b)表面活性剂，代替十六烷基磺基甜菜碱使用 上述Triton X- 100。除此之外，与上述实施例2 - 1同样地实 施毛细管电泳。将其结果示于图IO的图。如图所示，本比较例 中，无法冲全测Hb。 产业实用性
如上所述，本发明的利用毛细管电泳法的血红蛋白分析方 法是装置能够小型化、分析精度高、能够短时间内进行分析的 方法。本发明可以适用于临床检查、生化检查、医学研究等分析血红蛋白的全部领域中，其用途并无限定，可以适用于广泛 的领域。
权利要求
1. 一种分析方法，其为利用毛细管电泳法的血红蛋白分析方法，其特征在于，包括以下工序准备含有血红蛋白的试样的试样准备工序；准备含有缓冲液的毛细管的毛细管准备工序；向上述毛细管的缓冲液中导入上述试样，在上述毛细管的两端施加电压，使上述试样进行电泳的电泳工序；其中通过下述(A)和下述(B)中的至少一种方式实施电泳(A)在上述缓冲液中添加下述(a)表面活性剂来实施上述电泳(a)表面活性剂具有作为疏水部的烷基、具有作为亲水部的糖的非离子性表面活性剂；(B)在上述试样中添加下述(b)表面活性剂来实施上述电泳(b)表面活性剂甜菜碱型两性表面活性剂。
2. 根据权利要求l所述的分析方法，其中，上述(A)方 式中，在上述毛细管准备工序中将上述(a)表面活性剂添加于 上述緩沖液中。
3. 根据权利要求l所述的分析方法，其中，上述(a)表面 活性剂中，烷基的碳原子数为11 ~ 16的范围，糖为单糖或二糖。
4. 根据权利要求l所述的分析方法，其中，上述(a)表面 活性剂中，烷基为碳原子数11或12的直链状烷基，上述糖为二 糖。
5. 根据权利要求l所述的分析方法，其中，上述(B)方式 中，在上述试样准备工序中将上述(b)表面活性剂添加于上述 试样中。
6. 根据权利要求l所述的分析方法，其中，上述(b)表面活性剂为磺基甜菜碱型两性表面活性剂。
7. 根据权利要求l所述的分析方法，其中，在上述緩冲液中添加含阴极性基团的化合物，使上述血红蛋白和上述含阴极 性基团的化合物的复合体进行电泳。
8. 根据权利要求7所述的分析方法，其中，在上述毛细管 准备工序中，将上述含阴极性基团的化合物添加于上述緩沖液中。
9. 根据权利要求7所述的分析方法，其中，上述含阴极性 基团的化合物为含阴极性基团的多糖类。
10. 根据权利要求l所述的分析方法，其中，将HbAO和HbS分离。
11. 根据权利要求l所述的分析方法，其中，作为分析对象 的血红蛋白为选自HbAlc、 HbS、 HbC、 HbM、 HbH和HbF所组 成的组中的至少l个血红蛋白。
12. —种添加剂，其特征在于，其为在权利要求l所述的分 析方法中使用的毛细管电泳用的添加剂，含有下述(a)表面活 性剂和下述(b)表面活性剂中的至少l个(a) 表面活性剂具有作为疏水部的烷基、具有作为亲水 部的糖的非离子性表面活性剂；(b) 表面活性剂甜菜碱型两性表面活性剂。
全文摘要
本发明提供能够使装置小型化、分析精度高、可在短时间内分析的利用毛细管电泳法的血红蛋白分析方法。本发明的分析方法为利用毛细管电泳法的血红蛋白分析方法，其特征在于，包括以下工序准备含有血红蛋白的试样的试样准备工序；准备含有缓冲液的毛细管的毛细管准备工序；向毛细管的缓冲液中导入试样，在毛细管的两端施加电压，使试样进行电泳的电泳工序，其中通过下述(A)和下述(B)中的至少一种方式实施电泳。(A)在缓冲液中添加下述(a)表面活性剂来实施电泳。(a)表面活性剂具有作为疏水部的烷基、具有作为亲水部的糖的非离子性表面活性剂(B)在试样中添加下述(b)表面活性剂来实施上述电泳。(b)表面活性剂甜菜碱型两性表面活性剂。
文档编号G01N27/447GK101548181SQ20088000093
公开日2009年9月30日 申请日期2008年4月23日 优先权日2007年4月27日
发明者中山雄介, 米原聪 申请人:爱科来株式会社