一种测定(4r,6r)-6-胺乙基-2,2-二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药化工质量检测技术领域，具体涉及一种测定（4R，6R)-6-胺乙 基-2, 2-二甲基-1，3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯含量的方法。 【背景技术】
[0002] (4R，6R) -6-胺乙基-2, 2-二甲基-1，3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯，简写为ATS-9， 分子式为 C14H27NO4,英文命名为（4R, cis)_l, l-Dimethylethyl-6-aminoethyl_2, 2-dimethy 1-1，3-dioxane-4_acetate，其化学结构式为 ，是合成阿托伐他汀钙 HeN: 的关键中间体。阿托伐他汀钙商品名为立普妥，属于他汀类药物，是治疗高胆固醇血症和混 合型高脂血症的有效药物，由Warner-Lambert (华纳-兰伯特，现并入美国辉瑞公司）公司 研制，并于1997年获FDA批准在美国上市，其专利保护于2011年到期。
[0003] 作为合成阿托伐他汀钙的关键中间体，ATS-9的质量好坏直接影响最终产品阿 托伐他汀钙的质量和收率。目前ATS-9的合成及检测已有多篇文献报道，如Junjie Liu 等用（4R，6R)-6-叠氮乙基-2, 2-二甲基-1，3-二氧六环-4-乙酸甲酯为原料，碱性条件 水解，再同二碳酸二叔丁酯酯化，最后在三苯基膦催化下生成产物ATS-9 (Junjie Liu, Che-Chang Hsu, Chi-Huey Wong. Tetrahedron Letters, 45, 2439-2441) ;Fang-Jun Xiong等以（R)-2-氯-环氧乙烧为起始原料，经过多步反应最终合成ATS-9 (Fang-Jun Xiong, Jie Li, Xiao-Fei Chen, Wen-Xue Chen, Fen-Er Chen. Tetrahedron:Asymmet ry，25, 1205-1208);Yuji Kawato等以〇?)-5-苄基-3-羟基4，^二烷基戊烷硫代酰胺为原 料，经过多步反应合成出了 ATS-9 (Yuji Kawato, Mitsutaka Iwata, Ryo Yazaki, Naoya Kumagai, Masakatsu Shibasaki. Tetrahedron, 67, 6539_6546);Blackley用FactorFour VF-5MS (30m*0· 25mm)毛细管色谱柱对 ATS-9 进行 GC-MS 检测（Blackley, US 8563753B2, 2013. 10. 22)，但是没有对其含量测定的报道。为准确测定其含量，对其进行质量控制，进而 提高并保证阿托伐他汀钙的质量，建立一种能准确测定ATS-9含量的方法非常必要。
【发明内容】
[0004] 本发明解决的技术问题是提供了一种定量准确、方便可靠且重复性好的测定 (4R，6R)-6-胺乙基-2, 2-二甲基-1，3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯含量的方法，采用该方法 能使ATS-9及其有关物质相互之间实现很好的分离，使该方法也可测定其它有关物质。
[0005] 本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种测定（4R，6R)-6_胺乙 基-2, 2-二甲基-1，3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯含量的方法，其特征在于具体步骤为： (1) 配制供试品储备液，精密称取200mg ATS-9供试品置于IOmL容量瓶中并用溶剂 1，2-二氯乙烧稀释定容配制成质量浓度为20mg/mL的供试品储备液； (2) 配制对照品储备液，精密称取200mg ATS-9对照品置于IOmL容量瓶中并用溶剂 1，2-二氯乙烧稀释定容配制成质量浓度为20mg/mL的对照品储备液； (3) 配制内标储备液，精密称取200mg正十六烷置于IOmL容量瓶中并用溶剂1，2-二氯 乙烷稀释定容配制成质量浓度为20mg/mL的内标储备液； (4) 配制供试品溶液，精密移取0. 8mL供试品储备液和0. 4mL内标储备液置于5mL容量 瓶中并用溶剂1，2-二氯乙烷稀释定容，摇匀备用； (5) 配制对照品溶液，精密移取0. 8mL对照品储备液和0. 4mL内标储备液置于5mL容量 瓶中并用溶剂1，2-二氯乙烷稀释定容，摇匀备用； (6) 使用Agilent DB-624毛细管气相色谱柱对供试品溶液和对照品溶液进行检测，柱 温采用程序升温，柱温150°C保留2min，以40°C /min的升温速率升温至220°C保留3min，以 20°C /min的升温速率升温至240°C保留8min，以氢火焰离子化检测器为检测器，检测器温 度为300°C，汽化室温度为300°C，柱流速为2. 5mL/min，分流比为10: 1，氮气作为载气，空气 流量400mL/min，氢气流量35mL/min，尾吹气流量40mL/min，然后分别取步骤（4)和（5)配 制的供试品溶液和对照品溶液注入气相色谱仪，进样量分别为2 μ L ; (7) 根据气相色谱图采用内标法计算供试品溶液中ATS-9的含量。
[0006] 本发明选用的溶剂为1，2-二氯乙烷，因为ATS-9和内标物在该溶剂中溶解情况 好且不干扰主峰及有关物质的分离；内标物为正十六烷，因为正十六烷沸点（286. 79°C)与 ATS-9的沸点接近，出峰时间接近且与ATS-9能完全分离，在ATS-9及有关物质出峰位置 无干扰；所用毛细管气相色谱柱为Agilent DB-624,用此型号毛细色谱柱ATS-9峰形较 为对称，对称因子为1. 26,且主峰及主要有关物质峰的分离度符合要求；柱温采用程序升 温方式，因为恒温下沸点接近的杂质不能完全分离，故采用程序升温方式；汽化室温度为 300°C，在此温度下供试品能够完全汽化；柱流速为2. 5mL/min，该流速下产品出峰时间合 适，也是所选用毛细管气相色谱柱的最佳流速。
[0007] 本发明利用Agilent DB-624 (质量百分含量6%的氰丙基和质量百分含量94%的 甲基聚硅氧烷)毛细管气相色谱柱，采用GC方法、内标定量法使主成分与有关物质分离并准 确计算供试品溶液中ATS-9的含量。结果表明，ATS-9在0. 8128-4. 0638mg/mL(R2=0. 9992) 范围内，线性关系良好。本方法能够快速、准确、简便地检测阿托伐他汀钙关键中间体ATS-9 的含量，并且该方法也能够同时检测ATS-9中的其它有关物质的含量。
【附图说明】
[0008] 图1是本发明实施例1所述的气相色谱图； 图2是本发明实施例2所述的气相色谱图； 图3是本发明实施例3所述的气相色谱图； 图4是本发明实施例5所述色谱条件下各有关物质的保留时间； 图5是本发明实施例6中ATS-9对照品溶液的气相色谱图； 图6是本发明实施例6中ATS-9供试品溶液的气相色谱图； 图7是本发明实施例7中空白溶剂1，2-二氯乙烷溶液的气相色谱图； 图8是本发明实施例7中ATS-9对照品溶液的气相色谱图； 图9是本发明实施例7中ATS-9供试品溶液的气相色谱图。
【具体实施方式】
[0009] 以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本 发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发 明的范围。
[0010] 实施例中所用的仪器及试剂如下： Thermo Scientific Trace 1300气相色谱仪，配有AI 1310自动进样器；氢火焰离子 化检测器（FID);Chr〇mele〇n 7. 1色谱工作站；KQ3200DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪 器有限公司）；电子分析天平(梅特勒，十万分之一）； ATS-9 对照品（Toronto Research Chemicals Inc.批号 20130929,质量百分含 量为 98%) ;ATS-9 供试品（实验室自制，批号 20141012、20141101、20141205、20141210、 20141220、20150119、20150121、20150202);正十六烷、1，2-二氯乙烷、无水乙醇等试剂均为 国产分析纯。
[0011] 实施例1 采用 Thermo Fisher TG-624 毛细管气相色谱柱（30m*0. 32mm，1. 8 μL?);柱温 150°C保 留2min，以40°C /min的升温速率升温至220°C保留3min，以20°C /min的升温速率升温至 240°C保留8min ;汽化室温度300°C ;柱流速2. 5mL/min，分流比30:1 ;检测器为氢火焰离子 化检测器，温度为300°C ;载气为高纯氮气；进样量为2yL;空气流量400mL/min，氢气流量 35mL/min，尾吹气流量40mL/min。精密称定ATS-9供试品（批号20141012)适量置于IOmL 容量瓶中，用乙酸乙酯稀释定容配制成质量浓度约为20mg/mL的供试品储备液；精密移取 0. SmL上述供试品储备液置于5mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释定容摇匀即得供试品溶液。取 上述供试品溶液注入气相色谱仪，平行测定2次。气相色谱图如图1，由图1可以看出，该色 谱条件下，基线严重漂移，严重影响了分析结果的准确性。
[0012] 实施例2 采用Agilent DB-624毛细管气相色谱柱（30m*0. 32mm，l. 8μπι)，柱温240°C保留 20min ;汽化室温度250°C;柱流速1.0 mL/min，分流比20:1 ;检测器为氢火焰离子化检测器， 温度为270°C ;载气为高纯氮气；进样量为2 μ L ;空气流量400mL/min，氢气流量35mL/min， 尾吹气流量40mL/min。精密称定ATS-9供试品(批号20141101)适量置于IOmL容量瓶中， 用1，2-二氯乙烷稀释定容配制成质量浓度约为20mg/mL的供试品储备液；精密移取0. 8mL 上述供试品储备液置于5mL容量瓶中，用1，2-二氯乙烷稀释定容摇匀即得供试品溶液。取 上述供试品溶液注入气相色谱仪，平行测定2次。气相色谱图如图2,由图2可以看出，恒定 柱温时，峰个数明显偏少，表明这种色谱条件下，分离效果较差。
[0013] 实施例3 采用 Thermo Fisher TG-5MS 毛细管气相色谱柱（30m*0. 32mm，0.5 μ m)，柱温 100 °C 保留3min，以10°C /min的升温速率升温至320°C保留20min ;汽化室温度300°C ;柱流速 2.5mL/min，分流比30:1 ;检测器为氢火焰离子化检测器，温度为320°C ;载气为高纯氮气； 空气流量400mL/min，氢气流量35mL/min，尾吹气流量40mL/min ;进样量为2. 5 μ L。精密称 定ATS-9供试品（批号20141205)适量置于IOmL容量瓶中，用DMF稀释定容配制成质量浓 度约为20mg/mL的供试品储备液；精密移取供试品储备液1.0 mL置于5mL容量瓶中，用DMF 稀释定容摇匀即得供试品溶液。取上述供试品溶液注入色谱仪，平行测定2次。气相色谱 图如图3,由图3可以看出，尽管该色谱条件下主成分ATS-9与大部分杂质能够分离，但保留 时间为13. 368的杂质峰与主峰ATS-9 (出峰时间13. 217)过于