一种白芍马齿苋柠檬功能饮料中芍药苷含量的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物含量检测技术领域，涉及一种功能饮料中芍药苷的检测方法。
【背景技术】
[0002]白芍为常用中药，具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗之功能。芍药苷是白芍的主要有效成分。据文献报道，芍药苷含量的常规测定方法有比色法、薄层扫描法、气相色谱法、液相色谱法和毛细管区带电泳法等。以上方法均只针对药品中的芍药苷进行测定。
[0003]然而，近年来在欧美和日本等发达国家风靡着一种健康饮品一一功能饮料，该功能饮料主要含有钾、钠、钙、镁等电解质，成分与人体体液相似，饮用后更能迅速被身体吸收，及时补充人体因大量运动出汗所损失的水分和电解质(盐分)，使体液达到平衡状态。常见的功能饮料主要有以下几种:多糖类饮料、维生素饮料、矿物质饮料、运动类饮料、益生菌饮料、免疫类饮料和低能量饮料。
[0004]当饮用功能性饮料成为一种时尚时，这一产业及邻近产业也随之欣欣向荣。由于功能饮料中常加入有中药成分，比如添加有白芍，因而检测添加有白芍的功能饮料中芍药苷的含量就显得尤为重要，而现有的文献中还没有任何一篇文献公开有从功能饮料中测定芍药苷的方法。
【发明内容】
[0005]本发明的发明目的在于:针对现有技术存在的问题，提供一种用于测量白芍马齿苋柠檬功能饮料中芍药苷含量的检测方法，从而严格控制功能饮料中芍药苷的含量，确保功能饮料的功效。
[0006]为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为:
一种白芍马齿苋柠檬功能饮料中芍药苷含量的检测方法，其中所述白芍马齿苋柠檬功能饮料的配方为:
白芍浆170-210份，膳食纤维柠檬汁450-520份，马齿苋汁550-620份，白砂糖200-250份，茯苓60-140份，大麦300-500份，白萝卜籽100-200份，冬瓜40-80份，柠檬酸1-2份，阿斯巴甜20-40份，维生素C10-20份，柠檬酸钠30-50份，水10000-20000份；将白芍浆、膳食纤维柠檬汁、马齿苋汁、茯苓、大麦、白萝卜籽、冬瓜混合，粉碎，加入水煎煮，过滤，除去渣滓，在滤液中加入阿斯巴甜、维生素C、柠檬酸钠、梓檬酸，得到饮料；其检测方法为:
检测仪器与试剂:高效液相色谱仪、岛津LC-10AT型栗、岛津SPD-10AT型检测器、N2000色谱工作站、芍药苷峰由中国药品生物制品检定所提供；
色谱条件:色谱柱VP-ODS C18 (150mm X 4.6mm，5um);流动相:乙腈:水:冰醋酸=75:425:0.4 ;流速:1.0mL/min ;检测波长:230nm ;柱温:35° C ;进样量为5uL，色谱柱的理论塔板数按芍药苷峰计算不低于2000 ;
对照品溶液的制备:精密称取经五氧化二磷减压干燥36h的芍药苷对照品10mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度线，摇匀，精密量取ImL置1mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度线，摇匀，即得；
供试品溶液的制备:精密吸取10.0mL白芍马齿苋柠檬功能饮料置塞锥形瓶中，加入70%乙醇50mL，密塞，放置过夜，超声处理30min，摇匀，过滤，滤渣及滤器用70%乙醇20mL分3次-5次洗涤，洗液并入滤液中，蒸发至干，残渣加70%乙醇微热溶解，转移至25mL量瓶中，加70%乙醇至刻度线，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法:分别精密吸取上述两种对照品溶液和供试品溶液各5uL，注入高效液相色谱仪，测定，既得。
[0007]综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是:
本发明经过大量实验对流动相的组成、流速、色谱柱进行筛选；根据芍药苷的化学性质，对流动相的组成进行了大量筛选，最终确定米用体积比为75:425:0.4的乙臆-水-冰醋酸作为缓冲液，保证芍药苷和其他组分能很好的分离效果；流动相流速设置为l.0mL/min，芍药苷的峰形最好、分离度最好，色谱柱在35° C条件下分离效果最好；本发明所采用的检测方法可以灵敏、准确的检测芍药苷的含量，且采用该检测方法的分离效果好，检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确的评价功能饮料中芍药苷的含量及质量，对控制功能饮料生产过程中的质量、保证功能饮料的功效有重要作用。
【具体实施方式】
[0008]下面对本发明作详细的说明。
[0009]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0010]实施例1
一种白芍马齿苋柠檬功能饮料中芍药苷含量的检测方法，其中所述白芍马齿苋柠檬功能饮料的配方为，按重量份计:
白芍浆180份，膳食纤维柠檬汁460份，马齿苋汁580份，白砂糖220份，茯苓80份，大麦340份，白萝卜籽120份，冬瓜45份，柠檬酸I份，阿斯巴甜22份，维生素C12份，柠檬酸钠32份，水120000份；
其中，制备白芍浆时，将去皮称重后的白芍切片迅速放入亚硫酸氢钠0.05%、柠檬酸0.15%、抗坏血酸0.15%的混合液中护色20min，将白芍切片取出，并按照白芍切片:水=1:4的比例放入打浆机中制得白芍浆备用。
[0011]制备膳食纤维柠檬汁时，共可分五步走:步骤一，将新鲜无腐烂的柠檬洗净、去皮、去核、切薄片，将薄片柠檬放入榨汁机榨汁，将榨取的柠檬汁在82° C的温度下水浴6min，柠檬汁放入4° C的冰箱中密封保存备用；步骤二，柠檬皮切成小条并与步骤一中榨汁后的柠檬废渣依次经42° C的干燥箱中干燥4h、粉碎机粉碎、100目筛分、4° C的冰箱中密封保存备用；步骤三，将步骤二中的粉碎粉末按料液比1:25加入蒸馏水得混合溶液，调节混合溶液PH值为2.0，混合溶液在81° C的环境中酸解lOOmin，冷却过滤，滤渣烘干备用，滤液以3100 r/min离心处理16min，取上清液，并用4倍上清液体积的无水乙醇沉淀，静置24h后过滤，滤渣于52° C的环境中干燥3h，粉碎并过100目筛得到柠檬水溶性膳食纤维；步骤四，将酸解烘干后的滤渣粉碎过100目筛，筛下粉末按料水比1:15加入蛋白酶5g/kg得蛋白混合液，蛋白混合液依次经用磷酸缓冲液调节PH值至6.0、46° C恒温水浴水解lh、升温至65° C、按料水比1:10加入淀粉酶20g/kg酶解3h，酶解后的溶液依次经以5000r/min的转速离心lOmin、蒸馏水清洗沉淀3次、过滤沉淀、滤渣于42° C的干燥箱中干燥4h、粉碎、过100目筛即得柠檬非水溶性膳食纤维；步骤五，将步骤一中的柠檬汁、步骤三中的柠檬水溶性膳食纤维、步骤四中的柠檬非水溶性膳食纤维、稳定剂和白砂糖以一定比例混合调配成膳食纤维柠檬汁，膳食纤维柠檬汁再依次经41MPa的压力条件下均质两次、装罐、于87° C杀菌处理16min。所述稳定剂为CMC-Na和黄原胶，膳食纤维柠檬汁的各组分的混合比例按质量百分比设置为:柠檬汁:白砂糖:柠檬水溶性膳食纤维:柠檬非水溶性膳食纤维:CMC-Na:黄原胶=28:11:0.35:0.17:0.13:0.07。
[0012]制备马齿苋汁时:首先采用冷榨法榨取马齿苋汁，在马齿苋汁中加入0.05%的果胶酶并用塑料薄膜扎紧，在46° C的温度下水浴酶解4h，酶解后将马齿苋汁置于92° C中水浴灭酶16s，冷却，澄清备用。且马齿苋汁在澄清时，在马齿苋汁中加入0.07%的壳聚糖，并在46° C的温度下水浴1.5h，过滤，取澄清的马齿苋汁备用。
[0013]待白芍浆、膳食纤维柠檬汁和马齿苋汁制备完毕后，将茯苓、大麦、白萝卜籽、冬瓜依次进行混合、粉碎处理，并将粉碎后的混合粉料与白芍浆、膳食纤维柠檬汁、马齿苋汁混合，并向混合液中加入适量水，依次进行煎煮、过滤、除去渣滓得到滤液，然后再滤液中加入阿斯巴甜、维生素C、柠檬酸钠、柠檬酸，混合均匀即得到饮料。其检测方法为:
检测仪器与试剂:高效液相色谱仪、岛津LC-1OAT型栗、岛津SPD-1OAT型检测器、N2000色谱工作站、芍药苷峰由中国药品生物制品检定所提供；
色谱条件:色谱柱VP-ODS C18 (150mm X 4.6mm，5um);流动相:乙腈:水:冰醋酸=75:425:0.4 ;流速:1.0mL/min ;检测波长:230nm ;柱温:35° C ;进样量为5uL，色谱柱的理论塔板数按芍药苷峰计算不低于2000 ;
对照品溶液的制备:精密称取经五氧化二磷减压干燥36h的芍药苷对照品10mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度线，摇匀，精密量取ImL置1mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度线，摇匀，即得；
供试品溶液的制备:精密吸取10.0mL白芍马齿苋柠檬功能饮料置塞锥形瓶中，加入70%乙醇50mL，密塞，放置过夜，超声处理30min，摇匀，过滤，滤渣及滤器用70%乙醇20mL分3次-5次洗涤，洗液并入滤液中，蒸发至干，残渣加70%乙醇微热溶解，转移至25mL量瓶中，加70%乙醇至刻度线，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法:分别精密吸取上述两种对照品溶液和供试品溶液各5uL，注入高效液相色谱仪，测定，既得。
[0014]实施例2
一种白芍马齿苋柠檬功能饮料中芍药苷含量的检测方法，其中所述白芍马齿苋柠檬功能饮料的配方为，按重量份计:
白芍浆190份，膳食纤维柠檬汁490份，马齿苋汁600份，白砂糖230份，茯苓100份，大麦420份，白萝卜籽150份，冬瓜60份，梓檬酸I份，阿斯巴甜31份，维生素C15份，梓檬酸钠41份，水15000份。
[0015]其中，制备白芍浆时，将去皮称重后的白芍切片迅速放入亚硫酸氢钠0.05%、柠檬酸0.15%、抗坏血酸0.15%的混合液中护色20min，将白芍切片取出，并按照白芍切片:水=1:4的比例放入打浆机中制得白芍浆备用。
[0016]制备膳食纤维柠檬汁时，共可分五步走:步骤一，将新鲜无腐烂的柠檬洗净、去皮、去核、切薄片，将薄片柠檬放入榨汁机榨汁，将榨取的柠檬汁在85° C的温度下水浴8min，柠檬汁放入4° C的冰箱中密封保存备用；步骤二，柠檬皮切成小条并与步骤一中榨汁后的柠檬废渣依次经45° C的干燥箱中干燥4h、粉碎机粉碎、100目筛分、4° C的冰箱中密封保存备用；步骤三，将步骤二中的粉碎粉末按料液比1:25加入蒸馏水得混合溶液，调节混合溶液PH值为2.3，混合溶液在83° C的环境中酸解lOOmin，冷却过滤，滤渣烘干备用，滤液以3300 r/min离心处理18min，取上清液，并用4倍上清液体积的无水乙醇沉淀，静置24h后过滤，滤渣于55° C的环境中干燥3h，粉碎并过100目筛得到柠檬水溶性膳食纤维；步骤四，将酸解烘干后的滤渣粉碎过100目筛，筛下粉