接近，分离度低，严重影响结 果的准确性。
[0014] 实施例4 采用Agilent DB-624毛细管气相色谱柱（30m*0. 32mm，1. 8 μ m)，柱温150°C保留2min， 以40°C /min的升温速率升温至220°C保留3min，以20°C /min的升温速率升温至240°C保 留8min ;汽化室温度300°C ;柱流速2. 5mL/min，分流比10:1 ;检测器为氢火焰离子化检测 器，温度为300°C ;载气为高纯氮气；空气流量400mL/min，氢气流量35mL/min，尾吹气流量 40mL/min ;进样量为2 μ L。精密称定ATS-9供试品(批号20141220)适量置于IOmL容量瓶 中，用乙酸乙酯稀释定容配制成质量浓度约为20mg/mL的供试品储备液；精密移取供试品 储备液0. SmL置于5mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释定容摇匀即得供试品溶液。取上述供试 品溶液注入色谱仪，平行测定2次。结果表明，用乙酸乙酯做溶剂，样品稳定性变化较大，同 一批样品经过2h后再次测定，出峰时间t=10. 245的杂质所占比例明显增加（由0. 165%升 至0. 422%)。由此表明，乙酸乙酯做稀释剂，影响了样品纯度和含量的稳定性，若用其做溶剂 时必须新鲜配置，给测定带来了不便。
[0015] 实施例5 采用Agilent DB-624毛细管气相色谱柱（30m*0. 32mm，1. 8 μ m)，柱温150°C保留2min， 以40 °C /min的升温速率升温至220 °C保留3min，以20 °C /min的升温速率升温至240 °C保 留8min ;汽化室温度300°C ;柱流速2. 5mL/min，分流比10:1 ;检测器为氢火焰离子化检测 器，温度为300°C ;载气为高纯氮气；空气流量400mL/min，氢气流量35mL/min，尾吹气流量 40mL/min ;进样量为2 μ L。精密称定未经纯化的ATS-9供试品（批号20150202)适量置于 IOmL容量瓶中，用二氯乙烷稀释定容配制成质量浓度约为20mg/mL的供试品储备液；精密 移取供试品储备液0. SmL置于5mL容量瓶中，用1，2-二氯乙烷稀释定容摇匀即得供试品 溶液。取上述供试品溶液注入色谱仪，平行测定2次。气相色谱图如图4所示，由图可知， ATS-9及各有关物质能很好的分离。
[0016] 实施例6 采用Agilent DB-624毛细管气相色谱柱（30m*0. 32mm，1. 8 μ m)，柱温150°C保留2min， 以40 °C /min的升温速率升温至220 °C保留3min，以20 °C /min的升温速率升温至240 °C保 留8min ;汽化室温度300°C ;柱流速2. 5mL/min，分流比10:1 ;检测器为氢火焰离子化检测 器，温度为300°C ;载气为高纯氮气；空气流量400mL/min，氢气流量35mL/min，尾吹气流量 40mL/min ;进样量为2 μ L。内标法作为定量方法，内标物为正十六烷。分别精密称定ATS-9 供试品（批号20141101、20141205、20141210)适量置于IOmL容量瓶中，用1，2_二氯乙烷稀 释定容配制成质量浓度约为20mg/mL的供试品储备液；精密称定内标物正十六烷适量置于 IOmL容量瓶中，用1，2-二氯乙烷稀释定容配制成质量浓度约为20mg/mL的内标储备液；精 密移取0. 8mL供试品储备液和0. 4mL内标储备液置于5mL容量瓶中，用1，2-二氯乙烷稀释 定容摇匀即得供试品溶液。同法配制对照品溶液。
[0017] 分别取上述供试品溶液和对照品溶液注入色谱仪，每个批次平行测定2次。对照 品溶液气相色谱图如图5所示，供试品溶液气相色谱图如图6所示，由图可以看出，供试品 溶液ATS-9出峰时间为8. 428min，内标物出峰时间为6. 788min ;对照品溶液ATS-9出峰时 间为8. 428min，内标物出峰时间为6. 790min，对照品溶液和供试品溶液中ATS-9出峰时间 一致。按内标法计算ATS-9含量，三批ATS-9供试品中ATS-9含量分别为99. 01%、98. 96%、 99. 25%〇
[0018] 实施例7对本发明测定ATS-9含量的方法学考察 1、系统适用性 精密称定ATS-9对照品适量置于IOmL容量瓶中，用1，2-二氯乙烷稀释定容配制成质 量浓度约为20mg/mL的对照品储备液。精密称定ATS-9供试品（批号20141220)适量置于 IOmL容量瓶中，用1，2-二氯乙烷稀释定容配制成质量浓度约为20mg/mL的供试品储备液； 精密称定内标物正十六烷适量置于IOmL容量瓶中，用1，2_二氯乙烷稀释定容配制成质量 浓度约为20mg/mL的内标储备液；精密移取供试品储备液0. 8mL和内标储备液0. 4mL置于 5mL容量瓶中，用1，2_二氯乙烷稀释定容摇匀即得供试品溶液。在实施例5所述色谱条件 下，分别进样空白溶剂1，2-二氯乙烷、ATS-9对照品溶液和ATS-9供试品溶液，在ATS-9出 峰位置无杂质干扰，且其与内标物和相邻杂质分离度均大于1. 5,以ATS-9计，理论塔板数 均不低于80000,如图7-9所示。
[0019] 2、线性关系考察 精密称定ATS-9对照品适量置于IOmL容量瓶中，用1，2-二氯乙烷稀释定容配制成质 量浓度约为20mg/mL的对照品储备液；精密称定内标物正十六烷适量于IOmL容量瓶中，用 1，2-二氯乙烷稀释定容配制成质量浓度约为20mg/mL的内标储备液；分别精密移取对照品 储备液0. 2、0. 4、0. 5、0. 6、0. 8、0. 9、1.0 mL置于5mL容量瓶中，各加入内标储备液0. 4mL，用 1，2-二氯乙烷稀释定容摇匀即得对照品溶液。按实施例5色谱条件测定，进样量2 μ L，每 个浓度进样3次。以对照品峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标，以对照品的质量(mg) 与内标物质量（mg)比值为横坐标，线性回归得标准曲线回归方程为y=0. 5024x-0. 0566， R2=O. 9992。结果表明：ATS-9在0.8128-4. 0638mg/mL之间有良好的线性关系。
[0020] 3、色谱系统精密度试验 精密称取ATS-9供试品(批号20150119)适量，按实施例5中的方法和色谱条件，制备供 试品溶液进行检测。连续进样6次，所得样品峰面积与内标物峰面积比值的RSD为1. 38%， 表明该色谱系统精密度良好。
[0021] 4、重复性试验 精密称取ATS-9供试品(批号20150121) 6份，按实施例5中的方法和色谱条件配成供 试品溶液进行测定，每份平行测定3次。ATS-9平均含量为99. 67%，RSD为0. 65%，结果表明 该方法重复性良好。
[0022] 5、稳定性试验 精密称取ATS-9供试品(批号20150121)适量，按实施例5色谱条件配成供试品溶液进 行测定，分别在〇、l、2. 5、3. 5、4. 5、5. 5、6. 5h进样，结果表明ATS-9在6. 5h内稳定，供试品 峰面积与内标物峰面积比值的RSD为0. 58%，平均含量为99. 66%，含量RSD为0. 50%。
[0023] 另外，发明人在实验过程也尝试用甲醇、DMS0、二氯甲烷、DMF、丙酮和乙腈等溶剂 作为稀释溶剂，结果表明DMF或乙腈与内标物不互溶，DMSO或丙酮能引起溶液不稳定，二氯 甲烷或甲醇做溶剂与残留溶剂不能很好的分离。同时也尝试用正十二烷或正十七烷作为内 标物，结果显示正十二烷和正十七烷出峰时间与ATS-9均相差较远，均不适合作为内标物。 经过多次条件摸索，表明本发明所述的稀释溶剂选择1，2-二氯乙烷为最佳，内标物选用正 十六烷最佳。本发明所述色谱条件可对ATS-9及有关物质进行有效分离，使主成分和有 关物质能在20min内完全出峰，峰形及分离度良好，重复性佳，准确度高，故该方法适合对 ATS-9含量的定量分析，也可用来对其它有关物质进行测定，方法快速、准确、简便且重复性 好，可作为分析该产品理想的检测方法。
[0024] 以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该 了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原 理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入 本发明保护的范围内。
【主权项】
1. 一种测定（4R，6R)-6-胺乙基-2, 2-二甲基-1，3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯含量的 方法，其特征在于具体步骤为： (1) 配制供试品储备液，精密称取200mg ATS-9供试品置于IOmL容量瓶中并用溶剂 1，2-二氯乙烧稀释定容配制成质量浓度为20mg/mL的供试品储备液； (2) 配制对照品储备液，精密称取200mg ATS-9对照品置于IOmL容量瓶中并用溶剂 1，2-二氯乙烧稀释定容配制成质量浓度为20mg/mL的对照品储备液； (3) 配制内标储备液，精密称取200mg正十六烷置于IOmL容量瓶中并用溶剂1，2-二氯 乙烷稀释定容配制成质量浓度为20mg/mL的内标储备液； (4) 配制供试品溶液，精密移取0. 8mL供试品储备液和0. 4mL内标储备液置于5mL容量 瓶中并用溶剂1，2-二氯乙烷稀释定容，摇匀备用； (5) 配制对照品溶液，精密移取0. 8mL对照品储备液和0. 4mL内标储备液置于5mL容量 瓶中并用溶剂1，2-二氯乙烷稀释定容，摇匀备用； (6) 使用Agilent DB-624毛细管气相色谱柱对供试品溶液和对照品溶液进行检测，柱 温采用程序升温，柱温150°C保留2min，以40°C /min的升温速率升温至220°C保留3min，以 20°C /min的升温速率升温至240°C保留8min，以氢火焰离子化检测器为检测器，检测器温 度为300°C，汽化室温度为300°C，柱流速为2. 5mL/min，分流比为10: 1，氮气作为载气，空气 流量400mL/min，氢气流量35mL/min，尾吹气流量40mL/min，然后分别取步骤（4)和（5)配 制的供试品溶液和对照品溶液注入气相色谱仪，进样量分别为2 y L ; (7) 根据气相色谱图采用内标法计算供试品溶液中ATS-9的含量。
【专利摘要】本发明公开了一种测定(4R,6R)-6-胺乙基-2,2-二甲基-1,3-二氧六环-4-乙酸叔丁酯含量的方法。本发明是将ATS-9用1,2-二氯乙烷稀释，采用Agilent？DB-624毛细管气相色谱柱，氢火焰离子化检测器，设定适当的程序升温、汽化室温度和检测器温度，以氮气作载气，正十六烷为内标物进行检测，根据气相色谱图以内标法计算供试品溶液中ATS-9的含量。本发明可使ATS-9与有关物质及内标物进行有效分离，并且该方法快速、准确、简便且重复性好，为ATS-9质量标准的建立奠定了基础。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105136921
【申请号】CN201510497319
【发明人】徐桂清, 贾淑红, 姜玉钦, 张玮玮, 毛龙飞, 董文佩, 申家轩, 蒋涛, 李伟
【申请人】河南师范大学
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年8月14日