依度沙班及其异构体的分离方法
【专利摘要】本发明提供一种采用色谱法分离纯化依度沙班的方法，所述分离方法为色谱法，其色谱条件包括：填充剂为直链淀粉?三(3,5?二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶，流动相选自包含非极性溶剂和极性溶剂的混合溶液。本发明的方法通过色谱条件的选择，能够同时将依度沙班及其七种对映、非对应异构体相互分离，具有快速、简便、高效等特点。
【专利说明】
依度沙班及其异构体的分离方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种对依度沙班及其异构体杂质进行分析的方法，具体涉及用色谱法 对依度沙班及其对映及非对映异构体进行分离的方法，属于药物化学领域。
【背景技术】
[0002] 依度沙班(edoxaban，商品名：Savaysa)是日本第一三共株式会社研制的小分子口 服抗凝药，为凝血因子X(FXa)阻滞剂，2015年1月8日经美国Π )Α批准上市，用于降低非瓣膜 性心房颤动（房颤）患者的卒中和系统性栓塞风险。其化学名为N-(5-氯吡啶-2-基州'-[(13,21?，43)-4-(叱1二甲基氨甲酰基）]-2-[(5-甲基-4,5,6,7-四氢-1，3-噻唑并[5,4(3]-吡啶-2-甲酰胺基)环己基]草酰胺。依度沙班经化学合成得到，其分子在1，2,4位分别有手 性中心，理论上能够形成7种对映及非对映异构体，其结构式分别如下表1所示(其中依度沙 班为SRS构型化合物）：
[0003] 表1依度沙班及其七种异构体杂质
[0004]
[0005]
[0006] 依度沙班作为药品，必须有精确的分析方法来检测依度沙班中7种对映、非对映异 构体的含量。目前已有文献报道依度沙班对映、非对映异构体的合成方法，比如美国专利 US2012/0053349A1中报道了依度沙班及其7种对映、非对映异构体的合成方法，并公开了两 种采用高效液相色谱分离依度沙班及其杂质的方法，但是该方法只能使杂质两两分离，并 不能使依度沙班及其7种异构体杂质一次性相互分离。而本发明针对依度沙班及其7种对 映、非对映异构体的混合物，研究了其分离方法，可以使用一种色谱条件实现使依度沙班及 其7种对映、非对映异构体同时分离。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种快速、简便、高效的依度沙班及其对映、非对映异构体的 色谱分离方法。
[0008] 为实现上述目的，本发明的技术方案是：
[0009] -种依度沙班及其异构体的分离方法，其特征在于:所述分离方法为色谱法，其色 谱条件包括:填充剂为直链淀粉-三(3,5_二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶，流动相选自包含 非极性溶剂和极性溶剂的混合溶液。
[0010] 根据本发明的分离方法，所述色谱优选为高效液相色谱，洗脱可以为等度洗脱或 梯度洗脱。
[0011]根据本发明的分离方法，所述非极性溶剂可以选自正己烷、石油醚、正戊烷等中的 一种或其混合物。
[0012] 根据本发明的分离方法，所述极性溶剂可以为醇类溶剂，例如乙醇、异丙醇等中的 一种或其混合物。优选地，所述极性溶剂可以为醇类溶剂的混合物，如乙醇和异丙醇的混合 物。
[0013] 根据本发明的分离方法，所述流动相中还可以包含有机胺，所述有机胺可以选自 二乙胺、三乙胺等中的一种或其混合物。
[0014] 根据本发明的分离方法，所述流动相可以为包含正己烷和极性溶剂的混合溶液。
[0015] 根据本发明的分离方法，所述流动相可以为包含正己烷、极性溶剂和二乙胺的混 合溶液。
[0016] 根据本发明的分离方法，所述流动相还可以选自例如A、B、C和D的混合物，其中A选 自正己烷和/或石油醚和/或正戊烷，B选自乙醇，C选自异丙醇，D选自二乙胺和/或三乙胺。
[0017] 作为实例，所述流动相可以选自正己烷和/或石油醚和/或正戊烷--乙醇-异丙醇-二乙胺和/或三乙胺的混合物，例如选自正己烷-乙醇-异丙醇-二乙胺的混合物、正己烷-乙 醇-异丙醇-三乙胺的混合物、石油醚-乙醇-异丙醇-二乙胺的混合物、石油醚-乙醇-异丙 醇-三乙胺的混合物、正戊烷-乙醇-异丙醇-二乙胺的混合物、正戊烷-乙醇-异丙醇-三乙胺 的混合物。
[0018] 根据本发明的分离方法，所述流动相混合物中A、B、C、D各组分的体积比可以为40 ~70:10 ~50:1~40:0.1~0.5,优选50 ~65:10 ~45:1~35:0.1~0.3。作为实例，A、B、C、D 各组分的体积比可以为60:20:20:0.2;55:30:15:0.2;55:35:10:0.2;55:40:5:0.2;65:10: 30:0.2;或65:15:25:0.2。
[0019] 根据本发明的分离方法，优选地，所述流动相体系是无水的，例如A、B、C和D为无水 的;优选地，所述乙醇为无水乙醇，所述异丙醇为无水异丙醇。
[0020] 根据本发明的分离方法，采用的检测器可以为紫外检测器，优选检测波长290nm， 柱温40°C，流速 1.5ml/min;
[0021 ]依度沙班的异构体可以任选自依度沙班的对映异构体、非对映异构体的一种或多 种(例如2、3、4、5、6、7 )，其中依度沙班化合物的构型为SRS，所述对映异构体、非对映异构体 的相应构型选自 RSR、SRR、RSS、RRR、SSS、RRS、SSR。
[0022] 本发明还提供一种依度沙班及其对映、非对映异构体的含量检测方法，包括将依 度沙班及其异构体使用本发明的分离方法分离，然后测试各分离物的含量。
[0023] 本发明还提供如上所述的色谱条件在依度沙班分离纯化或依度沙班纯度分析中 的用途。
【附图说明】
[0024] 图 1 为H-A08 的 1HNMR 图谱
[0025] 图 2 为H-B08 的 1HNMR 图谱
[0026] 图 3为YDB-RSS的 1HNMR图谱
[0027] 图 4为 YDB-RSR的 1HNMR 图谱
[0028] 图 5为YDB-SSS的 1HNMR图谱
[0029] 图 6为YDB-SSR 的 1HNMR图谱 [0030]图 7 为YDB-RRS的 1HNMR图谱
[0031] 图 8为YDB-RRR 的 1HNMR图谱
[0032] 图 9为YDB-SRR 的 1HNMR图谱
[0033] 图 10 为 YDB-SRS 的 1HNMR 图谱
[0034]图11为YDB-RSS的高分辨质谱 [0035] 图12为YDB-RSR的高分辨质谱
[0036]图13为YDB-SSS的高分辨质谱 [0037] 图14为YDB-RRR的高分辨质谱
[0038] 图15为YDB-RRS的高分辨质谱
[0039]图16为YDB-SSR的高分辨质谱 [0040] 图17为YDB-SRR的高分辨质谱
[0041 ] 图18为YDB-SRS的高分辨质谱
[0042] 图19为YDB-SSR的紫外吸收图；
[0043] 图20为YDB-SRS的紫外吸收图；
[0044] 图21为YDB-SRR的紫外吸收图；
[0045]图22为8种杂质的混合溶液，以正己烷-无水乙醇-异丙醇-二乙胺(60:20:20:0.2) 为流动相的色谱图；
[0046]图23为8种杂质的混合溶液，以正己烷-无水乙醇-二乙胺(50:50:0.2)为流动相的 色谱图；
[0047]图24为8种杂质的混合溶液，以正己烷-异丙醇-二乙胺(60:40:0.2)为流动相的色 谱图；
[0048]图25为8种杂质的混合溶液，以正己烷-无水乙醇-二乙胺(60:40:0.2)为流动相的 色谱图；
【具体实施方式】
[0049] 本发明通过下述实施例进行详细说明。但本领域技术人员了解，下述实施例不是 对本发明保护范围的限制。任何在本发明基础上做出的改进和变化，都在本发明的保护范 围之内。除非另有说明，下列实施例的原料及试剂均为已知产品，本领域技术人员可商购获 得或自行制备。
[0050] 合成方法实施例
[0051] 实施例 1#-(5-氯吡啶-2-基)-妒-((11?，25,45)-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5- 甲基-4,5,6,7-四氢噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基)羰基]氨基}环己基）乙二胺(YDB-RSS)的合 成
[0052] 1-1: (1R，4R，5R)-4-碘-6-氧杂二环[3 · 2 · 1 ]辛-7-酮(YDB-A02)的合成
[0053]
[0054] 将YDB-A001 (236g，0 · 954mo 1)加入乙酸乙酯（1180ml)，2M盐酸（1062ml)中，搅拌 lh，分液，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，有机相用水，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干 燥，母液减压浓缩干，得油状产品(YDB-A01) 115g。
[0055] 将￥08401(1158,0.911111〇1)、碘化钾（196.78，1.185111〇1)、碳酸氢钠（99.56， 1.185mo 1)加入二氯甲烷（1150ml)、水（1140ml)中，搅拌lOmin。降温至10 °C，分批加入碘 (300.8g，1185mol)，室温反应2h。加入1N硫代硫酸钠水溶液（1L)，分液，水相用二氯甲烧萃 取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干。所得淡黄色固体，加 入石油醚搅拌30min，过滤，得类白色固体YDB-A02 (209g，90.98 % )。
[0056] 1-2:(1R，3S，4S)_3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-羟基环己烷羧酸乙酯(YDB-A04)的 合成
[0057]
[0058]将 YDB-A02(208.5g，0.827mol)溶于乙醇（1877ml)，升温至 90°C，加入碳酸钾 (137g，0.99mol)，回流2h，冷却至室温。滤液浓缩，加水，二氯甲烧，萃取，分液，水相用二氯 甲烷萃取，合并有机相，用水(500ml )、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩 至干，得黄色油状物(YDB-A03)141g。
[0059] 室温下，将YDB-A03 (140 · 8g，0 · 827mo 1)溶于N，N-二甲基甲酰胺（1L)，加入氯化铵 (65.58，1.22!11〇1)和叠氮化钠(79.58，1.22111〇1)，80°(：反应211。降至室温，加入乙酸乙酯和冰 水，萃取，分液，乙酸乙酯洗涤水相，合并有机相，用水、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠 干燥。氢气气氛下，向所得乙酸乙酯溶液中加入（8〇(：) 20(198.58,0.91111〇1)和10%钯炭 (14g)，搅拌过夜。过滤不溶物，滤液浓缩至干。所得粗品柱层析(正己烷：乙酸乙酯= 3:1~ 1:1)纯化。再用正己烷-二氯甲烷沉淀，过滤得白色固体YDB-A04(89.4g，收率37.5 % )。
[0060] 1-3:(11?，35,41〇-4-{[(苄氧基)羰基]氨基}-3-[(叔丁氧基)羰基]环己烷甲酸乙 酯(YDB-A08)和（11?，35,45)-4-{[(苄氧基)羰基]氨基}-3-[(叔丁氧基)羰基]环己烷甲酸乙 酯（YDB-B08)的合成
[0061]
[0062] YDB-A04(89.35g，0.311mol)溶于乙酸乙酯（1787ml)，0°C，加入三甲胺盐酸盐 (29.78,0.311!11〇1)、甲基磺酰氯（53.428,0.466111〇1)，滴加三乙胺（47.28,0.466111〇1)，反应 lh。反应完全后，加入饱和氯化铵水溶液，分液。有机相用饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠洗涤， 无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩至干，得白色固体(YDB-A05) 113.66g。
[0063] 将 丫08-厶05(113.68,0.31111〇1)，四丁基溴化铵(30.068,0.09111〇1)，叠氮钠(40.41 8， 0.62mo 1)加入N-甲基哌啶（1136ml)中，升温至80 °C反应15h，冷却至0 °C，加入水，乙酸乙酯， 萃取，分液。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过 滤，减压浓缩至干，得黄色油状物(YDB-A06) (72.2g，74.34 % )。
[0064] 将YDB-A06(72.2g，0.231mol)溶于乙醇（850ml)，氢气氛围下，加入10%钯碳 (8.5g)，升温至50-60°C反应2h。过滤钯碳，滤液减压浓缩至干，粗品柱层析(PE:EA = 1:1~ 丙酮)纯化，得无色油状产品（YDB-A07) (61.4g，93 % )。
[0065]将 YDB-A07(61.4g，0.214mol)溶于乙酸乙酯（600ml)，加入碳酸氢钠（27g， 0 · 32lmo 1)的水（300ml)溶液，降温至0 °C，滴加氯甲酸苄酯（40 · 1 g，0 · 235mo 1)，室温反应 30min。加入水、乙酸乙酯萃取，分液，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、饱和氯化钠 洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩至干，得油状产品11 〇g。加入乙酸乙酯(400ml)， 升温至70°C溶解，加入正己烷（1.5L)，室温搅拌30min，降至0°C搅拌30min，过滤，干燥，得白 色固体YDB-A08(44.7g，49.6 % );母液减压浓缩干，柱层析(PE: EA = 5:1~10:1)纯化，得无 色油状产品YDB-B08 (22 · 3g，24 · 7 % )。
[0066] 1-4:(1R，2S，4R)_2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(二甲基氨基)羰基]环己基氨基 甲酸苄基酯和（lR，2S，4S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(二甲基氨基)羰基]环己基氨基 甲酸苄基酯(YDB-A11)的合成
[0067]
[0068] 氩气保护下，将￥08^08(448,0.105111〇1)溶于4401111乙醇，滴加20%乙醇钠溶液 (48 · 9ml，0 · 126mol)，20-30°C反应10h，冰浴冷却，加入lmol/L磷酸二氢钠（880ml)，乙酸乙 酯（1L)，萃取，分液，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干 燥，减压浓缩，得白色固体混合物YDB-A09 (39g，89 % )。
[0069] 将YDB-A09(39g，0 · 093mo 1)溶于THF(780ml)，加入氢氧化锂（4 · 45g，0 · 186mol)的 水（195ml)溶液，升温至30-35°C反应3-4h。加入乙醚(780ml)和10%柠檬酸水溶液(780ml)， 萃取，分液，水相用乙醚萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，母液减压浓缩至干。残余物溶 于二氯甲烷（7801111)，室温下加入二甲胺盐酸盐（15.17 8,0.186111〇1)，!108丁（18.858， 0.14111〇1)40(：1(26.88,0.14111〇1)，三乙胺（32.98,0.326111〇1)，反应1811。加入饱和碳酸氢钠 水溶液(500ml )，萃取，分液，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液洗涤， 无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干得粗品。将粗品柱层析(DCM :Me0H = 30:l)洗脱，得无 色油状混合物YDB-A11 (30 · 2g，77 % )。
[0070] 1-5:(15,21?，51〇-2-({2-[(5-氯吡啶-2-基）氨基]-2-氧代乙酰基}氨基）-5-[(甲 基氨基)羰基]环己基氨基甲酸叔丁基酯(YDB-AC-RSS)和（lS，2R，5S)-2-({2-[(5-氯吡啶-2-基）氨基]-2-氧代乙酰基}氨基）-5-[(甲基氨基）羰基]环己基氨基甲酸叔丁基酯（YDB-AC-RSR)的合成
[0071]
[0072] 将YDB-All(30g，0.072mol)溶于甲醇（300ml)，氢气气氛下加入10%钯碳（3g)，室 温搅拌反应5h，过滤钯碳，滤液减压浓缩至干，得无色油状产品YDB-A12约37g。
[0073] 将油状产品溶于N，N-二甲基甲酰胺(300ml )，加入2- [(5-氯吡啶-2-基)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐（24·7g，0·094mol)，H0BT(12·7g，0·094mol)和EDCI(20·7g， 0.108mol)，升温至65-70°C反应4-5h。加入水，二氯甲烷萃取，分液。有机相用饱和碳酸氢钠 水溶液(500ml)和饱和氯化钠水溶液(500ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品柱层析 (PE:EA=l:l~2:lHIMt4#il」YDB-AC-RSS(5.5g，16.4%)，YDB-AC-RSR(11.9g，35.5%)。
[0074] 1-6:炉-(5-氯吡啶-2-基)-炉-((11?，23,43)-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5-甲 基_4,5,6,7_四氢噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基)羰基]氨基}环己基）乙二胺(YDB-RSS)的合成
[0075]
[0076] 符bg，U .Uiklmol;裕，)」μ 八m 和溫酸-乙醇溶液 (60ml)，室温反应18h。反应液减压浓缩。产品溶于DMF(300ml)，依次加入三乙胺（7.9g， 0.078111〇1)40(：1(2.76 8,0.014111〇1)，!1081'(8.88,0.065111〇1)，5-甲基-4,5,6,7-四氢[1，3]噻 唑并[5，4-c]吡啶-2-甲酸盐酸盐(3.38g，0.014mol)，室温条件下反应12h。加入水300ml，二 氯甲烷300ml，萃取，分液，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸 钠干燥，减压浓缩至干，柱层析(PE: EA= 1: 2)纯化，得固体3.7g，加入正己烷35ml打浆，得 YDB-RSS(1.9g，29.5%) </HNMR(400MHz，CDCl3)S :1.84-2.02(6H，m)，2.51(3H，s)，2.8卜2.98 (8H，m)，3.09(3H，s)，3.69-3.79(2H，dd，J = 15.6,24.8Hz)，4.39(2H，m)，7.73(lH，d，J = 8.8Hz)，8.00(lH，d，J = 8Hz)，8.22(lH，d，J = 8.8Hz)，8.30(lH，s)，8.55(lH，s)，9.70(lH， s)〇HRMS(ESI+)m/z = 548.1858[M+H] + 〇
[0077] 实施例 2#-(5_ 氯吡啶-2-基)-N2-((lR，2S，4R)-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5-甲基-4,5,6,7-四氢噻唑并[5,4- C]吡啶-2-基)羰基]氨基}环己基）乙二胺(YDB-RSR)的合 成
[0078] 2-1:
[0079]
[0080] 将YDB-AC-RSR( 11 · 9g，0· 025mol)溶于乙醇（600ml)，加入饱和盐酸-乙醇溶液 (130ml)，室温反应18h。反应液减压浓缩。产品溶于DMF(600ml)，依次加入三乙胺（16.4g， 0.163111〇1)40(：1(5.75 8,0.03111〇1)，!1081'(18.38,0.136111〇1)，5-甲基-4,5,6,7-四氢[1，3]噻 唑并[5，4-c]吡啶-2-甲酸盐酸盐(7.04g，0.03mol)，室温条件下反应12h。加入水，二氯甲 烷，萃取，分液，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减 压浓缩至干，柱层析(PE: EA = 1: 2)纯化，得固体(6.8g)，加入正己烷打浆，得YDB-RSR(4g， 28.8%)。咕匪1?(40冊抱，〇0(：13)3:1.69-2.13(6!1，111)，2.54(3!1，8)，2.82-2.95(8!1，111)，3.06 (3H，s)，3.74-3.76(2H，dd，J=15.2，23.6Hz)，4.12(lH，m)，4.70(lH，m)，7.39(lH，d，J= 8Hz)，7.67(lH，d，J = 8.4Hz)，8.04(lH，d，J = 7.2Hz)，8.17(lH，d，J = 8.8Hz)，8.30(lH，s)， 9.73(lH,s)〇
[0081] HRMS(ESI+)m/z = 548.1603[M+H]%m/z = 570.1417[M+Na] + 〇
[0082] 实施例 3Ni-(5-氯吡啶-2-基)-N2-((lS，2S，4S)-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5-甲基-4,5,6,7-四氢噻唑并[5,4- C]吡啶-2-基)羰基]氨基}环己基）乙二胺(YDB-SSS)的合 成
[0083] 3-1:(15,25,41〇-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(二甲基氨基)羰基]环己基氨基 甲酸苄基酯和（lS，2S，4S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(二甲基氨基)羰基]环己基氨基 甲酸苄基酯(YDB-B11)的合成
[0084]
[0085] 氩气保护下，将￥08-808(228,0.052!11〇1)溶于2201111乙醇，滴加20%乙醇钠溶液 (24 · 5ml，0 · 063mol)，20-30°C反应10h，冰浴冷却，加入lmol/L磷酸二氢钠(440ml)，乙酸乙 酯(500ml)，萃取，分液，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠 干燥，减压浓缩，得白色固体混合物YDB-B09 (20g，91 % )。
[0086] 将YDB-B09(20g，0 · 047mo 1)溶于THF(400ml)，加入氢氧化锂（2 · 25g，0 · 094mol)的 水（100ml)溶液，升温至30-35°C反应3-4h。加入乙醚(400ml)和10%柠檬酸水溶液(400ml)， 萃取，分液，水相用乙醚萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，母液减压浓缩至干。残余物溶 于二氯甲烷（4001111)，室温下加入二甲胺盐酸盐（7.66 8,0.094111〇1)，!1081'(9.538， 0.071111〇1)40(：1(13.58,0.071111〇1)，三乙胺（16.68,0.165111〇1)，反应1811。加入饱和碳酸氢 钠水溶液，萃取，分液，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水 硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干得粗品。将粗品柱层析洗脱，得无色油状混合物YDB-B11 (15.1g,75%)〇
[0087] 3-2:(15,25,51〇-2-({2-[(5-氯吡啶-2-基）氨基]-2-氧代乙酰基}氨基）-5-[(甲 基氨基)羰基]环己基氨基甲酸叔丁基酯(YDB-AC-SSR)和（15,25,55)-2-({2-[(5-氯吡啶- 2-基）氨基]-2-氧代乙酰基}氨基）-5-[(甲基氨基）羰基]环己基氨基甲酸叔丁基酯（YDB-AC-SSS)的合成
[0088]
[0089]将￥013_1311(158,0.0361]1〇1)溶于甲醇（1501111)，氢气气氛下加入10%钯碳（1.5区）， 室温搅拌反应5h，过滤钯碳，滤液减压浓缩至干，得无色油状产品YDB-B12约16g。将YDB-B12 溶于N，N-二甲基甲酰胺（150ml )，加入2-[ (5-氯吡啶-2-基)氨基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐 (12·4g，0·047mol)，H0BT(6·3g，0·047mol)和EDCI(10·4g，0·054mol)，升温至65°C反应5h。 加入水，二氯甲烷萃取，分液。有机相用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤，无 水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品柱层析(PE: EA = 1:1~2:1)纯化，得到YDB-AC-SSS(1.8g)， YDB-AC-SSR(3.7g)〇
[0090] 3-3:炉-(5-氯吡啶-2-基)-炉-((13,23,43)-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5-甲 基-4,5,6,7-四氢噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基)羰基]氨基}环己基）乙二胺(YDB-SSS)的合成
[0091]
[0092] 将YDB-AC-SSS (1.8g，3.85mmo 1)溶于乙醇（180m 1)，加入饱和盐酸-乙醇溶液 (17ml)，室温反应18h。反应液减压浓缩。产品溶于DMF( 180ml)，依次加入三乙胺（2.5g， 0.025111〇1)40(：1(0.898,4.62臟〇1)，!1081'(2.88,0.021111〇1)，5-甲基-4,5,6,7-四氢[1，3]噻 唑并[5，4-c]吡啶-2-甲酸盐酸盐（1. lg，4.62mmol)，室温条件下反应12h。加入水，二氯甲 烷，萃取，分液，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减 压浓缩至干，柱层析(PE:EA=1:2)纯化，得固体（1.18g)，加入正己烷打浆，得到YDB-SSS (0.74g，35.2% s)，2.85-2.96(7H，m)，2.96-3.04(4H，m)，3.67-3.88(3H，m)，4.68(lH，m)，7.21(lH，d，J= 8.8Hz)，7.69(lH，d，J = 8.8Hz)，8.01(lH，d，J = 8.8Hz)，8.22(lH，d，J = 8.8Hz)，8·26(1Η， s),9.63(lH,s)〇HRMS(ESI+)m/z = 548.1854[M+H] + 〇
[0093] 实施例 4Ni-(5-氯吡啶-2-基)-N2-((lS，2S，4R)-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5-甲基-4,5,6,7-四氢噻唑并[5,4- C]吡啶-2-基)羰基]氨基}环己基）乙二胺(YDB-SSR)的合 成
[0094] 4-1：
[0095]
[0096] 将￥08^(：-331?(3.78,7.9111111〇1)溶于乙醇（3001111)，加入饱和盐酸-乙醇溶液 (40ml)，室温反应18h。反应液减压浓缩。产品溶于DMF(300ml)，依次加入三乙胺（5.2g， 0.051111〇1)40(：1(1.828,9.48111111〇1)，!1081'(5.878,0.043111〇1)，5-甲基-4,5,6,7-四氢[1，3] 噻唑并[5,4-c]吡啶-2-甲酸盐酸盐(2.22 8,9.48!11111〇1)，室温条件下反应1211。加入水，二氯 甲烷，萃取，分液，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥， 减压浓缩至干，柱层析(PE:EA = 1:2)纯化，得固体(2.5g)，加入正己烷打浆，过滤得YDB-SSR (1.34g，31 % 14 (lH，m)，2·27(lH，m)，2.54(3H，s)，2.76(lH，m)，2.93(7H，m)，3·08(3Η，s)，3.73-3.89(3H, m),4.13(lH,m),7.41(lH,d ,J = 9.2Hz), 7.69( lH,d,J = 8Hz), 7.94( lH,d,J = 7.6Hz), 8.17 (lH，d，J = 8.8Hz)，8.27(lH，s)，9.63(lH，s)。
[0097] HRMS(ESI+)m/z = 548.18314[M+H] + 〇
[0098] 实施例 5Ni-(5-氯吡啶-2-基)-N2-((lR，2R，4S)-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5-甲基-4,5,6,7-四氢噻唑并[5,4- C]吡啶-2-基)羰基]氨基}环己基）乙二胺(YDB-RRS)的合 成
[0099] 5-1: (1S，4S，5S)-4-碘-6-氧杂二环[3 · 2 · 1 ]辛-7-酮(H-A02)的合成
[0100]
[0101]将!14001(44(^，1.78111〇1)加入乙酸乙酯（2.21^)，21盐酸（21^)中，搅拌111，分液，水 相用乙酸乙酯（500ml X 2)萃取，合并有机相，有机相用水，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干 燥，母液减压浓缩干，得油状产品（H-A01)233g。将!1^01(2338，1.85111 〇1)、碘化钾（398.48， 2.4mol)、碳酸氢钠(201.6,2.4mol)加入二氯甲烷(2L)、水(2L)中，搅拌lOmin。降温至10°C， 分批加入碘(609. lg，2.4mol)，室温反应2h。加入IN硫代硫酸钠水溶液（1.5L)，分液，水相用 二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干。所得淡黄 色固体，加入石油醚搅拌30min，过滤，得淡黄色固体H-A02 (400g，90 % )。
[0103]
[0102] 5-2: (1S，3R，4R)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-羟基环己烷羧酸乙酯(H-A04)的合 成
[0104]将^02(40(^，1.59111〇1)溶于乙醇（21^)，升温至90°(：，加入碳酸钾（263.78， 1.9lmo 1)，回流2h，冷却至室温。滤液浓缩，加水（1L)，二氯甲烧（1L)，萃取，分液，水相用二 氯甲烷萃取，合并有机相，用水、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干， 得淡黄色油状物(H-A03)272g。
[0105] 室温下，将11-厶03(27(^，1.59111〇1)溶于1.二甲基甲酰胺（21^)，加入氯化铵 (127.6 8,2.39!11〇1)和叠氮化钠（1558,2.39111〇1)，80°(：反应211。降至室温，加入乙酸乙酯（1〇 和冰水(1L)，萃取，分液，乙酸乙酯洗涤水相，合并有机相，用水、饱和氯化钠水溶液洗涤，无 水硫酸钠干燥。氢气气氛下，向所得乙酸乙酯溶液中加入(Boc) 20 (381.7g，1.75mo 1)和10 % 钯炭(27g)，搅拌过夜。过滤不溶物，滤液浓缩至干。加入石油醚（1L)室温搅拌2h，冰浴降温 搅拌1 h，过滤得白色固体H-A04(192g，42 % )。
[0106] 5-3:(15,31?，41〇-4-{[(苄氧基)羰基]氨基}-3-[(叔丁氧基)羰基]环己烷甲酸乙 酯(H-A08)和（15,31?，45)-4-{[(苄氧基)羰基]氨基}-3-[(叔丁氧基)羰基]环己烷甲酸乙酯 (H-B08)的合成
[0107]
[0108] 将H-A04(192g，0.668mol)溶于乙酸乙酯（3L)，0°C，加入三甲胺盐酸盐（63.8g， 0.668mol)、甲基磺酰氯（114.6g，lmol)，滴加三乙胺（101.2g，lmol)，反应lh。反应完全后， 加入饱和氯化铵水溶液(3L)，分液。有机相用饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠 干燥，过滤，母液减压浓缩至干，得白色固体(H-A05) 243g。
[0109]将 ^05(2438,0.665!11〇1)，四丁基溴化铵（64.38,0.2111〇1)，叠氮化钠（86.5 8， 1.33mo 1)加入N-甲基哌啶（2L)中，升温至80 °C反应15h，冷却至0 °C，加入水（1L)，乙酸乙酯， 萃取，分液。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过 滤，减压浓缩至干，得棕黄色油状物(H-A06) (155.8g，75 % )。
[0110] 将!1-六06(155.88,0.5111〇1)溶于乙醇（11^)，氢气氛围下，加入10%钯碳（15.68)，升 温至50-60 °C反应2h。过滤钯碳，滤液减压浓缩至干，得黄色油状产品H-A07 (142.3g)。
[0111] 将化六07(1428,0.496111〇1)溶于乙酸乙酯（1.3〇，加入碳酸氢钠（62.58,0.744111〇1) 的水(700ml)溶液，降温至0°C，滴加氯甲酸苄酯（93 . lg，0.546mol)，室温反应30min。加入 水、乙酸乙酯萃取，分液，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、饱和氯化钠洗涤，无水硫 酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩至干。加入乙酸乙酯，石油醚(3L)，室温搅拌2h，降至0°C搅拌 2h，过滤，干燥，得白色固体 H-B08( 112 J=7.2Hz)，1.43(10H，m)，1.55-2.04(5H，m)，2.39(lH，m)，3.69(lH，m)，4.09-4.16(3H，m)， 4.70(lH，m)，5·05-5·13(2H，m)，5·30(lH，s)，7.27-7.34(5H，m)。
[0112] 母液减压浓缩干，柱层析（PE : EA = 5 :1~10 :1)纯化，得淡黄色油状产品H-A08 (72.5,34.8^)^^1^(40010^,0)(:13)3:1.25-1.28(311,^ = 7.21^),1.40(1111,111),1.55 (lH，m)，1.97(lH，m)，2.12(lH，m)，2.41(lH，m)，2.73(lH，m)，3.33(lH，m)，3.61(lH，m)， 4.14-4.19(2H，q，J=7.2Hz)，4.59(lH，m)，5.07(2H，s)，5.36(lH，s)，7.32(5H，m)。
[0113] 5-4:(lR，2R，4S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(二甲基氨基)羰基]环己基氨基 甲酸苄基酯和（lR，2R，4R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(二甲基氨基)羰基]环己基氨基 甲酸苄基酯(Η-All)的合成
[0114]
[0115] 氩气保护下，将^08(72.58,0.172111〇1)溶于8001111乙醇，滴加20%乙醇钠溶液 (80ml，0.206mol)，20-30°C反应10h，冰浴冷却，加入lmol/L磷酸二氢钠(800ml)，乙酸乙酯 (800ml)，萃取，分液，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干 燥，减压浓缩，得白色固体混合物H-A09 (67.4g，93 % )。
[0116] 将H-A09 (67 · 4g，0 · 16mo 1)溶于THF(800ml)，加入氢氧化锂（7 · 66g，0 · 32mo 1)的水 (337ml)溶液，升温至30-35°C反应3-4h。加入乙醚(800ml)和10%柠檬酸水溶液(800ml)，萃 取，分液，水相用乙醚萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，母液减压浓缩至干。残余物溶于 二氯甲烷，室温下加入二甲胺盐酸盐（26.1g，0.32mol)，H0BT(32.4g，0.24mol)，EDCI(46g， 0.24mol)，三乙胺(56.7g，0.56mol)，反应18h。加入饱和碳酸氢钠水溶液，萃取，分液，水相 用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩 至干得粗品。将粗品柱层析(DCM: MeOH=30:1)洗脱，得无色油状混合物Η-Al 1 (49g，73 % )。
[0117] 5-5:(11?，21?，51〇-2-({2-[(5-氯吡啶-2-基)氨基]-2-氧代乙酰基}氨基)-5-[(甲 基氨基)羰基]环己基氨基甲酸叔丁基酯(YDB-AC-RRR)和（lR，2R，5S)-2-({2-[(5-氯吡啶-2-基）氨基]-2-氧代乙酰基}氨基）-5-[(甲基氨基）羰基]环己基氨基甲酸叔丁基酯（YDB-AC-RRS)的合成
[0118]
[0119]将H-AiU4yg，U. ii丁〒05Ht)UUmJJ卜加入 10%钯碳（4.9g)，室 温搅拌反应5h，过滤钯碳，滤液减压浓缩至干，得无色油状产品H-A12约48.7g。
[0120] 将油状产品H-A12溶于N，N-二甲基甲酰胺（500ml)，加入2-[(5_氯吡啶-2-基）氨 基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐（40.16g，0.152mol)，H0BT(20.56g，0.152molWPEDCI(33.6g， 0.176mol)，升温至70°C反应4h。加入水，二氯甲烧萃取，分液。有机相用饱和碳酸氢钠水溶 液和饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品柱层析纯化，得到￥08-八(：-RRR(12·5g，23 %)，YDB-AC-RRS(23g，46 %)。
[0121] 5-6:炉-(5-氯吡啶-2-基)-炉-((11?，21?，43)-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5-甲 基-4,5,6,7-四氢噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基)羰基]氨基}环己基）乙二胺(YDB-RRS)的合成
[0122]
[0123]将YDB-AC-RRS(23g，0.049mol)溶于460ml 乙腈中，加入甲基磺酸（23.5g， 0.245mol)，搅拌，降温至0°C，滴加三乙胺（32.2g，0.318mol)，升至室温，依次加入EDCI (11.38,0.059111〇1)，!1081'(6.98,0.051111〇1)，5-甲基-4,5,6,7-四氢[1，3]噻唑并[5,4-。]吡 啶-2-甲酸盐酸盐（13.8g，0.059mol)，室温下搅拌3h。加入水，二氯甲烷，搅拌，分液，水相用 二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干得粗 品，柱层析(DCM:MeOH = 30 :1)纯化得产品12. lg，加入正己烷打浆，过滤得YDB-RRS(7.5g， (lH，m)，2.49(3H，s)，2.76-2.90(5H，m)，2.95(3H，s)，3.07(3H，s)，3.65-3.70(2H，dd，J= 15.6,37.2Hz)，3.89(lH，m)，4.14(lH，m)，7.44(lH，d，J = 8.8Hz)，7.68(lH，d，J = 8.8Hz)， 7.96(lH，d，J = 8.4Hz)，8.17(lH，d，J = 8.8Hz)，8.27(lH，s)，9.65(lH，s)。
[0124] HRMS(ESI+)m/z = 548.18359[M+H] +，m/z = 570.16527[M+Na] +。
[0125] 实施例 6#-(5_ 氯吡啶-2-基)-N2-((lR，2R，4R)-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5-甲基-4,5,6,7-四氢噻唑并[5,4- C]吡啶-2-基)羰基]氨基}环己基）乙二胺(YDB-RRR)的合 成
[0126] 6-1：
[0127]
[0128] 将丫〇8-厶01^1?(12.58,0.027111〇1)溶于25〇1111乙腈中，加入甲基磺酸（12.8 8， 0.134mol)，搅拌，降温至0°C，滴加三乙胺（17.7g，0.175mol)，升至室温，依次加入EDCI (6.2g，0.032mol)，H0BT(3.8g，0.028mol)，5_甲基-4,5,6,7-四氢[1，3]噻唑并[5,4-。]吡 啶-2-甲酸盐酸盐(7.6g，0.032mo 1)，室温下搅拌3h。加入水，二氯甲烷，搅拌，分液，水相用 二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干得粗 品，柱层析(DCM:MeOH = 30 :1)纯化得产品6.6g，加入正己烷打浆，过滤得YDB-RRR(4.3g， 29.4%)〇1HNMR(400MHz,CDCl3)5：1.72(2H,m),2.01(3H,m),2.31(lH,m),2.54(3H,s),2.85-2.96(7H,m),3.04-3.07(4H,m),3.68-3.88(3H,m),4.68(lH,m),7.20(lH,d,J=7.6Hz), 7.67(lH,d ,J = 9.2Hz), 8.01( lH,d,J = 8.4Hz), 8.21( lH,d,J = 8.4Hz) ,8.26( 1H, s) ,9.63 (lH,s)。
[0129] HRMS(ESI+)m/z = 548.1855[M+H] + 〇
[0130] 实施例 7Ni-(5-氯吡啶-2-基)-N2-((lS，2R，4R)-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5-甲基-4,5,6,7-四氢噻唑并[5,4- C]吡啶-2-基)羰基]氨基}环己基）乙二胺(YDB-SRR)的合 成
[0131] 7-1:(15,21?，41〇-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(二甲基氨基)羰基]环己基氨基 甲酸苄基酯和（lS，2R，4S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(二甲基氨基)羰基]环己基氨基 甲酸苄基酯(H-B11)的合成
[0132]
[0133] 氩气保护下，将!1-808(1128,0.266111〇1)溶于11^乙醇，滴加20%乙醇钠溶液（1251111， 0.32111 〇1)，20-30°(：反应1011，冰浴冷却，加入1111〇1/1磷酸二氢钠（11^)，乙酸乙酯（11^)，萃取， 分液，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩， 得白色固体混合物H-B09 (97.4g，87 % )。
[0134] 将 ^09(97.48,0.23111〇1)溶于1'册（8001111)，加入氢氧化锂（118,0.46111〇1)的水 (500ml)溶液，升温至30-35°C反应4h。加入乙醚(800ml)和10%柠檬酸水溶液(800ml)，萃 取，分液，水相用乙醚萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，母液减压浓缩至干。残余物溶于 二氯甲烷，室温下加入二甲胺盐酸盐（37.5g，0.46mol)，H0BT(46.6g，0.345mol)，EDCI (66 · lg，0 · 345mo 1)，三乙胺（81 · 4g，0 · 805mo 1)，反应18h。加入饱和碳酸氢钠水溶液，萃取， 分液，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过 滤，减压浓缩至干得粗品。将粗品柱层析洗脱，得无色油状混合物H-Bll(69.6g，71.6%)。
[0135] 7-2:(11?，25,55)-2-({2-[(5-氯吡啶-2-基)氨基]-2-氧代乙酰基}氨基)-5-[(甲 基氨基)羰基]环己基氨基甲酸叔丁基酯(YDB-AC-SRS)和（lR，2S，5R)-2-({2-[(5-氯吡啶-2-基）氨基]-2-氧代乙酰基}氨基）-5-[(甲基氨基）羰基]环己基氨基甲酸叔丁基酯（YDB-AC-SRR)的合成
[0136]
[0137] 将H_Bll(69.5g，0.166mol)溶于甲醇(700ml)，氢气气氛下加入 10%钯碳(6.95g)， 室温搅拌反应5h，过滤钯碳，滤液减压浓缩至干，得无色油状产品H-Bl 2约62g。
[0138] 将油状产品H-B12溶于N，N-二甲基甲酰胺（700ml)，加入2-[(5_氯吡啶-2-基）氨 基]-2-氧代乙酸乙酯盐酸盐（57g，0.216mol)，H0BT(29.2g，0.216molWPEDCI(47.7g， 0.249mol)，升温至70°C反应5h。加入水，二氯甲烧萃取，分液。有机相用饱和碳酸氢钠水溶 液和饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品柱层析纯化，得到￥08-八(：-SRR(13.2g，17%)，YDB-AC-SRS(15.7g，20.3%)。
[0139] 7-3:炉-(5-氯吡啶-2-基)-炉-((13,21?，41〇-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5-甲 基-4,5,6,7-四氢噻唑并「5,4-01吡啶-2-基）羰基1氨基丨环己基）乙二胺(￥08-31?0的合成
[0140]
[0141] 将YDB-AC-SRR(13g，0.028mol)溶于260ml 乙腈中，加入甲基磺酸（13.3g， 0.139mol)，搅拌，降温至0°C，滴加三乙胺（18.4g，0.182mol)，升至室温，依次加入EDCI (6.448,0.034111〇1)，!1081'(48,0.029111〇1)，5-甲基-4,5,6,7-四氢[1，3]噻唑并[5,4-。]吡啶-2-甲酸盐酸盐(7.9g，0.034mol)，室温下搅拌3h。加入水，二氯甲烷，搅拌，分液，水相用二氯 甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干得粗品，柱 层析纯化得产品7.2g，加入正己烷打浆，过滤得YDB-SRR(4.5g，29.5 % )。
[0142] 4匪1?(4001抱，〇)(：13)3:1.83(3!1，111)，1.98(3!1，111)，2.53(3!1，8)，2.86-2.98(8!1，111)， 3.09(3H，s)，3.75(2H，dd，J=15.6,24.4Hz)，4.38(2H，m)，7.70(lH，d，J = 8Hz)，8.01(lH，d， J = 7.2Hz)，8.21(lH，d，J = 8.4Hz)，8.29(lH，s)，8.56(lH，s)，9.70(lH，s)。
[0143] HRMS(ESI+)m/z = 548.1845[M+H] + 〇
[0144] 实施例 8Ni-(5-氯吡啶-2-基)-N2-((lS，2R，4S)-4-[(二甲基氨基)羰基]-2-{[(5-甲基-4,5,6,7-四氢噻唑并[5,4- C]吡啶-2-基)羰基]氨基}环己基）乙二胺(YDB-SRS)的合 成
[0145] 8-1：
[0146]
[0147] 将丫08-八051^(15.58,0.033111〇1)溶于31〇1111乙腈中，加入甲基磺酸（15.9 8， 0.165mol)，搅拌，降温至0°C，滴加三乙胺（21.7g，0.214mol)，升至室温，依次加入EDCI (7.6g，0.04mol)，H0BT(4.68g，0.035mol)，5_甲基-4,5,6,7-四氢[1，3]噻唑并[5,4-。]吡 啶-2-甲酸盐酸盐(9.3g，0.04mo 1)，室温下搅拌3h。加入水，二氯甲烷，搅拌，分液，水相用二 氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩干得粗品， 柱层析纯化得产品8.4g，加入正己烷打浆，过滤得YDB-SRS(4.9g，27% )。
[0148] ^^^(40010^,00(:13)3:1.69-2.06(611,111),2.55(311,8)，2.86-2.88(3H，m)，2.95 (5H，m)，3.06(3H，s)，3.74(2H，dd，J=15.6,24.4Hz)，4.12(lH，m)，4.70(lH，m)，7.42(lH，d, J = 8Hz),7.69(lH,d ,J = 8.8Hz), 8.04( lH,d,J = 7.2Hz), 8.17( lH,d,J = 8.8Hz), 8.30( 1H, s)，9.73(lH，s).
[0149] HRMS(ESI+)m/z = 548.1841[M+H] + 〇
[0150] 实施例9高效液相色谱分离
[0151] 1.检测波长的初步选择
[0152] 本发明考察了依度沙班及其对映、非对映异构体在水中的紫外吸收，具体方法为： 取各杂质对照品适量，分别加水溶解制成每lml中含各对照品20yg的溶液，采用紫外-可见 分光光度法（中国药典2005年版二部附录IV A)测定，结果见表2和附图19-21。由于一般异 构体的吸收相近，所以本发明只测定了 3组异构体的紫外吸收。
[0153] 表2依度沙班及其异构体紫外吸收波长
[0154]
[0155] 结论：由图19、20和21及表2可知，依度沙班及其异构体在约290nm波长处有最大吸 收，所以选定检测波长为290nm〇
[0156] 2.流动相的选择与优化
[0157] 发明人采用如下色谱条件:直链淀粉-三(3，5_二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶为 填充剂的色谱柱；正己烷-无水乙醇-异丙醇-二乙胺（60:20:20:0.2)为流动相；检测波长 290nm;柱温为40°C，对依度沙班及其杂质的分离条件进行了摸索，部分实验结果见表3和附 图22。
[0158] 表3流动相的选择
[0159]
[0160] 由图22及表3可知，依度沙班及其对映、非对映异构体的混合物在正己烷-无水乙 醇-异丙醇-二乙胺(60:20:20:0.2)为流动相的色谱条件下，依度沙班及其对映、非对映异 构体的分离度较好，保留时间适中。因此该流动相条件适合对依度沙班及其对映、非对映异 构体的高效液相色谱分离。
[0161 ]具体色谱条件及方法如下：
[0162]色谱条件:直链淀粉-三(3,5_二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶为填充剂的色谱柱 (厂商:Welch，品牌:CHIRALPAK(中文名：大赛璐），型号：IA，规格:4.0_\1〇!111，54111，编号： 80311);正己烷-无水乙醇-异丙醇-二乙胺(体积比为60 :20: 20:0.2)为流动相；检测波长 290nm;柱温为 40°C。
[0163] 依度沙班及其对映、非对映异构体对照品溶液的制备：分别取SRS、RSR、SRR、RSS、 RRR、SSS、RRS与SSR对照品适量，取少量甲醇分别溶解并用无水乙醇稀释，制成每lml中分别 含 SRS、RSR、SRR、RSS、RRR、SSS、RRS、SSR杂质约 1 OOyg 的溶液。
[0164] 依度沙班及其杂质对照品混合溶液的制备：分别取SRS、RSR、SRR、RSS、RRR、SSS、 RRS与SSR杂质对照品溶液各lml，置于10ml量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，摇匀，即得。
[0165] 测定方法:取杂质对照品混合溶液20μ1注入高效液相色谱仪，并记录色谱图。
[0166] 检测结果表明，依度沙班SRS及构型分别为1^1^1^、1^、1?^、333、1?1?、331?的各异 构体相互之间的分离度较好。
[0167] 实施例10高效液相色谱分离
[0168] 使用实施例9相同的条件和方法进行分离检测，仅将流动相替换为正己烷-无水乙 醇-异丙醇-二乙胺(体积比为55:30:15:0.2)。
[0169] 实施例11高效液相色谱分离
[0170]使用实施例9相同的条件和方法进行分离检测，仅将流动相替换为正己烷-无水乙 醇-异丙醇-二乙胺(体积比为55:35:10:0.2)。
[0171]实施例12高效液相色谱分离
[0172]使用实施例9相同的条件和方法进行分离检测，仅将流动相替换为正己烷-无水乙 醇-异丙醇-二乙胺(体积比为55:40:5:0.2)。
[0173]实施例13高效液相色谱分离
[0174]使用实施例9相同的条件和方法进行分离检测，仅将流动相替换为正己烷-无水乙 醇-异丙醇-二乙胺(体积比为65:10:30:0.2)。
[0175]实施例14高效液相色谱分离
[0176]使用实施例9相同的条件和方法进行分离检测，仅将流动相替换为正己烷-无水乙 醇-异丙醇-二乙胺(体积比为65:15:25:0.2)。
[0177]实施例15高效液相色谱分离
[0178]使用实施例9相同的条件和方法进行分离检测，仅将流动相替换为正己烷-无水乙 醇-异丙醇-三乙胺(体积比为60:20:20:0.2)。
[0179] 对比例1:
[0180]使用实施例9相同的条件和方法进行分离检测，仅将流动相替换为正己烷-无水乙 醇-二乙胺(体积比为50:50:0.2)。检测结果见图23。
[0181] 对比例2:
[0182]使用实施例9相同的条件和方法进行分离检测，仅将流动相替换为正己烷-异丙 醇-二乙胺(体积比为60:40:0.2)。检测结果见图24。
[0183] 对比例3:
[0184]使用实施例9相同的条件和方法进行分离检测，仅将流动相替换为正己烷-无水乙 醇-二乙胺(体积比为60:40:0.2)。检测结果见图25。
[0185] 实施例9-15以及对比例1-3的检测结果
[0186] 表4给出了在其它条件相同，仅改变流动相体系的情况下，根据对包含依度沙班及 其对映、非对映异构体的混合物样品分离谱图汇总的结果：
[0187] 表4不同流动相体系的分离效果
[0188]
L〇189」以上结果表明，在本友明的色谱条仵卜，依度沙班及其对映、非对映异构体能够较 好分离。
【主权项】
1. 一种依度沙班及其异构体的分离方法，其特征在于:所述方法为色谱法，其色谱条件 为:填充剂选自直链淀粉-三(3，5-二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶，流动相选自包含非极性 溶剂和极性溶剂的混合溶液。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于:所述非极性溶剂可以选自正己烷、石油醚、正 戊烷等中的一种或其混合物； 所述极性溶剂可以为醇类溶剂，例如乙醇、异丙醇等中的一种或其混合物;优选地，所 述极性溶剂可以为醇类溶剂的混合物，如乙醇和异丙醇的混合物。3. 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述流动相中还可以包含有机胺，所述有 机胺可以选自二乙胺、三乙胺等中的一种或其混合物。4. 如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述流动相选自A、B、C和D的混合 物，其中A选自正己烷和/或石油醚和/或正戊烷，B选自乙醇，C选自异丙醇，D选自二乙胺和/ 或三乙胺； 优选地，所述流动相可以选自正己烷和/或石油醚和/或正戊烷一乙醇-异丙醇-二乙胺 和/或三乙胺的混合物，例如选自正己烷-乙醇-异丙醇-二乙胺的混合物、正己烷-乙醇-异 丙醇-三乙胺的混合物、石油醚-乙醇-异丙醇-二乙胺的混合物、石油醚-乙醇-异丙醇-三乙 胺的混合物、正戊烷-乙醇-异丙醇-二乙胺的混合物、正戊烷-乙醇-异丙醇-三乙胺的混合 物。5. 如权利要求4所述的方法，其中所述流动相混合物中A、B、C、D各组分的体积比可以为 40 ~70:10 ~50:1~40:0.1~0.5,优选 50 ~65:10 ~45:1~35:0.1~0.3; 例如，A、B、C、D各组分的体积比可以为60:20:20:0·2 ;55:30:15:0·2;55 :35:10:0·2; 55:40:5:0·2;65:10:30:0·2;或65:15:25:0·2。6. 如权利要求4或5所述的方法，其中所述流动相体系是无水的，例如A、B、C和D为无水 的;优选地，所述乙醇为无水乙醇，所述异丙醇为无水异丙醇。7. 如权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于:所述色谱为高效液相色谱，洗脱选 自等度洗脱或梯度洗脱。8. 如权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于色谱条件包括，采用的检测器为紫外 检测器，检测波长290nm，柱温40°C，流速1.5ml/min。9. 一种依度沙班及其对映、非对映异构体的含量检测方法，包括将依度沙班及其异构 体使用权利要求1-8任一项的分离方法分离，然后测试各分离物的含量。10. 如权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于:所述依度沙班及其异构体中含有 依度沙班的一种或多种异构体，且所述异构体的构型包括RSR、SRR、RSS、RRR、SSS、RRS、SSR。
【文档编号】C07D513/04GK106008556SQ201610354097
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月25日
【发明人】程增江, 李成云, 梁飞, 郑晶, 郑祖爽, 祝晓艳
【申请人】科贝源(北京)生物医药科技有限公司