一种普瑞巴林手性异构体的分离检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种普瑞巴林手性异构体的分离检测方法，属分析化学领域。 技术背景
[0002] 普瑞巴林化学名为（S)-3_(胺甲基）-5_甲基己酸，用于治疗癫痫和神经疼痛。普 瑞巴林手性异构体几乎没有药理活性，其化学名为（R)-3-(胺甲基）-5-甲基己酸，是普瑞 巴林的重要杂质，也是控制普瑞巴林质量的重要指标。但普瑞巴林为末端吸收，且紫外吸收 不强，现有技术中：中国发明专利（专利号：200510057381. 8,一种普瑞巴林手性异构体的 分离测定方法）、印度药典2010版第1960~1961页普瑞巴林专论及国家标准YBH02442013 普瑞巴林中均是米用Ν α-(5_氟_2,4_二硝基苯基）_L_氨基酸类化合物为衍生化试剂进 行衍生化，再经后处理后进入液相色谱系统进行分析，这几篇文献中的衍生方法均需要先 将普瑞巴林用盐酸溶解再用氢氧化钠中和再与衍生试剂溶液在加热条件下进行衍生化，且 反应结束后需在五氧化二磷和氢氧化钾体系中进行减压干燥以去除沸点低的有机溶剂，再 用其它溶剂溶解并过滤以制备供试品溶液，后处理非常麻烦，给定量操作带来很多不可避 免的误差，尽管后来专利号为200910045925. 7 (普瑞巴林及其手性异构体的分离检测方 法）采用微波衍生法：取样品溶液20 μ 1，衍生试剂溶液200 μ 1和0. 05mol/L三乙胺溶液 20 μ 1，600W微波加热衍生3min，再冷却至室温后加0. 05mol/L醋酸溶液20 μ 1，作为供试品 溶液，此方法虽然避免了后续处理的繁琐步骤，但其要配制样品溶液、衍生化溶液、三乙胺 溶液及醋酸溶液，且加样量较小，仍比较麻烦，且易产生误差。
[0003] 本发明提供的一种柱前衍生化方法与手性色谱柱即可实现普瑞巴林与其手性异 构体分离的测定方法，可较为迅速准确的实现普瑞巴林及其手性异构体的分离和测定。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种普瑞巴林手性异构体的分离检测方法，该方法采用衍 生化试剂芴甲氧羰酰氯与普瑞巴林及其手性异构体同时进行衍生化反应，再经手性色谱柱 进行分离测定。
[0005] 为实现上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
[0006] 普瑞巴林在进柱前用衍生化试剂进行衍生化，其衍生试剂为芴甲氧羰酰氯，其分 离测定过程包括：
[0007] ①色谱条件：
[0008] 采用CHIRALPAK ? AD-H手性色谱柱为色谱柱，以正己烷与无水乙醇混合物（比 例为98 : 2~85 : 15,必要时可添加不大于5%的无水甲醇）为流动相，检测波长为200~ 230nm，流速为0. 6~I. 2ml/min，柱温15~40°C，进样体积为10~20 μ 1，等度洗脱程序。
[0009] ②溶液配制：
[0010] 供试品溶液：取普瑞巴林25mg，加荷甲氧羰酰氯（40~200mg)置50ml量瓶中，加 无水乙醇超声溶解后，再用无水乙醇或正己烷定容至刻度，作为供试品溶液；
[0011] 系统适用性溶液：取普瑞巴林混旋物25mg，加芴甲氧羰酰氯（40~200mg)置50ml 量瓶中，加无水乙醇超声溶解后，再用无水乙醇或正己烷定容至刻度，作为系统适用性溶 液。
[0012] ③测定方法：精密量取供试品溶液和系统适用性溶液注入液相色谱仪，记录色谱 图，按归一化法计算普瑞巴林异构体含量。
[0013] 综上，本发明具有以下优点：
[0014] 1、本发明采用芴甲氧羰酰氯普瑞巴林进行柱前衍生，不但使衍生后的产物具有较 强的紫外吸收，而且不需要进行衍生后处理，可方便快捷的测定普瑞巴林的手性异构体；
[0015] 2、本发明具有反应条件温和、反应速度快、过量衍生化试剂不干扰测定等优点；
[0016] 3、本发明衍生化产物稳定，分析灵敏度高，普瑞巴林手性异构体的定量限为 0· 02%〇
[0017] 附图：
[0018] 图1实施例1系统适用性溶液高效液相色谱图（正己烷：无水乙醇：85 : 15)
[0019] 图2实施例2系统适用性溶液高效液相色谱图（正己烷：无水乙醇：95 : 5)
[0020] 图3实施例3系统适用性溶液高效液相色谱图（正己烷：无水乙醇：无水甲醇 90 ： 5 ： 5)
[0021] 图4实施例4系统适用性溶液高效液相色谱图（正己烷：无水乙醇：90 : 10)
【具体实施方式】
[0022] 以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用 于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0023] 实施例1
[0024] (1)仪器与条件
[0025] 流动相：正己烧-无水乙醇=85 : 15
[0026] 检测波长：208nm
[0027] 色谱柱：CHIRALPAK? AD-H 250 X 4. 5mm，5 μ m
[0028] 流速：1.0ml/min
[0029] 柱温：35°C
[0030] 进样量：20ul
[0031] (2)实验步骤
[0032] 取普瑞巴林混旋物25mg，加荷甲氧羰酰氯50mg置50ml容量瓶中，加无水乙醇超声 溶解后再用无水乙醇定容至刻度摇匀，作为系统适用性溶液。
[0033] 取系统适用性溶液在上述条件下进行分析。结果见图1，其中保留时间为 8. 393min的为普瑞巴林，其中保留时间为9. 835min为普瑞巴林异构体，其余峰为未反应完 的衍生试剂的峰，两者分离度为2. 352。
[0034] 实施例2
[0035] (1)仪器与条件
[0036] 流动相：正己烧-无水乙醇=95 : 5
[0037] 检测波长：205nm
[0038] 色谱柱：CHIRALPAK? AD-H 250 X 4. 5mm，5 μ m
[0039] 流速：L0ml/min
[0040] 柱温：25 °C
[0041] 进样量：20ul
[0042] (2)实验步骤
[0043] 取普瑞巴林混旋物25mg，加荷甲氧羰酰氯75mg置50ml容量瓶中，加无水乙醇 20ml超声溶解后在用正己烷定容至刻度摇匀，作为系统适用性溶液。
[0044] 取系统适用性溶液在上述条件下进行分析。结果见图2,其中保留时间为 23. 027min为普瑞巴林，其中保留时间为28. 313min为普瑞巴林异构体，其余峰为未反应完 的衍生试剂的峰，分离度为3. 32。
[0045] 实施例3
[0046] (1)仪器与条件
[0047] 流动相：正己烧-无水乙醇-无水甲醇=90 : 5 : 5
[0048] 检测波长：2IOnm
[0049] 色谱柱：CHIRALPAK? AD-H 250 X 4. 5mm，5 μ m
[0050] 流速：0· 8ml/min
[0051] 柱温：25°C
[0052] 进样量：20ul
[0053] ⑵实验步骤
[0054] 取普瑞巴林混旋物25mg，加荷甲氧羰酰氯IOOmg置50ml容量瓶中，加无水乙醇 20ml超声溶解后再用正己烷定容至刻度摇匀，作为系统适用性溶液。
[0055] 取系统适用性溶液在上述条件下进行分析。结果见图3,其中保留时间为 21. 426min为普瑞巴林，其中保留时间为25. 807min为普瑞巴林异构体，其余峰为未反应完 的衍生试剂的峰，分离度为3. 09。
[0056] 实施实例4
[0057] (1)仪器与条件
[0058] 流动相：正己烧-无水乙醇=90 : 10
[0059] 检测波长：205nm
[0060] 色谱柱：CHIRALPAK? AD-H 250 X 4. 5mm，5 μ m
[0061] 流速：1.0ml/min
[0062] 柱温：30°C
[0063] 进样量：20ul
[0064] (2)实验步骤
[0065] 取普瑞巴林混旋物25mg，加荷甲氧羰酰氯50mg置50ml容量瓶中，加无水乙醇 20ml超声溶解后再用正己烷定容至刻度摇匀，作为系统适用性溶液。
[0066] 取系统适用性溶液在上述条件下进行分析。结果见图4,其中保留时间为 18. 436min为普瑞巴林，其中保留时间为22. 198min为普瑞巴林异构体，其余峰为未反应完 的衍生试剂的峰，分离度为2. 99。
[0067] 最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明， 尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可 以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。 凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的 保护范围之内。
【主权项】
1. 一种分离测定普瑞巴林手性异构体的方法，其特征在于：该方法以芴甲氧羰酰氯为 衍生化试剂进行柱前衍生普瑞巴林，以CHIRALPAK?AD-H手性色谱柱为色谱柱，正已烷 与无水乙醇的混合物为流动相，通过高效液相色谱法进行普瑞巴林手性异构体的分离测 定。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：普瑞巴林与衍生化试剂的摩尔比为 1 : 1 ~1 : 5〇
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：流动相为正已烷与无水乙醇混合物，比例 为98 : 2~85 : 15,必要时可添加不大于5%的无水甲醇。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：其色谱条件包括：采用CHIRALPAK? AD-H手性色谱柱为色谱柱，以正已烷与无水乙醇混合物（比例为98 : 2~85 : 15,必要时 可添加不大于5%的无水甲醇）为流动相，检测波长为200~230nm，流速为0. 6~1. 2ml/ min，柱温15~40°C，进样体积为10~20y1，等度洗脱程序。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：检测过程包括供试品溶液的制备、系统适 用性溶液的制备和液相测定三个步骤： ① 供试品溶液：取普瑞巴林25mg，加荷甲氧羰酰氯（40~200mg)置50ml量瓶中，加无 水乙醇超声溶解后，再用无水乙醇或正已烷定容至刻度，作为供试品溶液； ② 系统适用性溶液：取普瑞巴林混旋物25mg，加荷甲氧羰酰氯（40~200mg)置50ml量 瓶中，加无水乙醇超声溶解后，再用无水乙醇或正已烷定容至刻度，作为系统适用性溶液。 ③ 测定方法：精密量取供试品溶液和系统适用性溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，按 归一化法计算普瑞巴林异构体含量。
【专利摘要】本发明提供了一种普瑞巴林手性异构体的衍生化分离检测方法，属分析化学领域。该方法以芴甲氧羰酰氯为衍生化试剂进行柱前衍生普瑞巴林，以CHIRALPAK手性色谱柱为色谱柱，正已烷与无水乙醇的混合物为流动相，通过高效液相色谱法进行分离测定。本发明提供的柱前衍生化方法具有反应条件温和、衍生产物稳定，反应速度快、副反应少、过量衍生化试剂不干扰测定，可实现普瑞巴林及其手性异构体分离等优点。
【IPC分类】G01N30-06, G01N30-88
【公开号】CN104777263
【申请号】CN201510193642
【发明人】尚宝虎, 王雪
【申请人】北京紫萌同达科技有限公司
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年4月23日