东风桔药材指纹图谱的构建方法和检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药材检测领域，特别是涉及东风桔指纹药材图谱的构建方法和检测方 法。
【背景技术】
[0002] 东风桔为芸香科酒饼簕属植物的根，气香，味微辛、苦，性温。具有祛风散寒、行气 止痛功效，用于治疗支气管炎、风寒咳嗽、感冒发烧、风湿性关节炎、慢性胃炎、胃溃疡及跌 打肿痛等。
[0003] 东风桔为树根，目前中药材有多种外观与其相似的易混淆品，而现有的检测是否 为东风桔的方法较为复杂，如通过对东风桔的根和茎分别作性状、显微观察等研宄进行鉴 另Ij，其结果也不够直观全面，误差较大。
[0004] 因此，有必要建立一种准确、简便、全面、直观的东风桔药材检测方法。
【发明内容】
[0005] 基于此，有必要提供一种东风桔药材指纹图谱的构建方法和检测方法。
[0006] -种东风桔药材指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
[0007] 精密称取东风桔药材粉末，精密加入甲醇，回流提取或超声提取45_60min，过滤， 即得供试品溶液；
[0008] 精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由18个共有特征峰 构成的东风桔药材指纹图谱。
[0009] 在其中一个实施例中，所述高效液相色谱仪的条件为：
[0010] 色谱柱为C18色谱柱；流速为0. 8-1. 2mL · mirT1;检测波长252-256nm ;柱温 25-35°C ;流动相：以乙腈为流动相A，0. 5%冰乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。
[0011] 在其中一个实施例中，所述流速为1.0 mL · mirT1，检测波长为254nm，柱温为35°C。
[0012] 在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：0-30min，流动相A的体积百分数由 20%变化至50% ;30-70min，流动相A的体积百分数由50%变化至100%。
[0013] 在其中一个实施例中，所述甲醇的用量为每克东风桔药材粉末精密加入19-21毫 升。
[0014] 本发明还提供一种东风桔药材指纹图谱的检测方法，包括如下步骤：
[0015] 精密称取东风桔药材粉末，精密加入甲醇，回流提取或超声提取45-60min，过滤， 即得供试品溶液；
[0016] 精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定。
[0017] 在其中一个实施例中，所述高效液相色谱仪的条件为：
[0018] 色谱柱为C18色谱柱；流速为0. 8-1. 2mL · mirT1;检测波长252-256nm ;柱温 25-35°C ;流动相：以乙腈为流动相A，0. 5%冰乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。
[0019] 在其中一个实施例中，所述流速为1.0 mL · mirT1，检测波长为254nm，柱温为35°C。
[0020] 在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：0_30min，流动相A的体积百分数由 20%变化至50% ;30-70min，流动相A的体积百分数由50%变化至100%。
[0021] 在其中一个实施例中，所述甲醇的用量为每克东风桔药材粉末精密加入19-21毫 升。
[0022] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0023] 本发明经发明人的大量实验和研宄，确定了制备供试品溶液的方法、高效液相色 谱仪的色谱条件的最优参数，由此构建出东风桔药材的指纹图谱，该指纹图谱中有18个特 征共有峰，可较为全面的表征东风桔药材的物理化学特征。
[0024] 采用本发明方法构建的东风桔药材指纹图谱以及检测方法，可以准确直观地鉴定 东风桔药材，同时具有操作简便、结果稳定、精密度高、重现性好等优点。
【附图说明】
[0025] 图1为溶剂峰考察HPLC图；
[0026] 图2为不同流动相条件下HPLC图；
[0027] 图3为流动相不同起始梯度条件下HPLC图；
[0028] 图4为最佳流动相起始梯度条件下HPLC图；
[0029] 图5为不同流速条件下HPLC图；
[0030] 图6为不同柱温条件下HPLC图；
[0031] 图7为四个检测波长条件下HPLC图；
[0032] 图8为四种色谱柱考察HPLC图；
[0033] 图9为六种提取溶剂考察HPLC图；
[0034] 图10为不同提取体积考察HPLC图；
[0035] 图11为不同提取方法考察HPLC图；
[0036] 图12为不同提取时间考察HPLC图；
[0037] 图13为东风桔药材样品1-12的指纹图谱；
[0038] 图14为东风桔药材样品1-12生成的对照指纹图谱；
[0039] 图15为待测药材的指纹图谱。
【具体实施方式】
[0040] 以下结合具体实施例对本发明的东风桔药材指纹图谱的构建方法和检测方法作 进一步详细的说明。
[0041] 实施例1
[0042] 本实施例为东风桔药材指纹图谱的构建方法。
[0043] -、仪器和材料
[0044] 1、仪器
[0045] KQ-100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；T-214型电子分析天平 (Denver公司）；Waters e2695高效液相色谱系统，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进 样器、紫外检测器（Waters公司）。
[0046] 2、试剂
[0047] 冰乙酸（色谱纯，天津市化学试剂研宄所）；甲醇、乙腈（色谱纯，Honeywell公 司）；水为超纯水。
[0048] 3、材料
[0049] 东风桔药材（广州白云山星群（药业）股份有限公司提供，共12批，批号或产地分 别为 20110501、20111201、XG130701、XG111102、XG110501、XG140401、XG111002、20110401、 XG110401、20140501、广东、广西）。
[0050] 二、方法学考察
[0051] 1、溶剂峰的考察
[0052] 取东风桔药材粉末（过60目筛）约0.5g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密 加入甲醇l〇ml，密塞，称重，回流加热处理45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重 量，摇匀，0. 22 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，HPLC分析东风桔药材样品和甲醇溶剂空白，得 图1。
[0053] 由图1可知，通过比较甲醇和东风桔药材图谱，可以发现，溶剂对主要的色谱峰无 太大影响，前5min的峰为溶剂峰，不选作主要色谱峰。
[0054] 2、流动相组成的选择
[0055] 取约〇· 5g东风桔药材粉末（过60目筛）样品1份，精密称定，置100mL具塞锥形 瓶中，精密加入甲醇l〇ml，密塞，称重，回流加热处理45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补 足减失的重量，摇匀，0. 22 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液HPLC分析，流动相组成及梯度见表 1，得图2。
[0056] 表1四种流动相组成信息
【主权项】
1. 一种东风桔药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤： 精密称取东风桔药材粉末，精密加入甲醇，回流提取或超声提取45-60min，过滤，即得 供试品溶液； 精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由18个共有特征峰构成 的东风桔药材指纹图谱。
2. 根据权利要求1所述的东风桔药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液 相色谱仪的条件为： 色谱柱为C18色谱柱；流速为0. 8-1. 2mL?miiT1;检测波长252-256nm;柱温25-35°C; 流动相：以乙腈为流动相A，0. 5%冰乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。
3. 根据权利要求2所述的东风桔药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述流速为 I.OmL?mirf1，检测波长为254nm，柱温为35°C。
4. 根据权利要求2所述的东风桔药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗 脱方式为：0-30min，流动相A的体积百分数由20%变化至50% ;30-70min，流动相A的体积 百分数由50 %变化至100%。
5. 根据权利要求1所述的东风桔药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述甲醇的 用量为每克东风桔药材粉末精密加入19-21毫升。
6. -种东风桔药材指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括如下步骤： 精密称取东风桔药材粉末，精密加入甲醇，回流提取或超声提取45-60min，过滤，即得 供试品溶液； 精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定。
7. 根据权利要求6所述的东风桔药材指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述高效液 相色谱仪的条件为： 色谱柱为C18色谱柱；流速为0. 8-1. 2mL?miiT1;检测波长252-256nm;柱温25-35°C; 流动相：以乙腈为流动相A，0. 5%冰乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。
8. 根据权利要求7所述的东风桔药材指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述流速为 I.OmL?mirf1，检测波长为254nm，柱温为35°C。
9. 根据权利要求7所述的东风桔药材指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述梯度洗 脱方式为：0-30min，流动相A的体积百分数由20%变化至50% ;30-70min，流动相A的体积 百分数由50 %变化至100%。
10. 根据权利要求6所述的东风桔药材指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述甲醇的 用量为每克东风桔药材粉末精密加入19-21毫升。
【专利摘要】本发明涉及一种东风桔药材指纹图谱的构建方法及检测方法。所述构建方法包括如下步骤：精密称取东风桔药材粉末，精密加入甲醇，回流提取或超声提取45-60min，过滤，即得供试品溶液；精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由18个共有特征峰构成的东风桔药材指纹图谱。该指纹图谱中有18个特征共有峰，可较为全面的表征东风桔药材的物理化学特征，以此可以准确直观地鉴定东风桔药材，同时具有操作简便、结果稳定、精密度高、重现性好等优点。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104777254
【申请号】CN201510188251
【发明人】方铁铮, 姚江雄, 许招懂, 蒋莉娟
【申请人】广州白云山星群(药业)股份有限公司
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年4月20日