一种冠心丹参胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种冠心丹参胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，属于中药分析领域。
【背景技术】
[0002]冠心丹参胶囊由丹参、三七、降香油组成，具有活血化瘀、理气止痛等功效，临床主要用于治疗气滞血瘀所致的胸痹心痛。冠心丹参胶囊用于气滞血瘀型冠心病所致的胸闷、胸痛、心悸气短。对垂体后叶素引起的大鼠心电图缺血性改变有一定的作用，可降低血清磷酸肌酸和乳酸脱氢酶，减少心肌组织中丙二醛的生成，保护心肌组织超氧化物歧化酶的活性，增强注射异丙肾上腺素小鼠耐缺氧的能力。中国药典(2010年版)以丹参酮II A为检测指标，对该药进行定量控制。然而，丹参中水溶性物质对心脑血管疾病也具有良好的效果，如丹参素能明显扩张冠状动脉使其血流量显著增加；原儿茶醛具有扩张动脉、降低心肌耗氧量、抑制血小板聚集等作用，酚酸成分具有很强的抗脂质过氧化和清除自由基等作用。因此，丹参水溶性物质含量的高低也将影响冠心丹参胶囊的疗效，以上多种成分同时定量控制能更好地表征冠心丹参胶囊的质量。
[0003]近年来，关于冠心丹参制剂质量控制方法的报道较多，主要有薄层色谱鉴别、分光光度法、液相色谱-紫外分光光度法(HPLC-UV)和气相色谱-质谱联用(GC-MS)法等。魏惠珍等在《HPLC同时测定冠心丹参胶囊中丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和丹参酮A的含量》一文中建立了一种同时测定丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、丹参酮II A4种指标成分的含量测定方法，可用于冠心丹参胶囊的质量控制和治疗药物监测。黄喜茹等在《冠心丹参制剂的质量控制方法研宄》中建立反相高效液相色谱法同时测定冠心丹参制剂中3种丹参脂溶性成分隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA的含量。刘亚东等在《HPLC法测定冠心丹参胶囊中隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮II A含量》建立了高效液相色谱法同时测定冠心丹参胶囊中隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮II A含量的方法，方法简便快捷、准确、重现性好，可用于该制剂的质量控制。虽然目前对其质量标准与药理临床研宄较多，但其广泛而显著的药理作用的物质基础还有待进一步深入研宄，其质量控制方法也需要更精细更全面的更全面的控制方法研宄。
[0004]中药指纹图谱是指通过现代的分析检测方法对中药复杂的物质体系进行分析，并尽可能全面地获得中药中多个化学成分的化学特征图谱，并通过特征峰的有无及各峰之间的强度比来对中药中化学成分进行定性和定量分析，用于中药的质量控制和新药研发的物质基础的信息表征手段和方法；中药指纹图谱是建立在对中药中化学成分进行系统全面研宄的基础上的一种多方面的，可量化的鉴定手段，具有宏观、整体评价和模糊分析等特点，特别适合于中药复杂体系的整体研宄。中药指纹图谱是目前已经成为一种能被国内外学者广泛接受的质量控制模式，日本、美国FDA、世界卫生组织等都允许使用指纹图谱作为单味药材提取物的质量评价方法，而在国内中药的指纹图谱也成为中药质量评价的研宄热点。HPLC指纹图谱具有分离效果好、检测灵敏度高、分析速度快、结果重现性好等优点，是中药指纹图谱研宄应用较多的方法之一。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是针对现有冠心丹参胶囊质量控制方法的不足，提供一种HPLC指纹图谱的建立方法及用该方法所得的HPLC标准指纹图谱。其特点是将冠心丹参胶囊制备成供试品溶液，经过HPLC分离检测，获得冠心丹参胶囊HPLC标准指纹图谱。本研宄采用高效液相色谱法对冠心丹参胶囊指纹图谱进行了研宄，并应用“中药指纹图谱相似度评价软件”对不同批号的冠心丹参胶囊指纹图谱相似度进行评价，结果显示，采用本发明方法所建立的冠心丹参胶囊指纹图谱具有分离效果好，检测灵敏度高，结果重现性好的优点，可为冠心丹参胶囊的真伪鉴别和内在质量控制提供可靠依据。
[0006]一种冠心丹参胶囊指纹图谱的建立方法，其特征是采用HPLC-UV法，包括如下步骤:
[0007](I)供试品溶液的制备:精密称取冠心丹参胶囊内容物I?20g，加70%甲醇25?500ml，超声20?40min溶解后，冷却后取少量上清液过0.45 μ m微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液；
[0008](2)对照品溶液的制备:精密称取丹参素钠、迷迭香酸、丹酚酸B、原儿茶醛、二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮1、丹参酮IIA适量，分别用50%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇、甲醇、甲醇、甲醇、甲醇溶解成浓度分别为200 μ g/ml的溶液，再吸取对照品溶液各适量，用甲醇稀释成浓度分别为50 μ g/ml的对照品溶液；
[0009](3)色谱条件:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，250X4.6mm ;流动相为0.1%磷酸水溶液_乙腈；采用梯度洗脱方式Omin — 40min — 42min — 60min — 65min — 95min，甲醇 10% — 40% — 60% — 70% — 95%— 95%;流速 0.8ml/min ;柱温 25 ?35°C;检测波长:270nm ;进样量为10?20 μ I ;
[0010](4)供试品溶液的测定:精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，以高效液相色谱法测定，得到冠心丹参胶囊的HPLC-UV图谱；
[0011](5)HPLC标准指纹图谱的制作按照上述方法对10批供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，以高效液相色谱法测定，记录色谱图，得到10批冠心丹参胶囊的图谱；并进行分析比较，得到由测定所得的指纹图谱中有11个共有峰，这些共有特征峰构成了冠心丹参胶囊的指纹特征，图谱经《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件计算，相似度大于
0.9 ;是冠心丹参胶囊标准指纹图谱，所述的冠心丹参胶囊标准指纹图谱如附图1所示。
[0012]其中，以5号峰即丹酚酸B为参照物峰，各峰的相对保留时间为:峰I丹参素钠:相对保留时间0.206 ;峰2原儿茶醛:相对保留时间0.370 ;峰3迷迭香酸:相对保留时间
0.894 ;峰4:相对保留时间0.924 ;峰5丹酚酸B:相对保留时间1.000 ;峰6:相对保留时间
1.070 ;峰7:相对保留时间1.716 ;峰8 二氢丹参酮:相对保留时间1.892 ;峰9隐丹参酮:相对保留时间2.101 ;峰10丹参酮1:相对保留时间2.148 ;峰11丹参酮IIA:相对保留时间 2.422。
[0013]优选地，所述的冠心丹参胶囊标准指纹图谱中，以5号峰即丹酚酸B为参照物峰，各峰的相对保留时间和相对峰面积分别为:
[0014]峰I丹参素钠:相对保留时间0.206，相对峰面积0.104 ；
[0015]峰2原儿茶醛:相对保留时间0.370，相对峰面积0.097 ；
[0016]峰3迷迭香酸:相对保留时间0.894，相对峰面积0.090 ；
[0017]峰4:相对保留时间0.924，相对峰面积0.080 ；
[0018]峰5丹酚酸B:相对保留时间1.000，相对峰面积1.000 ；
[0019]峰6:相对保留时间1.070，相对峰面积0.179 ；
[0020]峰7:相对保留时间1.716，相对峰面积0.017 ；
[0021]峰8 二氢丹参酮:相对保留时间1.892，相对峰面积0.047 ；
[0022]峰9隐丹参酮:相对保留时间2.101，相对峰面积0.239 ；
[0023]峰10丹参酮1:相对保留时间2.148，相对峰面积0.145 ；
[0024]峰11丹参酮IIA:相对保留时间2.422，相对峰面积0.602 ；
[0025]实验例I HPLC-UV紫外检测波长的选择
[0026]冠心丹参胶囊的组方有三七、丹参、降香三味药材，各药味的化学成分复杂，各成分的色谱行为及仪器的响应值也是迥乎不同，因此应在整体全面的原则下对测定波长进行选择。取供试品溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，采用二极管阵列检测器筛选波长，对样品进行190-400nm全波长扫描，结果见图2样品三维紫外吸收图和图3样品的等高线图。由样品的三维紫外吸收图和等高线图可见，样品中主要成分在200nm?360nm的紫外吸收较强，分别比较了 190nm、203nm、254nm、270nm、330nm、360nm的样品紫外吸收光谱图，结果270nm为检测波长检出的样品信息量较多，其分离度、峰形和柱效及出峰的稳定性较为满意，故选择270nm为检测波长。
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