高效液相色谱法检测替格瑞洛中手性异构体含量的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种高效液相色谱法分离检测替格瑞洛 原料药中手性异构体的方法。
【背景技术】
[0002] 替格瑞洛（ticagrelor)是由英国阿斯利康制药公司（AstraZeneca)研制开发的 一种具有选择性治疗急性冠状动脉综合征（acute coronary syndrome，ACS)的新型小分子 抗凝血药物，是首个口服的可逆性二磷酸腺苷（ADP)受体拮抗剂，可以选择性抑制二磷酸 腺苷的关键靶受体P2Y 12。替格瑞洛含有6个手性中心，共有64个手性异构体，根据美国食 品药品监督管理局（FDA)对具有手性中心药物的技术要求，需要对药物的手性异构体进行 控制，但是目前未见关于替格瑞洛异构体分析方法的报道。
【发明内容】
[0003] 为保证临床用药的安全性，本发明人开发了一种高效液相色谱法分离检测替格瑞 洛原料药中手性异构体的方法，对替格瑞洛原料药中的异构体进行分析，从而保证药物的 安全性、质量可控性。
[0004] 本发明的目的是提供一种高效液相色谱法分离和检测替格瑞洛原料药中手性异 构体的方法，本发明建立的方法准确、重现性好，实现了对替格瑞洛手性异构体杂质的有效 监控。
[0005] 本发明是通过以下技术方案实现的：
[0006] 本发明提供了一种替格瑞洛原料药及其手性异构体的高效液相色谱法的分离检 测方法，其包括以下步骤：
[0007] 1)取含有手性异构体的替格瑞洛原料药适量，用乙醇制成每1ml约含2. Omg的样 品溶液；
[0008] 2)取步骤1)中替格瑞洛样品溶液适量，用乙醇制成每1ml约含4. 0 μ g的对照溶 液；
[0009] 3)取1)、2)的溶液10 μ 1，注入高效液相色谱仪，完成替格瑞洛异构体的测定；
[0010] 其中，所述高效液相色谱条件如下：
[0011] 以多糖衍生物涂敷型手性色谱柱为填料的色谱柱，优选地所述色谱柱为AD-H色 谱柱，250mmX4. 6mmX5ym;色谱柱柱温38~42°C ;
[0012] 以正己烷、乙醇、三氟乙酸的混合溶剂作为流动相，优选地流动相中的正己烷、乙 醇、三氟乙酸的体积比例为82~84:16~18:0. 6~0. 8 ;流动相流速为0. 9~I. lml/min ;
[0013] 采用紫外检测器，检测波长设置为250~260nm ;
[0014] 这里，所述手性异构体为以下七种结构所示的物质：
[0015]
[0017] 本发明提供的上述替格瑞洛原料药及其手性异构体的高效液相色谱法的分离检 测方法，试验结果表明，手性异构体杂质Y3、Y4、Y3'、Y2、Y4'、Yl、Y2'相对于替格瑞洛的校 正因子分别为1. 1、1.0、1.0、1.0、l.〇、〇. 9,校正因子均在0.9~I. 1范围之内，可以采用不 加校正因子主成分自身对照法进行计算。
[0018] 在本发明的实施方案中，本发明提供的替格瑞洛原料药及其手性异构体的高效液 相色谱法的分离检测方法，其中，所述流动相中的正己烷、乙醇、三氟乙酸的体积比例更优 选地为 83 : 17 :0. 7。
[0019] 在本发明的实施方案中，本发明提供的替格瑞洛原料药及其手性异构体的高效液 相色谱法的分离检测方法，其中，所述流动相流速更优选地为lml/min。
[0020] 在本发明的实施方案中，本发明提供的替格瑞洛原料药及其手性异构体的高效液 相色谱法的分离检测方法，其中，所述检测波长为255nm。
[0021] 在本发明的实施方案中，本发明提供的替格瑞洛原料药及其手性异构体的高效液 相色谱法的分离检测方法，其中，所述色谱柱柱温为38°C、40°C、或42°C。
[0022] 根据现有技术中替格瑞洛的合成路线以及化合物的结构特点进行分析，替格瑞洛 需要控制7个异构体杂质，本发明采用手性柱高效液相色谱分离测定其手性异构体，采用 不加校正因子的主成分自身对照法对杂质进行定量；该方法操作简便易行，试验结果证明 选用的色谱条件能较好地分离主成分及其手性异构体，更好地监控替格瑞洛原料药的质 量，同时也为制剂的质量研究提供参考。
【附图说明】
[0023] 图1为本发明实施例3替格瑞洛分离度溶液的高效液相色谱图。
[0024] 图2为本发明比较例1替格瑞洛分离度溶液的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0025] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合【具体实施方式】，对本 发明进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。
[0026] 实施例1
[0027] 仪器与色谱条件
[0028] Agilent 1260高效液相色谱仪；色谱柱为AD-H色谱柱，250mmX 4. 6mmX 5 μ m，色 谱柱柱温40°C ;以正己烷、乙醇、三氟乙酸的混合溶剂作为流动相，流动相中的正己烷、乙 醇、三氟乙酸的体积比例为83:17:0. 7,流动相流速为1.0 ml/min ;采用紫外检测器，检测波 长设置为255nm〇
[0029] 实验步骤
[0030] 取替格瑞洛对照品、手性异构体杂质Y3、Y4、Y3'、Y2、Y4'、Yl、Y2'适量，用乙醇溶 解并稀释制成每1ml中约含各杂质和替格瑞洛分别为200 μ g的混合溶液，作为线性试验贮 备液。精密量取线性试验贮备液0. 4ml、1.0 ml、I. 6ml、2. Oml、2. 4ml、3. Oml、4. Oml分别置 IOml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，作为线性试验系列溶液。精密量取线性试验系列 溶液各10 μ 1，分别注入高效液相色谱仪，按所述的色谱条件测定，记录色谱图。以样品浓 度（μg/ml)为横坐标、峰面积为纵坐标计算替格瑞洛及各已知杂质的回归方程。结果见下 表：
[0031]
[0032] 试验结果表明，杂质Y3、Y4、Y3'、Y2、Y4'、Y1、Y2'相对于替格瑞洛的校正因子分别 为1. 1、1.0、1.0、1.0、1.0、0. 9,校正因子均在0.9~I. 1范围之内，可以采用不加校正因子 主成分自身对照法进行计算。
[0033] 实施例2
[0034] 仪器与色谱条件同实施例1
[0035] 实验步骤
[0036] 准确度试验贮备液的配制：取实施例1中线性试验贮备溶液5. 0ml，置同一 50ml 量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0037] 准确度试验溶液的配制见下表：
[0039] 按上表准确移取Iml准确度贮备溶液分别置IOml量瓶中，在相应量瓶中各加入约 20mg供试品，加乙醇适量超声使溶解，冷却至室温，用乙醇稀释至刻度，摇勾，即得准确度试 验溶液。每个浓度水平平行配制3份准确度试验溶液。
[0040] 精密量取上述准确度试验供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图。采 用回收率试验评价建立的杂质检测方法的准确度，结果如下：
[0041] 杂质￥3准确度试验结果