专利名称：一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法
技术领域：
本发明涉及一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法。
技术背景手性药物对映异构体的检査常用的方法有手性高效液相色谱法，通过在流 动相中加入手性选择剂或采用手性色谱柱进行分离检査，前者往往分离效果不 好，专属性不强,后者色谱柱较贵,成本较高,且色谱柱在使用过程中柱效极易下降 造成分离效果不好，加之雷替曲塞及其异构体本身结构中既含有羧基又含有氨基,在液相色谱分析过程中分子内容易绞合,给分离增加了难度;气相色谱法用于手性药物对映异构体的检查要求样品具有一定的挥发性及热稳定性，应用很有局限性。发明内容为为解决上述问题，本发明提供了一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异 构体的方法，主要是分离并检测雷替曲塞的单一对映异构体。本发明是这样实现的，它主要包括样品的制备，毛细管电泳条件及分析方法；它通过毛细管电泳将雷替曲塞及其对映异构体分离，按主成份自身对照法 计算雷替曲塞中其对映异构体的限度；用甲醇水=1: 1 (体积比)溶液配制 备供试品溶液，毛细管电泳的电泳缓冲液为Tris-H3P04，该缓冲液pH值为6.0 10，在该缓冲液中加入手性选择剂和十二烷基硫酸钠。缓冲液Tris-H3P04的配制是以0.05-0.1M的三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液， 用浓度为0.1M的磷酸调节pH值，缓冲液的pH值优选为8。手性选择剂为a-环糊精、p-环糊精、磺化(3-环糊精、羟丙基-P-环糊精、l环糊精或者羧甲基-卩-环糊精。手性选择剂在缓冲液中的浓度范围为2 20mM,手性选择剂优选为羧 甲基-P-环糊精，其浓度为8mM。电泳条件参数为毛细管长度总长48.5cm ， 有效长度40cm，毛细管内径为501im，运行电压为15 30kV，毛细管温度为20~30 °C，流体力学进样50mbar 5秒。优选运行电压20kv,毛细管的温度25°C。电极 由'+，到，，检测波长为228nm;在缓冲溶液中加入十二烷基基硫酸钠的 浓度为0.01 0.1M，优选浓度是30mM。用甲醇水=1: 1 (体积比)溶液配制 雷替曲塞手性物分析样品，供试品浓度在50 200^ig/ml之间,对映异构体的浓度 1pg/ml 10(^g/ml。雷替曲塞对映异体的计算方法是配制雷替曲塞供试品溶液 及含1%雷替曲塞对映异构体对照品的雷替曲塞的对照品溶液，分别进样，雷 替曲塞供试品溶液中对映构体的相应的峰面积不得大于对照溶液中对映异构体 的峰面积。为了保证检测结果的重现性，毛细管第一次使用时，要对其进行冲洗活化， 冲洗的程序是先用O.lmol/的NaOH冲洗15分钟，然后用高纯水冲洗10分钟， 缓冲液冲洗5分钟。此后每次运行前用运行缓冲液冲洗3分钟。毛细管电泳法用于手性药物异构体的检査有高效、快速、操作简便、环境 友好、样品用量少，成本低，雷替曲塞及其对映异构体能够基线分离等优点， 其较高的分离效率使分离选择系数较小的对映异构体可以得到满意的分离效 果。用于毛细管电泳手性拆分的选择剂的种类较多，其中以环糊精应用得最广， 而且容易得到，在手性拆分中具有广阔的应用前景。
具体实施方式
实施例1实验在美国Agilent Technologies公司Agilent 3D CE型毛细管电泳仪上行，流体力学进样，毛细管有效长度40cm，内径50 u m的熔融石英毛细管柱。 样品的配制过程如下配制75mmol/L的三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液，用浓度为0.1M的磷酸 调节pH至8.0作为缓冲液，加入8mmol/L羧甲基-e-环糊精(CM-P-CD)和 30mmol/L的十二^m,。用甲醇水=1: 1 (^f只比)溶液分别配制雷替曲 塞(s-raltitrexed)溶液及雷替曲塞和其对映异构体(r-and s- mltitrexed)混合 溶液，雷替曲塞浓度为50ug/ml。进样前依次用缓冲溶液冲洗3min。实验温度 25°C，检测波长228nm，流体力学进样50mbar5秒；结果见
图1。 实施例2电泳条件同实施例l。用甲醇水=1: 1 (体积比)溶液配制，分别配制系 列雷替曲塞(s-raltitrexed)及雷替曲塞对映异构体(r-raltitrexed)溶液，进样， 记录响应值为基线噪音3倍的电泳图，即为雷替曲塞及其对映异构体的检测限， 其检测限为1 P m/ml。结果见图2 实施例3用50mmol/L 200mol/L的Tris-磷酸溶液为缓冲液，用浓度为0.1M的磷酸调 节pH至8.0，加入8mmol/L羧甲基-P -环糊精(CM- P -CD)和30mmol/L的十二 烷基硫酸钠；其他同实施例l，结果见图3。1、 一种用于手性药物雷替曲塞对映异构体的检查方法。2、 其方法为高效毛细管电泳法本发明用于检査雷替曲塞的单一对映异构体，方法简单，分离效率高，分 离速度快，进样量少，分析成本低。 一般只需一些常用的试剂，所有试剂用量 均较少，与高效液相方法比分析成本低很多。其有益的效果主要表现在(1) 样品用量少每次进样所需样品只有几IlL;(2) 环境友好所用的缓冲液均为水溶液，无需使用有机溶剂，比HPLC 方法更环保；(3) 分析成本低所需的毛细管柱及试剂相对于HPLC手性柱成本低很多。图1为实施例一的检测结果2为实施例二的检测结果图 图3为实施例三的检测结果图1、 一种用于手性药物雷替曲塞对映异构体的检查方法。2、 其方法为高效毛细管电泳法本发明用于检查雷替曲塞的单一对映异构体，方法简单，分离效率高，分 离速度快，进样量少，分析成本低。 一般只需一些常用的试剂，所有试剂用量均较少，与高效液相方法比分析成本低很多。其有益的效果主要表现在(1) 样品用量少每次进样所需样品只有几nL;(2) 环境友好所用的缓冲液均为水溶液，无需使用有机溶剂，比HPLC 方法更环保；(3) 分析成本低所需的毛细管柱及试剂相对于HPLC手性柱成本低很多。
权利要求
1. 一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法，主要包括样品的制备，毛细管电泳条件及分析方法；它通过毛细管电泳将雷替曲塞及其对映异构体分离，按主成份自身对照法计算雷替曲塞中其对映异构体的限度；用甲醇∶水＝1∶1(体积比)溶液配制备供试品溶液，毛细管电泳的电泳缓冲液为Tris-H3PO4，该缓冲液pH值为6.0～10，在该缓冲液中加入手性选择剂和十二烷基硫酸钠。
2、 根据权利要求1所述的一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法， 其特征是缓冲液Tris-H3P04的配制是以0.05~0.1M的三羟甲基氨基甲烷(Tris) 溶液，用浓度为0.1M的磷酸调节pH值。
3、 根据权利要求1所述的一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法， 其特征是手性选择剂在缓冲液中的浓度范围为2~20mM，其中手性选择剂为a -环糊精、P-环糊精、磺化(3-环糊精、羟丙基-P-环糊精、Y-环糊精或者羧甲基-卩-环糊精。
4、 根据权利要求1所述的一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法， 其特征是电泳条件参数为毛细管长度总长48.5cm ，有效长度40cm，毛细 管内径为50pm，运行电压为15 30kV,毛细管温度为20~30°C，流体力学进样 50mbar5秒，电极由'+ ，至U '_，，检测波长为228nm;在缓冲溶液中加入十 二烷基基硫酸钠的浓度为O.Ol-O.lM。
5、 根据权利要求1所述的一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法，其特征是用甲醇水=1: 1 (体积比)溶液配制雷替曲塞手性物分析样品，供试品浓度在50 200吗/ml之间，对映异构体的浓度lpg/ml 100^ig/ml。
6、根据权利要求1所述的一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法， 其特征是所述运行电压20kV;毛细管的温度25'C，十二烷基硫酸钠的浓度是 30mM.，缓冲液的pH值是8，手性选择剂为羧甲基-P-环糊精，其浓度为8mM。 7、根据权利要求所述的一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法，其 特征是雷替曲塞对映异体的计算方法是配制雷替曲塞供试品溶液及含1%雷 替曲塞对映异构体对照品的雷替曲塞的对照品溶液，分别进样，雷替曲塞供试 品溶液中对映构体的相应的峰面积不得大于对照溶液中对映异构体的峰面积。
全文摘要
本发明涉及一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法。它通过毛细管电泳将雷替曲塞及其对映异构体分离，按主成份自身对照法计算雷替曲塞中其对映异构体的限度；用甲醇∶水＝1∶1(体积比)溶液配制备供试品溶液，毛细管电泳的电泳缓冲液为Tris-H<sub>3</sub>PO<sub>4</sub>，该缓冲液pH值为6.0～10，在该缓冲液中加入手性选择剂和十二烷基硫酸钠。它克服了由于雷替曲塞分子结构中即含有羧基又含有氨基，用手性流动相及手性柱分离对映异构体困难且成本较高的缺点，本法分离效果好，无污染，成本低，适合雷替曲塞对映异构体的检查。
文档编号G01N27/447GK101221147SQ20071013197
公开日2008年7月16日 申请日期2007年9月25日 优先权日2007年9月25日
发明者付晓芳, 一 刘, 刘虎威, 孙海胜, 朱玲玲, 钟加胜, 陆小平, 娟 陈, 超 马 申请人:扬子江药业集团有限公司