专利名称：对映异构体纯(-)2-[1-(7-甲基-2-(吗啉-4-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-9-基 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及对映异构体纯(_) 2- [1- (7-甲基-2-(吗啉-4-基)-4-氧代_4H_吡啶 并[l，2_a]嘧啶-9-基)乙氨基]苯甲酸或其药学上可接受的盐、其制备方法、其在医学疗 法中的用途、包含其的药物组合物、其在制备用于预防或治疗疾病的方法的药物中的用途 及其在用于预防或治疗疾病的方法中的用途，所述对映异构体纯(-)2-[1-(7_甲基_2-(吗 啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸为固态。本发明例 如涉及新的抗血栓形成疗法以及用于该新疗法的对映异构体纯(-)2-[1-(7_甲基-2-(吗 啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸。更具体地讲，本 发明涉及磷酸肌醇(PI)3-激酶β的选择性抑制剂及该选择性抑制剂(即(-)2-[1-(7_甲 基_2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4Η-吡啶并[l，2-a]嘧啶-9-基)乙氨基]苯甲酸)在抗 血栓疗法中的用途。
背景技术：
血小板是在止血过程中起重要作用的特种粘附细胞。在正常条件下，血小板既不 粘附血管内皮，也不能被血管内皮激活。然而，内皮损伤或斑破裂使得流动的血液暴露于多 种血栓形成元素。循环的血小板携有这些血栓形成元素的受体。一旦血管受伤，血小板马上 在破裂斑位点经由糖蛋白GPIba受体粘附到已结合胶原蛋白的血管性血友病因子(vWF) (血小板粘附)，成为活化的血小板(血小板激活)，并释放多种预先形成的或在血小板激活 时产生的物质，所述物质包括二磷酸腺苷(ADP)、血清素和血栓烷A2(TxA2)等，它们都起血 小板激动剂的作用，因此促进最初较弱的粘附诱导的血小板激活。另外，在受伤位点由聚集 级联刺激产生凝血酶，其亦为有效的血小板激动剂。所有这些血小板激动剂的主要功能响 应之一是在血小板表面上的整联蛋白aIIbi33(GP Ilb/IIIa)转化为其活性构象。当处于其 活性构象状态时，这些整联蛋白将起纤维蛋白原受体桥的作用，所述纤维蛋白原受体桥将 血小板连接在一起(血小板聚集)并随后形成血栓。因此，老化的动脉粥样硬化斑突然破裂或裂开引起血小板粘附/凝集响应过度增 加，这通常导致形成血管闭塞性血小板血栓。在冠状动脉循环或脑循环中这些血栓形成分 别导致急性心肌梗塞和中风，合并起来它们代表了工业化世界死亡的首位原因。血小板血 栓形成还导致多种其他临床状态，包括不稳定心绞痛、猝死、短暂性缺血性发作、一过性黑 矇和四肢及内脏器官急性缺血。促成增加破裂斑的血栓形成可能性的多种因素包括(1) 斑中粘附性底物的高反应性；(2)在损伤处存在组织因子；和(3)由因动脉硬化过程血管腔 变窄而引起的高剪切的间接血小板激活作用。现有抗血栓疗法主要靶向血栓形成过程的一个或多个关键步骤。也就是说。经常 将抗凝剂和抗血小板剂用于缓解血栓症。在多种情况下通过给予适当的抗凝剂或通过使用 抗血小板剂可使病理学的血栓形成减到最低程度或使其消除，所述抗凝剂包括香豆素衍生 物中的一种或多种(例如华法令和双香豆素)或带电聚合物(例如肝素、水蛭素或比伐卢定)，所述抗血小板剂例如有阿司匹林、氯吡格雷、噻氯匹定、双嘧达莫或若干GPIIb/IIIa 受体拮抗剂之一。然而，由于副作用，抗凝剂和血小板抑制剂受到显著限制，所述副作用例 如出血、再阻塞、“白色血栓”综合征、疼痛感、出生缺陷、血小板减少症和肝功能失常。此夕卜， 长期给予抗凝剂和血小板抑制剂可能特别地增加威胁生命的疾病或出血的风险。因此，为了避免前述现有抗血栓疗法的缺点，存在开发新的抗血栓疗法的需要，该 新疗法选择性靶向对病理学血栓形成至关重要而不妨碍正常止血的过程。流变干扰(高剪切和涡流)在促进病理学血栓症中起重要作用，因此，一种所述策 略是通过在血小板中靶向机械传感元件减轻高剪切力的血小板激活作用。在W02004016607 中鉴定了对剪切诱导的血小板激活重要但对止血不是这样的信号传导事件。此外，6 1^/1乂糖蛋白复合物中的6 让(！和整联蛋白αΙΛβ3这两种重要的血 小板粘附受体在流变干扰(高剪切和快速加速剪切)条件下具有与血小板激活有关的独特 的机械传感功能。在W02004016607中，阐述了通过两种受体的信号传导由快速加速剪切速
率(ΦΑ^来调节，其通过PI 3-激酶-依赖性信号传导过程诱导血小板激活。另外在W02004016607中，阐明了在高剪切条件下调节血小板激活的关键信号 传导机制，并将PI 3-激酶β鉴定为病理学血流条件下诱导血小板激活的元素。在 W02004016607之前，已有的抗血小板疗法是阻滞特定的血小板粘附受体，该疗法不区分病 理性的血小板激活和正常止血的血小板激活。因此，W02004016607的公开内容(选择性抑 制PI 3-激酶β能防止由剪切速率的病理性增加诱导的血小板激活而不影响生理性激动 剂诱导的血小板激活)提供了抗血栓疗法的新的特殊方法，所述方法包括用于所述疗法的 新化合物。另外，该发明还强调，既然剪切依赖性血小板粘附和激活在动脉血栓形成中很重 要，那么ΡΙ3-激酶β在通常的心血管疾病中是治疗介入的重要靶标。另外，W02004016607提供扰乱在高剪切条件下发生的血小板聚集和粘附的方法， 提供用于抑制剪切诱导的血小板激活的方法，其中这两种方法都包括给予选择性PI 3-激 酶β抑制剂。W02004016607还提供抗血栓形成方法，所述方法包括给予有效量的选择性 PI 3-激酶β抑制剂。根据该方法，通过靶向对剪切诱导的血小板激活重要的PI 3-激酶 β可获得对血栓症的特异性抑制而不影响正常的止血。因此，所述抗血栓方法不涉及因扰 乱正常止血而引起的副作用，所述副作用例如延长出血时间。此外，在W02004016607中，将“选择性PI 3_激酶β抑制剂”化合物理解为比通常 称为PI 3-激酶抑制剂(例如LY294002或渥曼青霉素(wortmarmin))的常规化合物对PI 3-激酶β的选择性更强。在W02004016607中优选选择性PI 3-激酶β抑制剂相对于其 他I类PI 3-激酶同工型，在生化测定中对抑制PI 3-激酶β的选择性为至少约> 10倍， 更优选> 20倍，更优选> 30倍。所述其他I型PI 3-激酶包括PI 3-激酶α、γ和δ。化合物2- [1- (7-甲基-2-(吗啉-4-基)_4_氧代_4Η_吡啶并[1，2_a]嘧 啶-9-基)乙氨基]苯甲酸是磷酸肌醇(PI) 3-激酶β的选择性抑制剂，在W02004016607 中与其他所述抑制剂一起被阐述。如在W02004016607中进一步所述，化合物2_[1_(7_甲 基-2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4Η-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸可用于治 疗，例如用于抗血栓疗法。化合物2- [ 1 - (7-甲基-2-(吗啉-4-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1， 2-a]嘧啶-9-基)乙氨基]苯甲酸具有不对称中心，即化合物以两种对映异构体存在。希 望获得具有改进的活性、药代动力学和/或代谢性质的化合物。本发明提供为2-[1-(7_甲
5基-2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸的单一 对映异构体的所述化合物。附图简述
图1显示2-[1-(7_甲基-2_(吗啉-4-基)_4_氧代-4H-吡啶并[l，2_a] 嘧啶-9-基)乙氨基]苯甲酸的(-)_对映异构体，即(-)2-[1-(7_甲基-2-(吗 啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸的X-射线粉末衍 射图。
发明内容
本发明提供了新的化合物，即对映异构体纯(-)2-[1-(7_甲基_2-(吗 啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸或其药学上可接受 的盐。表述“对映异构体纯”意即基本上不含其他对映异构体的(-)2-[1-(7_甲 基-2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸，所述 其他对映异构体即2-[1-(7_甲基_2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧 啶-9-基)乙氨基]苯甲酸的(+)_对映异构体。到目前为止，尚未获得包括本发明的 (-)2-[1-(7_甲基-2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶_9_基)乙氨基] 苯甲酸在内的2- [ 1- (7-甲基-2-(吗啉-4-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基) 乙氨基]苯甲酸的单一对映异构体。根据本发明一个方面，通过制备2-[1-(7_甲基-2-(吗 啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸的对映异构体的特定 方法，可能获得本发明纯对映异构体。表述“对映异构体纯”意指例如2-[1-(7_甲基-2-(吗 啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸的对映异构体之一 的对映异构体过量>95%。“对映异构体纯”对映异构体在pH 1-14时对于外消旋作用稳定。另外，通过所述方法，可获得具有高对映异构体纯度的本发明2-[1-(7_甲 基-2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸的纯对映 异构体，例如彡99. 8 %对映异构体过量，例如99. 9 %对映异构体过量的(-)2- [(1R) - (7-甲 基-2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸。此外，可分别提供具有高对映异构体纯度的(_)2-[(lR)-l-(7-甲基-2_(吗 啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸和 (+)2-[(lS)-l-(7-甲基-2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶_9_基)乙 氨基]苯甲酸或其药学上可接受的盐。2-[1-(7-甲基-2-(吗啉-4-基)-4-氧代_4H_吡啶并[l，2_a]嘧啶_9_基)乙 氨基]苯甲酸的对映异构体纯(-)_对映异构体具有有利性质，例如，其如表2所示为选择 性PI 3-激酶3抑制剂。另外，对映异构体纯(_)2-[(lR)-l-(7-甲基-2_(吗啉-4-基)_4_氧代-4H-吡 啶并[l，2_a]嘧啶-9-基)乙氨基]苯甲酸为中性形式。该中性形式可更加稳定，更易于 处理和储存，更易于纯化并更易于以可重复的方式合成。本发明进一步涉及对映异构体纯(-)2-[1-(7_甲基_2-(吗啉-4-基)_4_氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶-9-基)乙氨基]苯甲酸或其药学上可接受的盐，其为固态， 可为非晶形、至少部分结晶或基本上结晶。结晶形式可更加稳定，更易于处理和储存，更易 于纯化并更易于以可重复的方式合成。根据本发明另一方面，对映异构体纯(_)2-[(lR)-l-(7-甲基_2-(吗 啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸或其药学上可接受 的盐可以以固态存在，其可为至少部分结晶或基本上结晶。结晶形式可更加稳定，更易于处 理和储存，更易于纯化并更易于以可重复的方式合成。另外，根据本发明另一方面，可通过特定的方法获得2-[1-(7_甲基_2-(吗 啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸的纯对映异构体即 (-)_对映异构体，其呈基本上结晶形式的固态。2-[1-(7_甲基_2-(吗啉-4-基)_4_氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶_9_基)乙 氨基]苯甲酸的(-)-对映异构体的特征为具有含表1所给出的d-值和相对强度的X-射 线粉末衍射(XRPD)图。表 1(-)2-[(lR)-l-(7-甲基-2_(吗啉 ~4~ 基)_4_ 氧代 _4H_ 吡啶并[l，2_a]嘧 啶-9-基)乙氨基]苯甲酸
以Bragg-Bretano方式(geometry)获得这些X-射线粉末衍射(XRPD)图。绝对 强度不太精确，因此，用相对强度取代vs = 50-100、s = 20-50、m = 5—20、w = 1-5 禾口 vw < 1。按照标准方法进行X-射线衍射分析，所述标准方法可在例如以下文献中找 至lj :Kitaigorodsky, A. I. (1973)，Molecular Crystals andMolecules (分子晶体禾口 分 子),Academic Press, New York ；Bunn, C. ff. (1948), Chemical Crystallography(化 学晶体学)，Clarendon Press, London ；或 Klug，H. P. & Alexander，L. E. (1974)，X-Ray DiffractionProcedures(X-射线衍射方法)，John Wiley & Sons，New York。通过用刚玉作为内标校正X-射线粉末衍射图数据，并用可变光栅测量。本发明涉及在以下近似d-值处具有XRPD峰的纯对映异构体(_)2-[(lR)-l-(7-甲 基-2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸6.8、 5. 9 和3.91 A。此夕卜，本发明涉及在以下近似d_值处具有XRPD峰的纯对映异构体 (-)2-[(lR)-l-(7-甲基-2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶_9_基)乙 氨基]苯甲酸6. 8,6. 1,5. 9,4. 98,4. 41,4. 26 和3.91 A。另外，本发明涉及具有基本上如图1所示的XRPD-衍射图的(_) 2- [ (1R) -1- (7_甲 基-2-(吗啉-4-基)-4_氧代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶_9_基)乙氨基]苯甲酸。在另一方面，本发明涉及用于制备2-[1-(7_甲基_2-(吗啉-4-基)_4_氧 代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶-9-基)乙氨基]苯甲酸的纯对映异构体的方法，所述方法可 包括通过分级结晶分离或通过色谱法分离。实施例所述的用于制备2- [1- (7-甲基-2-(吗啉-4-基)_4_氧代_4H_吡啶并[1， 2-a]嘧啶-9-基)乙氨基]苯甲酸的纯对映异构体的特定方法，包括通过手性色谱法来分 离2-{[1-(7_甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶-9-基)乙基]氨 基}苯甲酸甲酯的两种对映异构体，接着水解对映异构体纯的甲酯并结晶。本发明目的亦为提供预防或治疗心血管疾病的方法，所述心血管疾病例如冠状动 脉闭塞病、中风、急性冠状动脉综合征、急性心肌梗塞、再狭窄、动脉粥样硬化病和/或不稳 定心绞痛，做法是将有效量的选择性PI 3-激酶3抑制剂给予有需要的患者。在该方法中， 使用选择性PI 3-激酶0抑制剂能够避免由扰乱正常止血引起的副作用，所述副作用通过 例如延长皮肤出血时间来测量。本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐可用于治疗，尤其是辅助治疗，具 体地将，其被指出作为以下药物使用血小板激活粘附/凝集和脱粒的抑制剂、血小板解集 促进剂、抗血栓剂；或可用于治疗或预防血栓性疾病。与血栓病或增加血栓病风险有关疾 病的实例为不稳定心绞痛、心肌梗塞、血栓性中风或栓塞性中风、短暂性脑缺血发作、外周 血管疾病、具有弥漫性血栓/血小板消耗性组成的病症(例如弥散性血管内凝血)、血栓性 血小板减少性紫癜、溶血_尿毒症综合征、血栓性脓毒血症并发症、成人呼吸窘迫综合征、 抗磷脂综合征、肝素_诱导的血小板减少症和子痫前期/子痫惊厥或静脉血栓症(例如深 度静脉血栓症)、肺栓塞、静脉阻塞性疾病、血液学病症(例如骨髓增殖性疾病，包括血小板 增多症、镰刀形红细胞病)、冠状动脉介入术(PCI)或其他血管中的介入、支架置入、动脉内 膜切除术、冠状动脉和其他血管移植手术、手术或机械损伤的血栓性并发症(例如在意外 或手术损伤后组织抢救)、包括皮肤和肌瓣在内的重建手术、血管损伤/炎症继发的血栓症 (例如脉管炎、动脉炎)、肾小球肾炎、炎症性肠病和器官移植排斥、诸如偏头疼、Raynaud现 象等病症、其中血小板可促进血管壁中潜在的炎性疾病过程的病症(例如动脉粥样斑形成 /进展)、狭窄/再狭窄和炎性病症(例如哮喘和慢性阻塞性肺病(C0PD))、在其过程中涉 及血小板和血小板源因子的免疫病、当血液与体内外来表面接触(例如在具有生物学或机 械心脏瓣膜的患者中、在置留永久性导管的患者中)时的病症或当血液与体外外来表面接 触(例如在血液透析、血浆取出法、心肺旁路和体外膜式氧合)时的病症、当在心肌梗塞、中 风、肺栓塞、深度静脉血栓和导管阻塞中使用溶栓以促进溶栓或防止溶栓后再阻塞时的病症。离体、机械或通过其他手段增加血小板激活和凝集的实例是例如用于保存血液产品，例 如血小板富集。本发明另外提供了本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐在制备用于治 疗上述疾病的药物中的用途。具体而言，本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐可 用于治疗上述疾病。本发明还提供治疗上述疾病的方法，所述方法包括给予罹患所述疾病 的患者治疗有效量的本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐。本发明另外涉及本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防 或治疗心血管疾病的方法的药物中的用途。本发明还涉及所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐在用于预防或治疗心血 管疾病的方法(例如抗血栓方法)中的用途。此外，本发明涉及抗血栓方法，所述方法涉及给予本文所述纯对映异构体或其药 学上可接受的盐。本发明还涉及用于在温血动物中预防或治疗心血管疾病的方法，所述方法包括给 予有效量的本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐。本发明还涵盖用于抑制患者磷酸肌醇3-激酶0的方法，所述方法包括给予患者 有效抑制患者磷酸肌醇3-激酶3的量的本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐。此外，本发明涉及本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防 或治疗呼吸道疾病的方法的药物中的用途。本发明还涉及所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐在用于预防或治疗呼吸 道疾病的方法中的用途。本发明还涵盖在温血动物中预防或治疗呼吸道疾病的方法，所述方法包括给予有 效量的本文所述纯对映异构体。另外，亦知道PI 3-激酶通过以下作用中的一种或多种促成肿瘤发生介导癌症 细胞和其他细胞增生；介导血管生成事件；和介导癌症细胞的运动、迁移及侵润。本发明的 纯对映异构体可具有有效抗肿瘤活性，认为该活性通过抑制I类PI 3-激酶(例如la类PI 3-激酶和/或lb类PI 3-激酶)和/或PI3激酶-相关蛋白激酶(例如DNA-PK、ATM或 mTOR)中的一种或多种来获得，所述激酶类参与修复双链DNA-破裂(DNA-PK和ATM)及信号 转导步骤，所述步骤导致肿瘤细胞增生和存活及转移的肿瘤细胞(mTOR)的侵润和迁移的 能力。因此，本文所述纯对映异构体可具有作为抗肿瘤药物的价值，尤其是作为哺乳动 物癌症细胞增生、存活、迁移、散播和侵润的选择性抑制剂导致抑制肿瘤生长和存活并抑制 转移性肿瘤生长。具体地，本发明纯对映异构体在控制和/或治疗实体瘤疾病中可具有抗 增生剂和抗侵润剂的价值。具体地，可期望本文所述纯对映异构体用于预防或治疗对抑制 多种PI 3-激酶(例如la类PI 3-激酶和lb类PI 3-激酶)中的一种或多种敏感的肿瘤， 所述激酶参与导致肿瘤细胞增生和存活及转移的肿瘤细胞迁移的能力和侵润的步骤。另 外，可期望本发明纯对映异构体用于预防或治疗仅仅通过或部分通过抑制PI 3-激酶(例 如la类PI 3-激酶和lb类PI 3-激酶)来介导的肿瘤，即可将本文所述纯对映异构体用 于在需要所述治疗的温血动物中产生PI 3-激酶抑制效果。另外，作为PI 3-激酶活性抑制剂的本文所述纯对映异构体可具有用于治疗以下疾病的治疗价值例如乳腺癌、结直肠癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌和细支气 管肺泡癌)和前列腺癌，以及胆管癌、骨癌、膀胱癌、头颈癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌症、食 道癌、卵巢癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、子宫颈癌和阴户癌和白血病(包 括急性淋巴性白血病(ALL)和慢性骨髓性白血病(CML))、多发性骨髓瘤和淋巴瘤。本发明另外提供本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐在制备用于治疗 本文所述所有疾病的药物中的用途。本发明还提供治疗本文所述所有疾病的方法，所述方法包括给予罹患所述疾病的 患者治疗有效量的本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐。另外，本发明涉及本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防 或治疗癌症的方法的药物中的用途。另外，本发明还涉及所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐在用于预防或治疗 癌症的方法中的用途。本发明还涵盖用于在温血动物中预防或治疗癌症的方法，所述方法包括给予有效 量的本文所述纯对映异构体。本发明还涉及本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防或 治疗与失调的白血细胞功能有关联的疾病的方法的药物中的用途。另外，本发明还涉及所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐用于预防或治疗与 失调的白血细胞功能有关联的疾病的方法中的用途。本发明还涵盖用于在温血动物中预防或治疗与失调的白血细胞功能有关联的疾 病的方法，所述方法包括给予有效量的本文所述纯对映异构体。因此，本发明再一目的是提供抑制PI 3-激酶0的方法，所述方法包括给予患者 一定量的本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐，其中所述量有效抑制患者的PI 3-激酶3。作为PI 3-激酶抑制剂的本文所述纯对映异构体在多种其他疾病状态中也具有 潜在的治疗用途。例如，PI 3-激酶在促进血管树平滑肌(即血管平滑肌细胞)增生中起 重要作用(Thyberg，1998，EuropeanJournal of Cell Biology 76(1) :33_42)，并在促进肺 平滑肌(气道平滑肌细胞)增生中起重要作用(Krymskaya, V. P.，BioDrugs, 2007. 21 (2) 85-95)。血管平滑肌细胞的过度增生在动脉粥样硬化斑形成和在侵润血管程序后的新生内 膜增生进程中起重要作用(Scwartz 等，1984，Progress inCardiovascular Disease 26: 355-372 ；Clowes 等，1978，Laboratorylnvestigations 39 :141_150)。此外，气道平滑肌细 胞的过度增生导致哮喘和慢性支气管炎发作中的C0PD的发展。因此，可将PI 3-激酶活性 抑制剂用于预防血管再狭窄、动脉粥样硬化病和C0PD。PI 3-激酶还在调节肿瘤细胞和在这些细胞经历细胞凋亡生长的倾向中起重要 作用(Sellers 等，1999，The Journal of Clinicallnvestigation 104:1655-1661)。另 外，由脂类磷酸酶PTEN产生的不受控制调节的PI 3-激酶脂类产物PI (3,4, 5) P3和PI (3， 4)P2在人的多种恶性肿瘤发展中起重要作用(Leevers等，1999，Current Opinion in CellBiology 11:219-225)。因此，将作为PI 3-激酶抑制剂的本文所述纯对映异构体用于 治疗人的肿瘤。PI 3-激酶还在白细胞功能(Fuller 等，1999，The Journal oflmmunology162(11) :6337-6340 ;Eder 等，1998， The Journal ofBiological Chemistry 273(43) 28025-31)和淋巴细胞功能(Vicente-Manzanares 等，1999， The Journal of Immunologyl63(7) =4001-4012)中起重要作用。例如，粘附到发炎内皮的白细胞通过PI 3_激酶-依赖性信号传导过程参与内生白细胞整联蛋白的激活。此外，嗜中性粒细胞中的 突发氧化(Nishioka 等，1998，FEBS Letters441 (1) :63_66 和 Condliffe，A. M.，等，Blood, 2005. 106(4) 1432-40)和细胞骨架再组成(Kirsch 等，1999，Proceedings National Academy ofSciences USA 96(11) :6211_6216)似乎涉及PI 3-激酶信号传导。嗜中性粒细 胞迁移和定向运动也依赖PI3K活性(Camps, M.，等，Nat Med, 2005. 11(9)第936-43页和 Sadhu，C.，等，J Immunol, 2003. 170(5) :2647_54)。因此，可将 PI 3-激酶抑制剂用于减少 白细胞粘附和炎症位点激活，并因此可用于治疗急性和/或慢性炎症性疾病。PI 3-激酶还 在淋巴细胞增生和活化中起重要作用，Fruman等，1999，Science 283(5400) :393_397。考 虑到淋巴细胞在自身免疫性疾病中的重要作用，可将PI 3-激酶活性抑制剂用于治疗所述 疾病。可例如通过测定化合物抑制活性到预定程度的浓度然后比较结果，来确定诸如本 文所述纯对映异构体等化合物作为酶活性抑制剂的功效。通常优选的测定是在生化测定中 抑制50%活性的浓度，即50%抑制浓度或“IC5(I”。可用本领域已知常规技术测定IC5Q。另外，本发明还涉及包含本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐与具有不 同作用机理的任何一种或多种抗血栓剂的组合，其中所述抗血栓剂可为例如一种或多种 以下物质抗凝剂未分级肝素、低分子量肝素、其他肝素衍生物、合成肝素衍生物(例如磺 达肝素)、维生素K拮抗剂(例如华法令)、合成或生物技术凝血因子抑制剂(例如合成 凝血酶、FVIIa、FXa、FXIa和FIXa抑制剂和rNAPc2)、抗血小板剂乙酰水杨酸、双嘧达莫、 西洛他唑(cilostazol)、噻氯匹定、氯吡格雷、普拉格雷、AZD6140、其他ADP/ATP受体抑 制剂(P2X1、P2Y1、P2Y12)；血栓烷受体和/或合成酶抑制剂；替罗非班、依替巴肽、阿昔单 抗或其他GPIIb/IIIa拮抗剂、环前列腺素模拟物、磷酸二酯酶抑制剂、诸如PARI拮抗剂 SCH 530348等的蛋白酶激活受体(PARI或PAR4)抑制剂、p-选择素拮抗剂、GPVI拮抗剂、 GPIba-vWF-胶原蛋白相互作用抑制剂、EP3受体拮抗剂和通过抑制羧肽酶U(CPU或TAFIa) 或纤溶酶原激活剂抑制剂-1 (PAI-1)起作用的纤维蛋白溶解刺激剂。此外，本发明涉及包含本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐和例如以下 的一种或多种溶栓剂的组合组织纤溶酶原激活剂(天然、重组或修饰的)、链激酶、尿激 酶、尿激酶原、茴酰化纤溶酶原_链激酶激活剂复合物(APSAC)、动物唾液腺纤溶酶原激活 剂、微纤维蛋白溶酶或其他纤溶酶原变体。在用于预防或治疗疾况的本发明方法中，可将有效量的本文所述纯对映异构体或 其药学上可接受的盐以剂量形式给予。在其他实施方案中，制剂形式可呈片剂(例如配 制成用于口服、舌下和含服给药的片剂)、胶囊剂(例如含有粉末、液体或控释制剂的胶囊 剂)、静脉内制剂、鼻内制剂、肌肉注射用制剂、糖浆剂、栓剂、气雾剂、含服制剂、透皮制剂或 阴道栓剂。另外，制剂含有约5-约500mg的本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐， 甚至进一步含有约25-约300mg的本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐。本发明另一方面涉及药物组合物，所述药物组合物含有本文所述纯对映异构体或 其药学上可接受的盐连同一种或多种药学上可接受的载体和/或稀释剂。以下术语“活性
12成分”可为本文所述纯对映异构体或其生理上可接受的盐、溶剂化物或功能衍生物。可通过任何方便手段给予该药物组合物。可例如通过口服、静脉内、腹膜内、肌肉 内、皮下、皮内或栓剂途径，或通过植入(例如用缓释制剂)，每日1次、每周1次、每月1次 或以其他合适的时间间隔来给予剂量。若可给予本文所述纯对映异构体或其药学上可接受 的盐的片剂形式，则该片剂可含有以下物质粘合剂，例如西黄耆胶、玉米淀粉或明胶；崩 解剂，例如藻酸；和润滑剂，例如硬脂酸镁。适于注射用的药物组合物包括无菌水性溶液剂或分散体及用于临时制备无菌可 注射溶液剂或分散剂的无菌粉剂，或可呈霜剂或其他适于局部施用的形式。载体可为含有 以下物质的溶剂或分散介质例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液体聚乙二醇 等)、其适当的混合物和植物油。可通过使用包衣(例如卵磷脂)、通过在分散情况下保持 所需粒径和通过使用表面活性剂，来保持适当的流动性。可通过各种抗细菌剂及抗真菌剂 (例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒等)来防止微生物污染。可包括等渗 剂，例如糖或氯化钠。可通过在组合物中使用延迟吸收的物质(例如单硬脂酸铝及明胶) 来获得延迟吸收的可注射组合物。可如下制备无菌注射溶液剂将本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐以 所需量与上面列举的各种其他成分纳入到合适溶剂中，接着过滤灭菌。通常可如下制备分 散体将无菌活性纯对映异构体纳入到含有基础分散介质及一种或多种上述成分的无菌溶 媒中。在将无菌粉末用于制备无菌注射溶液情况下，制备方法可为真空干燥及冷冻干燥，这 样可得到来自先前其无菌过滤溶液的本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐加上 任何另外的所需成分的粉末。可例如与惰性稀释剂或与可同化食用载体一起经口给予药物组合物，可将药物组 合物封装在硬壳或软壳明胶胶囊中，可将药物组合物压为片剂，或可直接与食物合并。对于 口服给药，可将本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐与赋形剂合并，可呈可摄取 片、含片、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂等形式使用。所述组合物和制剂 可含有至少重量的本文所述纯对映异构体或其药学上可接受的盐。组合物和制剂的百 分比可变化，可在约5-约80 %单位重量之间。在所述在治疗上有用的组合物中本文所述纯 对映异构体或其药学上可接受的盐的量可为将获得合适剂量的量。所述片剂、锭剂、丸剂、胶囊剂等还可含有粘合剂，例如树胶、阿拉伯胶、玉米淀粉 或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米淀粉、土豆淀粉、藻酸等；润滑剂，例如硬 脂酸镁；且可加入甜味剂(例如蔗糖、乳糖或糖精)或矫味剂(例如薄荷、冬青油或樱桃香 味料。当剂量单位形式为胶囊剂时，除上述类型的物质外，其还可含有液态载体。不同的其 他物质可作为包衣存在，或以其他方式改变剂量单位的物理形态。例如，可用虫胶、糖或二 者包被片剂、丸剂或胶囊剂。糖浆剂或酏剂可含有本文所述纯对映异构体或其药学上可接 受的盐、例如作为甜味剂的蔗糖、例如作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙 酯、例如染料和例如矫味剂(例如樱桃味或橙汁味)。当然，在制备任何剂量单位形式中所 用的任何物质都应该为药用纯，并在所用的量时基本上无毒。另外，可将活性纯对映异构体 纳入缓释制剂和制剂中。参考以下实施例进一步阐述本发明，但不受其限制。实验部分
13
缩写
DIPEAN，N-二异丙基乙胺
DPPP1，3_双(二苯基膦基)丙烷
DMFN，N-二甲基甲酰胺
HPLC高效液相色谱
THF四氢呋喃
Ms甲磺酰基
MTBE甲基叔丁基醚
s单峰
d重峰
dd两个双重峰
dt两个三重峰
t三重峰
m多重峰
通用实验程序
在 Varian Unity Plus 400mHz 或 Varian Inova 500MHz 上于 298K 获得咕匪R和13C NMR光谱。用溶剂残留峰作为内标以ppm表示化学位移CDC13Sh 7. 26 ；DMS0-d6 6 H2. 50 ； 8c 39. 5ppm。在PerkinElmer Model 341旋光计上将20°C下的旋光度记录下来。用
StuartScientific SMP3熔点仪记录熔点。通过分析手性色谱在用MeOH/甲酸(100/0.1) 洗脱的4. 6x250mm Chiralpak AS柱上测定标题化合物的对映体过量(ee)。在Bruker D8Advance X_射线粉末衍射仪上不用内参比物并用可变光栅测量 X-射线粉末衍射图数据。用软件ACD/Name的9. 04版生成化学名称(IUPAC)。如W02004016607中所述制备9_溴_2_羟基-7-甲基_4H_吡啶并[1，2_a]嘧 啶_4_酮 盐酸盐。
实施例实施例1(-)2-[1-(7_ 甲基 _2-(吗啉-4-基)_4_ 氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶 _9_ 基) 乙氨基]苯甲酸，可能为(_)2-{[(lR)-l-(7-甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并 [1,2-a]嘧啶-9-基)乙基]氨基}苯甲酸 a) 9-溴-7-甲基_2_吗啉~4~基_4H_吡啶并[1，2_a]嘧啶~4~酮在队气氛下于5°C向搅拌的9-溴-2-羟基-7-甲基-4H-吡啶并[l，2_a]嘧 啶-4-酮 盐酸盐(407g，1. 40mol)的无水THF(4L)浆液中经10分钟加入三乙胺(259g， 2. 56mol)。经30分钟加入MsCl (259g，2. 26mol)，在5°C将得到的混合物搅拌2. 5小时。加 入吗啉(388g，4. 45mol)，让得到的混合物在60°C搅拌6小时。加入水(8. 2L)，让得到的混 合物在65°C搅拌3小时。在4小时期间让混合物冷却到20°C，于20°C搅拌过夜。滤出产 物，用水(2. 0L+1. 5L)洗涤，并在0-1毫巴真空和40°C下干燥，得到426g(94% )的副标题 化合物。NMR (400MHz, CDC13) 6 8. 71 (s, 1H)，7. 84 (s，1H)，5. 60 (s，1H)，3. 89-3. 60 (m, 8H), 2. 34(s,3H).b) 9-乙酰基-7-甲基-2-吗啉-4-基-4H-吡啶并[1，2_a]嘧啶~4~酮于40°C在N2气氛下通过抽空并用氮气充入反应器来使10L反应器脱气，反应器中 加有在DMF (3. 0L)和水(400mL)中的9-溴-7-甲基-2-吗啉-4-基-4H-吡啶并[1，2_a]嘧 啶-4-酮(677g，2. 09mol)、K2C03(375g，2. 71mol)的搅拌浆液。加入乙烯基正丁基醚(1267g， 12. 6mol)，使得到的混合物再脱气一次。加入 DPPP(69.0g，0. 17mol)和 Pd (OAc) 2 (9. 24g， 0. 041mol)的DMF(340mL)悬浮液，让得到的混合物在90°C搅拌2天。让反应混合物于90°C 在真空下浓缩到总体积2. 5L。加入H20(9L)，于20°C让得到的悬浮液搅拌2小时。滤出固 体，并转移到25L反应器中。加入水(15L)和3. 6M HC1 (5L)，在1小时期间将混合物缓慢加 热到37°C。过滤几乎清澈的溶液，使滤液返回25L反应器中。通过加入45% Na0H(950mL) 直到pH为6来沉淀产物，让得到的浆液在20°C搅拌过夜。滤出产物，用水(2x4L)洗涤，在 40°C和0-1毫巴真空下干燥，得到531g(89% )的副标题化合物。NMR (400MHz, CDC13) 6 8. 86 (s，1H)，7. 84 (s，1H)，5. 66 (s，1H)，3. 83-3. 75 (m, 4H)，3. 66-3. 59 (m, 4H)，2. 77 (s, 3H)，2. 36 (s, 3H).c)9-(l_羟乙基)-7-甲基-2-吗啉-4-基-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶_4_酮经1小时向搅拌的9-乙酰基-7-甲基-2-吗啉-4-基-4H-吡啶并[l，2_a]嘧 啶-4-酮(502g, 1. 75mol)的 MeOH(4. 7L)浆液中加入 NaBH4(64. 9g，1. 72mol)。将得到的 混合物搅拌1小时，加入H20(1L)，在真空下于70°C将MeOH蒸除直到总体积为2L。加入水 (3L)，让得到的浆液在50°C搅拌30分钟，在6小时期间冷却到2°C，并在2°C搅拌过夜。滤 出产物，用冷水(2xlL)洗涤，在40°C和0-1毫巴真空炉中干燥，得到404g(80%)的副标题 化合物。NMR (400MHz, CDC13) 6 8. 63 (s，1H)，7. 50 (s，1H)，5. 64 (s，1H)，5. 23-5. 16 (m, 1H)，3. 82-3. 75 (m, 4H)，3. 63-3. 55 (m, 4H)，2. 33 (s, 3H)，1. 60 (d, 3H).d)2-{[l_(7-甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶_9_基)乙
基]氨基}苯甲酸向搅拌的9-(1_羟乙基)_7_甲基-2-吗啉-4-基-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶_4_酮 (338g，l. 17mol)的 CH2C12(4. 0L)溶液中加入 PBr3(lM 在 CH2C12 中，600mL)。让得到的混 合物在40°C搅拌2. 5小时。序贯加入2-氨基苯甲酸(192g，1.40mol)和三乙胺(0. 66L， 4. 74mol)，让得到的混合物在40°C搅拌过夜。加入水(2. 0L)，让混合物搅拌5分钟，分离 各相。将有机相浓缩到体积为约1.0L。于20°C向搅拌的残留物中加入丙酮(3.5L)和4MHCl(800mL)，让得到的浆液搅拌过夜。滤出产物，用丙酮(1. 0L)和水(2. 0L)洗涤，在40°C、 0-1毫巴真空炉中干燥，得到330g(69% )的副标题化合物。匪R(400MHz，DMS0-d6) 8 8. 54 (s, 1H), 8. 40 (d, 1H), 7. 80 (dd, 1H), 7. 60 (d, 1H), 7. 23 (dt, 1H)，6. 54 (t, 1H)，6. 37 (d, 1H)，5. 65 (s, 1H)，5. 22 (m, 1H)，3. 69 (m, 4H)，3. 63 (m, 4H)，2. 24(s，3H)，1. 58(d，3H).e)(-)2-{[(lR)-l_(7-甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧 啶-9-基)乙基]氨基}苯甲酸甲酯向搅拌的2-{[1-(7_甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧 啶-9-基)乙基]氨基}苯甲酸(115. 4g,0. 28mol)的DMF(l.OL)浆液中加入DIPEA (80mL， 0. 46mol)和MeI(25mL，0. 40mol)。让得到的混合物在室温搅拌过夜。加入MTBE(IL)和 H20(2L)。让混合物搅拌30分钟，分离各相。用MTBE (0. 6+0. 5L)萃取水相2次，用0. 05M NaHC03(2x0. 5L)和0. 4L H20洗涤合并的有机相。浓缩有机相，通过手性色谱在Chiralpak ASHPLC-柱上用20 80的庚烷/EtOH洗脱来分离对映异构体。收集较慢洗脱的化合物， 得到48g(99. 4%对映体过量)的副标题化合物。NMR(400MHz, CDC13) 6 8. 64(s, 1H) ,8. 23 (d, 1H)，7. 92 (dd, 1H)，7. 50 (d, 1H)， 7. 19 (dt, 1H)，6. 58 (t, 1H)，6. 27 (d, 1H)，5. 66 (s, 1H)，5. 30-5. 22 (m, 1H)，3. 91 (s，3H)， 3. 83-3. 78 (m, 4H)，3. 69-3. 63 (m, 4H)，2. 24 (s, 3H)，1. 63 (d, 3H).f)(-)2-{[(lR)-l_(7-甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧 啶-9-基)乙基]氨基}苯甲酸向搅拌的(_)2-{[(lR)-l-(7-甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[l，2_a] 嘧啶-9-基)乙基]氨基}苯甲酸甲酯(5. 22g, 12. 4mmol)的THF (35mL)和Me0H(35mL)溶 液中，加入溶于H20(35mL)的Na0H(2. 7g，67. 5mmol)。在室温中3天后，在真空下浓缩混合 物直到留下约3511^，用H20(200mL)稀释，用CH2C12 (50mL)洗涤。用1M HC1 (70mL)酸化水 层，用CH2Cl2(50mL)萃取。用盐水洗涤有机层，用MgS04干燥、过滤并浓缩到约5mL。将丙酮 (15mL)加入到残留物中，让混合物搅拌过夜。滤出结晶物质，用丙酮洗涤。通过另外的重结 晶从Et0H/H20除去痕量的丙酮和CH2C12，得到2. 94g(58% )的标题化合物。匪R(500MHz，DMS0-d6) 8 8. 53 (s, 1H), 8. 39 (d, 1H), 7. 79 (dd, 1H), 7. 59 (d, 1H), 7. 21 (dt, 1H)，6. 52 (t, 1H)，6. 36 (d, 1H)，5. 65 (s, 1H)，5. 21 (m, 1H)，3. 68 (m, 4H)，3. 62 (m, 4H), 2. 22(s，3H)，1. 57(d，3H)；13C NMR (500MHz, DMS0_d6) 8 170. 0，159. 7，157. 5，149. 4，146. 9，136. 6，135. 5， 134. 5，131. 7，123. 3，122. 1,114. 7, 111. 9,110. 4,80. 1，65. 8 (2C)，47. 5,44. 2(2C) ,21. 4， 17. 6 ；LC-MS[M+H]+ 409. 19(99. 9%对映体过量)[a ]D = -449，(c 0. 2，CH3CN)mp 245. 2-245. 6 °Co实施例2(+)2-[l_(7-甲基-2_(吗啉-4-基)-4_ 氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶 _9_ 基) 乙氨基]苯甲酸，可能为(+)2-{[(lS)-l-(7-甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-9-基)乙基]氨基}苯甲酸
a)(+)2-{[(lS)-l_(7-甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧 啶-9-基)乙基]氨基}苯甲酸甲酯收集实施例1步骤e中的较快洗脱的化合物，得到51g(99. 8%对映体过量)的副 标题化合物。b)(+)2-{[(lS)-l_(7-甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧 啶-9-基)乙基]氨基}苯甲酸通过与实施例1(参见If)中(_)2-{[(lR)-l-(7-甲基-2-吗啉-4-基-4-氧 代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶-9-基)乙基]氨基}苯甲酸所用相同的方法，从 (+)2-{[(lS)-l-(7-甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶_9_基)乙 基]氨基}苯甲酸甲酯(ll，9g，28mmol)制备标题化合物，得到10. 9g(94% )的标题化合 物。匪R(400MHz，DMS0-d6) 8 8. 53 (s, 1H), 8. 39 (d, 1H), 7. 79 (dd, 1H), 7. 59 (d, 1H), 7. 21 (dt, 1H)，6. 52 (t, 1H)，6. 36 (d, 1H)，5. 65 (s, 1H)，5. 21 (m, 1H)，3. 68 (m, 4H)，3. 62 (m, 4H), 2. 22(s，3H)，1. 57(d，3H)；13C NMR (DMS0-d6) 8 170. 0，159. 7，157. 5，149. 4，146. 9，136. 6，135. 5，134. 5， 131. 7，123. 3，122. 1,114. 7, 111. 9,110. 4,80. 1,65. 8(2C) ,47. 5,44. 2(2C) ,21. 4，17. 6 ；
(99. 8% ee)[a ]D = +443，(c 0. 2，CH3CN)mp 244. 0-244. 5°C。酶抑制测定在基于AlphaScreen的酶活性测定中用人重组酶评估了 PI3K0、PI3Ka、PI3Ky 和PI3KS的抑制。该测定检测了 PI3K-介导的磷脂酰肌醇(4，5) 二磷酸酯(PIP2)转化为 磷脂酰肌醇(3，4，5)三磷酸酯(PIP3)。生物素化PIP3、GST-标记的血小板白细胞C激酶 底物同系(PH)结构域和两个AlphaScreen珠粒形成了复合物，所述复合物于680nm处激光 激发时引出信号。在酶反应中形成的PIP3与生物素化的PIP3竞争结合PH结构域，由此随 着酶产物的增加信号降低。测试了 10种不同的化合物浓度，对PI3K0、PI3Ka ,PI3Ky和PI3KS的抑制表示 为最大活性百分比，用其对抑制剂浓度作图。Tffe将化合物溶解在DMS0中，并加入到384孔板中。将PI3K3、PI3K a、PI3K Y或PI3K 8 加入到 Tris 缓冲液(50mM Tris pH 7. 6,0. 05% CHAPS,5mM DTT 和 24mM MgCl2) 中，并在加入含有PIP2和ATP的底物溶液之前使其与化合物预孵育20分钟。20分钟后 通过加入含有EDTA和生物素-PIP3的终止液终止酶反应，接着加入含有GST-grpl PH和 AlphaScreen珠粒的检测溶液。在分析之前让板在黑暗中留置至少5个小时。测定中DMS0、 ATP和PIP2的最终浓度分别为0. 8%、4iiM和40iiM。数据分析按照以下公式计算IC5Q 值y = (a+((b-a)/(l+(X/IC5Q)s)))，其中 y 抑制；a =0% ;b = 100% ；s =浓度-响应曲线的斜率；X =抑制剂浓度。数据示于表2中。洗涤血小板聚集(WPA)泖丨定通过用1. 5*45mm(17GA，1. 77IN)的Venflon针静脉穿刺从健康志愿者采集血液。 弃初始2ml血液，然后将采集样品等份分到含有柠檬酸-葡萄糖(acid citrate dextrose, A⑶)的试管中。6体积的血液需要1体积的A⑶。以240xg将抗凝血离心15分钟以获得富血小板血浆(PRP)。将PRP转移到新的试 管中，以2200xg离心15分钟。弃上清液，将血小板沉淀在含有1 P M水蛭素和0. 02U/mL三 磷酸腺苷双磷酸酶的Tyrodes缓冲液(TB)中重新悬浮到200000xl09/L。让血小板混悬液在室温留置30分钟。临检测之前加入CaCl2到终浓度2mM。将测 试化合物或渥曼青霉素溶解到DMS0中，并在加入洗涤的血小板悬浮液之前将其加入到96 孔板中。让血小板悬浮液与抑制剂预孵育5分钟。在让板振荡之前及振荡后5分钟于650nm 处记录光吸收率，并称为记录0(R0)和R1。将小鼠抗人⑶9抗体(以供体特定浓度(donor specific concentration))加入到各孔中，接下来振荡板10分钟并记录光吸收率R2。在对化合物进行试验之前，在不存在或存在lyM渥曼青霉素(完全PI3K抑制) 情况下在每一洗涤血小板悬浮液中检测CD9抗体诱导的聚集的浓度响应。选择对PI3K抑 制有最大依赖的CD9抗体浓度用于对化合物的检测中。数据分析在用以下公式计算聚集百分比之前从所有读数中减去含TB的孔中的光吸收 率[(Rl-R2)/Rl]xl00 聚集。通过同一公式评估自发聚集或抑制剂的前聚集作用 [(R0-Rl)/R0]xl00 聚集。按照公式计算IC5Q值y = (a+((b-a)/(l+(X/IC5Q)s)))，其中y =洗涤血小板聚 集；a =最小聚集；b =最大聚集 ’s =浓度_响应曲线的斜率；x =抑制剂浓度。数据示于 表2中。表2.PI3K0、PI3Ka、PI3Ky和PI3KS和在WPA中每一对映异构体以及外消旋物 的 ic5Q表2
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权利要求
对映异构体纯( )2 [1 (7 甲基 2 (吗啉 4 基) 4 氧代 4H 吡啶并[1，2 a]嘧啶 9 基)乙氨基]苯甲酸或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的纯对映异构体，其特征在于所述对映异构体的对映异构体过量(ee)为 彡 95%。
3.权利要求1的纯对映异构体，其特征在于所述对映异构体的对映异构体过量(ee)为 彡 99. 8%，例如 99. 9%。
4.权利要求1-3中任一项的纯对映异构体，其特征在于所述对映异构体为固态。
5.权利要求1-4中任一项的纯对映异构体，其特征在于所述对映异构体为部分结晶状态。
6.权利要求1-5中任一项的纯对映异构体，其特征在于所述对映异构体为基本上结晶 状态。
7.权利要求1-6中任一项的纯对映异构体，其特征在于在以下近似d-值处具有XRPD 峰:6.8、5.9 和3.91 人。
8.权利要求1-6中任一项的纯对映异构体，其特征在于在以下近似d-值处具有XRPD 峰6. 8,6. 1,5. 9,4. 98,4. 41,4. 26 和3.91 人。
9.权利要求7或权利要求8的(-)2-[(IR)-I-(7-甲基_2_(吗啉-4-基)_4_氧 代-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶-9-基)乙氨基]苯甲酸，其特征在于具有基本上如图1所示 的XRPD-衍射图。
10.用于制备权利要求1-9中任一项的纯对映异构体的方法，所述方法包括通过手性 色谱法分离2-{[-1-(7_甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶-9-基) 乙基]氨基}苯甲酸甲酯的两种对映异构体，随后水解所述甲酯并结晶。
11.用于医学疗法中的权利要求1-9中任一项的纯对映异构体或其药学上可接受的盐。
12.—种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-9中任一项的纯对映异构体或 其药学上可接受的盐与药学上可接受的稀释剂或载体。
13.权利要求1-9中任一项的纯对映异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防或 治疗心血管疾病的方法的药物中的用途。
14.权利要求13的纯对映异构体或其药学上可接受的盐在制备用于抗血栓的方法的 药物中的用途。
15.权利要求1-9中任一项的纯对映异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防或 治疗呼吸道疾病的方法的药物中的用途。
16.权利要求1-9中任一项的纯对映异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防或 治疗癌症的方法的药物中的用途。
17.权利要求1-9中任一项的纯对映异构体或其药学上可接受的盐在制备用于预防或 治疗与失调的白血细胞功能有关联的疾病的方法的药物中的用途。
18.用于在温血动物中预防或治疗心血管疾病的方法，所述方法包括给予有效量的权 利要求1-9中任一项的纯对映异构体或其药学上可接受的盐。
19.用于在温血动物中预防或治疗呼吸道疾病的方法，所述方法包括给予有效量的权 利要求1-9中任一项的纯对映异构体或其药学上可接受的盐。
20.用于在温血动物中预防或治疗癌症的方法，所述方法包括给予有效量的权利要求 1-9中任一项的纯对映异构体或其药学上可接受的盐。
21.用于在温血动物中预防或治疗与失调的白血细胞功能有关联的疾病的方法，所述 方法包括给予有效量的权利要求1-9中任一项的纯对映异构体或其药学上可接受的盐。
22.包含权利要求1-9中任一项的纯对映异构体或其药学上可接受的盐及具有不同作 用机理的任何抗血栓剂的组合，其中所述抗血栓剂可为例如一种或多种以下物质抗凝剂 未分级肝素、低分子量肝素、其他肝素衍生物、合成肝素衍生物(例如磺达肝素)、维生素K 拮抗剂、凝血因子的合成或生物技术抑制剂(例如合成凝血酶、FVIIa、FXa、FXIa和FIXa抑 制剂和rNAPc2)；抗血小板剂乙酰水杨酸、双嘧达莫、西洛他唑；噻氯匹定、氯吡格雷、普拉 格雷、AZD6140、其他ADP/ATP受体抑制剂(P2X1、P2Y1、P2Y12)；血栓烷受体和/或合成酶 抑制剂；替罗非班、依替巴肽、阿昔单抗或其他GPIIb/IIIa拮抗剂；环前列腺素模拟物；磷 酸二酯酶抑制剂；蛋白酶激活的受体(PARI或PAR4)的抑制剂如PARI拮抗剂SCH 530348 ； P-选择素拮抗剂；GPVI拮抗剂；GPIb α-vWF-胶原蛋白相互作用抑制剂；EP3受体拮抗剂和 通过抑制羧肽酶U (CPU或TAFIa)或纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI-I)起作用的纤维蛋白 溶解刺激剂。
23.包含权利要求1-9中任一项的纯对映异构体或其药学上可接受的盐与溶栓剂的 组合，所述溶栓剂例如为以下物质中的一种或多种组织纤溶酶原激活剂(天然、重组或修 饰)、链激酶、尿激酶、尿激酶原、茴酰化纤溶酶原-链激酶激活剂复合物(APSAC)、动物唾液 腺纤溶酶原激活剂、微纤维蛋白溶酶或其他纤溶酶原变体。
24.2-{[ (IR)-I-(7-甲基-2-吗啉-4-基-4-氧代-4H-吡啶并[l，2_a]嘧啶 _9_ 基) 乙基]氨基}苯甲酸或其药学上可接受的盐。
全文摘要
本发明涉及为固态的对映异构体纯(-)2-[1-(7-甲基-2-(吗啉-4-基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-9-基)乙氨基]苯甲酸或其药学上可接受的盐、其在医学疗法中的用途、包含其的药物组合物、其在制备用于预防或治疗疾病的方法的药物中的用途和其在用于预防或治疗疾病的方法中的用途。本发明涉及磷酸肌醇(PI)3-激酶β的选择性抑制剂和所述选择性抑制剂在例如抗血栓疗法中的用途。
文档编号C07D471/04GK101925601SQ200980103542
公开日2010年12月22日 申请日期2009年1月22日 优先权日2008年1月25日
发明者D·古斯塔夫森, J·A·林伯格, O·弗尔斯特伦, S·杰克森 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司