一种高效毛细管电泳拆分外消旋托品酸的方法
【专利摘要】本发明属于拆分和检测技术领域，具体公开了一种高效毛细管电泳拆分外消旋托品酸的方法。本发明以添加了手性选择试剂的Tris?磷酸盐作为缓冲液体系，在一定的高效毛细管电泳参数，包括分离电压、分离温度、压力进样和紫外检测波长下，成功的外消旋托品酸进行了拆分，实现了基线分离，这为外消旋托品酸及其单体的研究打下了基础。
【专利说明】一种高效毛细管电泳拆分外消旋托品酸的方法 【技术领域】
[0001] 本发明涉及拆分和检测技术领域，具体涉及一种外消旋托品酸的拆分方法。 【【背景技术】】
[0002] 含有手性中心的化合物，其对映体通常具有极为相近的理化性质，但药理和毒理 作用却存在很大差异，往往一种立体异构体有药效而它的镜像分子却很小，甚至完全没有 药效或具有副作用。美国食品和药物管理局早在1992年就规定，今后凡开发具有不对称中 心的药物，必须给出手性拆分的结果。
[0003] 托品酸是一种重要的药物中间体，可用于合成抗胆碱药山莨菪碱和托吡卡胺等。 获得光学纯的托品酸也是药物合成的必然要求。因此，对外消旋托品酸进行手性拆分研究， 建立快速、有效的拆分方法是一个具有理论及实际意义的课题。
[0004] 目前，拆分方法主要有高效液相色谱固定相法、毛细管色谱法、离子对色谱法和酶 催化拆分等。现在，已存在使用高速逆流色谱法对外消旋托品酸进行拆分的专利，但还没有 用高效毛细管电泳对外消旋托品酸进行拆分的相关文献，且与其他拆分方法相比，HPCE具 有可灵活选择操作模式和手性选择剂、试剂及样品用量少且对环境污染小、分析速度快、应 用范围广等许多优点。 【
【发明内容】
】
[0005] 本发明的发明目的在于:针对上述存在的问题，提供一种高效毛细管电泳拆分外 消旋托品酸的方法。该方法具有可灵活选择操作模式和手性选择剂、试剂及样品用量少且 对环境污染小、分析速度快、应用范围广等许多优点，且本发明建立了一种拆分外消旋托品 酸的新方法，补充完善了对外消旋托品酸进行拆分的方法，为外消旋托品酸的研究提供了 帮助。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
[0007] -种高效毛细管电泳拆分外消旋托品酸的方法，包括以下具体步骤：
[0008] (1)以Tris-磷酸盐为缓冲液，在该缓冲液中添加手性选择试剂作为缓冲液体系， 搅拌至混合均勾后，超声脱气lOmin并用0.20M1的微孔滤膜过滤；
[0009] (2)用有机溶剂配制外消旋托品酸样品，样品浓度为2-5mg/mL;
[0010] (3)调节毛细管电泳参数为：分离电压为23-28KV，毛细管温度为22-27°C，压力进 样为0.1 psiXIOs，紫外检测波长为180-300nm;正极进外消旋托品酸样品，负极检测；
[0011] (4)在(3)设定的毛细管电泳参数下运行毛细管电泳仪，待基线平稳且基线波动在 0.15mAu范围内时进样，实现了外消旋托品酸的基线分离。
[0012] 进一步的，步骤（1)中，所述手性选择试剂为羟丙基-0-环糊精、乙基-0-环糊精或 盐酸化-0-环糊精中的一种。
[0013] 进一步的，步骤（1)中，所述手性选择试剂的浓度为3-8mmol/L，添加量为18-23% 的体积。
[0014] 进一步的，步骤(1)中，所述Tris-磷酸盐的浓度为25-38mmol/L，pH为2 ? 2-2 ? 9。 [0015]进一步的，步骤(2)中，所述有机溶剂为正己烷、正庚烷、正戊烷或乙醚中的一种。 [0016]进一步的，步骤(2)中，所述样品浓度为3mg/mL。
[0017]进一步的，步骤(3)中，所述分离电压为26KV。
[0018]进一步的，步骤(3)中，所述毛细管温度为24°C。
[0019]进一步的，步骤⑶中，所述紫外检测波长为195nm。
[0020] 综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
[0021] (1)本发明采用的拆分方法是高效毛细管电泳法，与其他拆分方法相比，具有可灵 活选择操作模式和手性选择剂、试剂及样品用量少且对环境污染小、分析速度快、应用范围 广等许多优点，用该方法对外消旋雷诺嗪进行拆分的分离效果好且灵敏度高。
[0022] (2)目前，并没有用高效毛细管电泳来对外消旋托品酸进行拆分的文献，现有技术 中公布的对外消旋托品酸的拆分方法比较单一，不全面，而本发明利用高效毛细管电泳来 拆分外消旋托品酸，为外消旋托品酸的拆分建立了一种新的、优选的方法，可以使研究人员 更方便的对外消旋托品酸及其单体进行研究。 【【具体实施方式】】
[0023]以下给出具体实施例，对本发明作进一步说明。
[0024] 实施例1
[0025] 1.电泳参数的设定
[0026]分离电压为23KV;分离温度为22°C ;紫外检测波长为180nm;压力进样为 0.lpsiX10s〇
[0027] 2.样品及缓冲液体系的制备
[0028] a.用正己烷配制外消旋托品酸样品，样品浓度为2mg/mL，待用；
[0029] b.缓冲液体系为加入18%(V)3mmol/L羟丙基-0-环糊精的Tris-磷酸盐，浓度为 25mmo 1/L，pH为2 ? 2，并用0 ? 20mi的水性滤膜过滤，待用。
[0030] 3.进样拆分
[0031 ]按设定的电泳参数运行高效毛细管电泳仪，先用0.20mi水性滤膜过滤过的蒸馏水 走30min，再用缓冲液体系走30min，再加电场30min，如此循环，直到基线平稳且基线波动在 0.15mV以内时，正极进外消旋雷诺嗪样品，负极检测。
[0032] 实施例2 [0033] 1.电泳参数的设定
[0034]分离电压为25KV;分离温度为24°C ;紫外检测波长为195nm;压力进样为 0.lpsiX10s〇
[0035] 2.样品及缓冲液体系的制备
[0036] a.用正庚烷配制外消旋托品酸样品，样品浓度为3mg/mL，待用；
[0037] b.缓冲液体系为加入20%(V)5mmol/L乙基-0-环糊精的Tris-磷酸盐，浓度为 29mmo 1 /L，pH为2 ? 5，并用0 ? 20mi的水性滤膜过滤，待用。
[0038] 3.进样拆分
[0039] 按设定的电泳参数运行高效毛细管电泳仪，先用0.20mi水性滤膜过滤过的蒸馏水 走30min，再用缓冲液体系走30min，再加电场30min，如此循环，直到基线平稳且基线波动在 0.15mV以内时，正极进外消旋雷诺嗪样品，负极检测。
[0040] 实施例3
[0041] 1.电泳参数的设定
[0042] 分离电压为26KV;分离温度为26°C ;紫外检测波长为250nm;压力进样为 0.lpsiX10s〇
[0043] 2.样品及缓冲液体系的制备
[0044] a.用正戊烷配制外消旋托品酸样品，样品浓度为4mg/mL，待用；
[0045] b.缓冲液体系为加入22%(V)6mmol/L乙基-0-环糊精的Tris-磷酸盐，浓度为 33mmo 1/L，pH为2 ? 7，并用0 ? 20mi的水性滤膜过滤，待用。
[0046] 3 ?进样拆分
[0047]按设定的电泳参数运行高效毛细管电泳仪，先用0.20mi水性滤膜过滤过的蒸馏水 走30min，再用缓冲液体系走30min，再加电场30min，如此循环，直到基线平稳且基线波动在 0.15mV以内时，正极进外消旋雷诺嗪样品，负极检测。
[0048] 实施例4
[0049] 1.电泳参数的设定
[0050] 分离电压为28KV;分离温度为27°C ;紫外检测波长为300nm;压力进样为 0.lpsiX10s〇
[0051 ] 2.样品及缓冲液体系的制备
[0052] a.用乙醚配制外消旋托品酸样品，样品浓度为4mg/mL，待用；
[0053] b.缓冲液体系为加入23%(V)8mmol/L盐酸化-0-环糊精的Tris-磷酸盐，浓度为 38mmo 1 /L，pH为2 ? 7，并用0 ? 20mi的水性滤膜过滤，待用。
[0054] 3.进样拆分
[0055]按设定的电泳参数运行高效毛细管电泳仪，先用0.20mi水性滤膜过滤过的蒸馏水 走30min，再用缓冲液体系走30min，再加电场30min，如此循环，直到基线平稳且基线波动在 0.15mV以内时，正极进外消旋雷诺嗪样品，负极检测。
[0056] 采集上述4个实施例的电泳图，经过计算得到分离度，作为实验组;按将文献中，采 用高速逆流色谱法对外消旋托品酸进行拆分，经过计算得到选出最佳分离度，作为对照组， 结果见表1:
[0057] 表 1
[0059] 由上表可知，在上述4个实施例中，均可以实现对外消旋托品酸的基线分离，且拆 分得到的分离度均优于对照组，其中，实施例的最佳分离度比对照组高45%。因此，本发明 的拆分方法不仅为外消旋托品酸建立了一种新的拆分方法，且本发明的方法具有更高的灵 敏度和更好的分离效果。
[0060] 上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发 明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属 于本发明所涵盖专利范围。
【主权项】
1. 一种高效毛细管电泳拆分外消旋托品酸的方法，其特征在于，包括以下具体步骤： (1) 以Tris-磷酸盐为缓冲液，在该缓冲液中添加手性选择试剂作为缓冲液体系，搅拌 至混合均勾后，超声脱气lOmin并用0.20μηι的微孔滤膜过滤； (2) 用有机溶剂配制外消旋托品酸样品，样品浓度为2-5mg/mL; (3) 调节毛细管电泳参数为：分离电压为23-28KV，毛细管温度为22-27°C，压力进样为 0.1 psiXIOs，紫外检测波长为180-300nm;正极进外消旋托品酸样品，负极检测； (4) 在（3)设定的毛细管电泳参数下运行毛细管电泳仪，待基线平稳且基线波动在 0.15mAu范围内时进样，实现了外消旋托品酸的基线分离。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1)中，所述手性选择试剂为羟丙基-β-环糊精、乙基-β-环糊精或盐酸化-β-环糊精中的一种。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1)中，所述手性选择试剂的浓度为3-8mmo 1 /L，添加量为18-23 %的体积。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1)中，所述Tris-磷酸盐的浓度为25-38mmol/L，pH为2·2-2·9。5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述有机溶剂为正己烷、正庚 烷、正戊烷或乙醚中的一种。6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述样品浓度为3mg/mL。7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述分离电压为26KV。8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述毛细管温度为24°C。9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述紫外检测波长为195nm。
【文档编号】G01N27/447GK106053579SQ201610615495
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月29日
【发明人】颜海
【申请人】颜海