一种室温磷光检测苯甲酸的方法
【专利摘要】一种室温磷光检测苯甲酸的方法，本发明涉及检测苯甲酸的方法。本发明要解决的现有的苯甲酸的检测方法成本高、条件苛刻、样品处理繁琐、选择性差、检测线性范围窄的技术问题。本方法是：以1?溴代芘作为磷光分子探针，在环糊精水溶液中，采用室温磷光光谱法进行检测。磷光光谱在最大磷光波长处的磷光光强比空白试样显著增强则可以对苯甲酸进行定性检测，用标准曲线法对苯甲酸进行定量检测，该检测方法不受其它常见食品添加剂和常见酸的影响，检出限低至0.68μmol/L，可用食品中苯甲酸的检测，如饮料等。
【专利说明】
一种室温磷光检测苯甲酸的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及检测苯甲酸的方法。
【背景技术】
[0002] 苯甲酸又叫安息香酸，常被用作食品防腐剂和添加剂，苯甲酸对真菌，酵母菌，霉 菌和细菌等抑制作用较强，苯甲酸本身具有一定的毒性，摄入过量会对人体健康造成危害， 因此开展对苯甲酸的检测对于生物、化学、环境及食品安全等都有着特殊意义。目前苯甲酸 的测量方法有很多，如顶空液相微萃取，液膜电极法，高效液相色谱法，毛细管电泳法等等。 总的来看，虽然这些方法灵敏度高，但是他们需要昂贵的仪器、精准的实验条件控制、复杂 的样品处理，同时这些方法的单一选择性差、检测线性范围窄的缺点。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的现有的苯甲酸的检测方法成本高、条件苛刻、样品处理繁琐、选择 性差、检测线性范围窄的技术问题，而提供一种室温磷光检测苯甲酸的方法。
[0004] 本发明的室温磷光检测苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作为磷光分子探 针，在环糊精(CD)水溶液中，采用室温磷光光谱法进行定性或定量检测。
[0005] 定性检测的方法具体按以下步骤进行:将待测试样加入到环糊精(CD)水溶液中， 再加入1-溴代芘（Ι-BrPy)作为磷光分子探针，混合均匀后得到待检溶液，在激发波长为 345nm的条件下检测待检溶液的室温磷光光谱，如果在最大发射波长处的磷光强度比空白 试样显著增强，则可判定该待测试样中含有苯甲酸。
[0006] 定量检测的方法具体按以下步骤进行:将苯甲酸标准品加入到环糊精(CD)水溶液 中，配制一系列标准试样，再加入1-溴代芘（Ι-BrPy)作为磷光分子探针，混合均勾后得到标 准试样溶液，在激发波长为345nm的条件下测试标准试样溶液的室温磷光光谱，得到在最大 发射波长处的磷光强度，以苯甲酸浓度为横作标，以最大发射波长处的磷光强度为纵作标， 作出标准曲线；用与标准品相同的方法检测待测试样的磷光强度，从标准曲线上查出待测 试样中的苯甲酸的浓度。
[0007] 本发明以1-溴代芘（Ι-BrPy)为磷光分子探针，1-溴代芘的分子结构式为：
在环糊精(CD)水溶液中，苯甲酸的结构和CD的空腔匹配性比较好，通 ， 过苯甲酸在CD空腔内进行空间调节作用和空间诱导作用，使1-溴代芘与苯甲酸、环糊精形 成稳定的三元复合物，显著地增强了 1-溴代芘（Ι-BrPy)的室温磷光发射强度，即使在不除 氧的条件下也有相同的现象，同时也不需要刻意调节pH值。基于这种结合导致的室温磷光 变化，本发明采用室温磷光光谱法建立了一种新的苯甲酸检测方法，并可以利用标准工作 曲线法进行含量推算。
[0008] 用该方法可以从常见的食品添加剂和常见的酸中单一选择性地定量或定性检测 苯甲酸，不受其它常见食品添加剂和常见的酸的影响，例如草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、 苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸、糖精、葡 萄糖和山梨酸等。该方法选择性强、灵敏度高、检出限低至于〇.68ymol/L，而且1-溴代芘具 有很好的光谱性能、高溶解度和低污染的特点，使本发明的方法具有取样量少、成本低、操 作简便、响应时间迅速的优点。可用食品中苯甲酸的检测，如饮料等。
【附图说明】
[0009] 图1是实施例1试验1中各种常见的食品添加剂及酸的室温磷光光谱图；
[0010] 图2是实施例1试验1中各种常见的食品添加剂及酸及光谱强度图；
[0011] 图3是实施例1试验2中磷光强度随pH值的变化关系曲线图；
[0012] 图4是实施例1试验3中的磷光光谱图；
[0013]图5是实施例1试验3中0~7.0X10-3mol/L范围内磷光强度随苯甲酸浓度的变化关 系曲线图；
[0014] 图6是实施例1试验3中0~7.0Xl(T4m〇l/L范围内磷光强度随苯甲酸浓度的变化关 系曲线图；
[0015] 图7是实施例1试验4中磷光光谱图；
[0016] 图8是实施例1试验4中各食品添加剂和酸的光强图；
[0017] 图9是实施例2试验1的磷光光谱强度与物质种类的关系直方图；
[0018] 图10是实施例3试验1的磷光光谱强度与物质种类的关系直方图。
【具体实施方式】
【具体实施方式】 [0019] 一：本实施方式的室温磷光检测苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（1-BrPy)作为磷光分子探针，在环糊精(CD)水溶液中，采用室温磷光光谱法进行定性或定量检 测 。
【具体实施方式】 [0020] 二:本实施方式与一不同的是:定性检测的方法具体 按以下步骤进行:将待测试样加入到环糊精(CD)水溶液中，再加入1-溴代芘（Ι-BrPy)作为 磷光分子探针，混合均匀后得到待检溶液，在激发波长为345nm的条件下检测待检溶液的室 温磷光光谱，如果在最大发射波长处的磷光强度比空白试样显著增强，则可判定该待测试 样中含有苯甲酸。
【具体实施方式】 [0021] 三:本实施方式与二不同是环糊精(CD)水溶液中，环 糊精为α、β、γ-环糊精。其它与二相同。
【具体实施方式】 [0022] 四：本实施方式与二或三不同是环糊精(CD)水溶液 中，环糊精的浓度为1. 〇 X 10-3mol/L~4.0 X 10-3mol/L。其它与二或三相同。
【具体实施方式】 [0023] 五:本实施方式与二至四之一不同是1-溴代芘的浓度 为1.0 X 10_8mol/L~1.0 X 10_6mol/L。其它与二至四之一相同。
【具体实施方式】 [0024] 六:本实施方式与二至五之一不同是最大发射波长为 612nm。其它与二至五之一相同。
【具体实施方式】 [0025] 七:本实施方式与二至六之一不同是显著增强是指磷 光强度提高20%以上。其它与二至六之一相同。
【具体实施方式】 [0026] 八:本实施方式与一不同的是:定量检测的方法具体 按以下步骤进行:将苯甲酸标准品加入到环糊精(CD)水溶液中，配制一系列标准试样，再加 入1-溴代芘（Ι-BrPy)作为磷光分子探针，混合均匀后得到标准试样溶液，在激发波长为 345nm的条件下测试标准试样溶液的室温磷光光谱，得到在最大发射波长处的磷光强度，以 苯甲酸浓度为横作标，以最大发射波长处的磷光强度为纵作标，作出标准曲线；用与标准品 相同的方法检测待测试样的磷光强度，从标准曲线上查出待测试样中的苯甲酸的浓度。
【具体实施方式】 [0027] 九:本实施方式与八不同是环糊精(CD)水溶液中，环 糊精的浓度为Ι.ΟΧΙθΛιοΙ/L~4.0Xl(T 3m〇l/L。其它与八相同。
【具体实施方式】 [0028] 十：本实施方式与八或九不同是1-溴代芘的浓度为 1.0 X 10-8mol/L~1.0 X 10-6mol/L。其它与八或九相同。
【具体实施方式】 [0029] 十一:本实施方式与八至十之一不同是最大发射波长 为612nm。其它与八至十之一相同。
[0030]用以下实施例验证本发明的有益效果：
[0031]实施例1:本实施例的室温磷光检测苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作为磷 光分子探针，在环糊精（CD)水溶液中，采用室温磷光光谱法进行检测；其中1-溴代芘（1-BrPy)的浓度为1 · 0 X 10-7mol/L，环糊精为γ -环糊精（γ -CD)，γ -CD的浓度为3 · 0 X 10- 3mol/L。进行下列试验：
[0032]试验1:本试验验证其它常见的食品添加剂及常见的酸对1-溴代芘磷光分子探针 溶液室温下磷光光谱影响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0X ΙθΛιοΙ/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓度为1.0 X l(r7m〇l/L，再加入各种常见的食品添加剂(糖精和 葡萄糖)及常见的酸(草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、 天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸），加入的食品添加剂及常见的酸的浓度为1-BrPy浓度的10 4倍，测定各溶液在激发波长为345nm最大发射波长612nm处的的磷光光谱图 如图1所示；图2是各种常见的食品添加剂及酸在最大发射波长612nm处的光谱强度图。图1 中纵坐标表示磷光强度，横坐标表示发射波长(λ^/nm);图2中纵坐标表示Ι-BrPy溶液在最 大发射波长处(612nm)的室温磷光强度，横坐标表示常见酸的种类(1为不加酸、2为苯甲酸、 3为草酸、4为柠檬酸、5为蛋氨酸、6为丝氨酸、7为苏氨酸、8为白氨酸、9为苯丙氨酸、10为半 胱氨酸、11为天冬氨酸、12为冰乙酸、13为磷酸、14为抗坏血酸、15为酒石酸、16为糖精、17为 葡萄糖）。从图1中可以看出，仅苯甲酸导致溶液室温磷光发生显著增强，而其它常见的食品 添加剂对溶液室温磷光光谱影响不明显。这表明，磷光探针1-溴代芘可在常见的食品添加 剂及常见的酸中单一选择性检测苯甲酸。从图2可以看出除苯甲酸之外的常见食品添加剂 及酸对溶液室温磷光光谱影响不明显。
[0033] 试验2:本试验验证pH值对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影响。具体 试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0X l(T3m〇l/L的γ -CD溶液中，其中1-溴代芘的浓度 为1.0 X 1 (T7mo 1 /L，做为溶液A;向溶液A中加入苯甲酸，其中苯甲酸的浓度为1.0 X 1 (T3mo 1 / L，做为溶液B;将溶液A与溶液B用浓HC1或NaOH溶液调节pH值，测定溶液室温磷光强度随pH 值的变化，得到的磷光强度随pH值的变化关系曲线如图3所示，其中：纵坐标表示最大发射 波长处(612nm)的室温磷光强度，横坐标表不pH值，从图3可以看出，pH对溶液体系的磷光强 度没有影响。
[0034] 试验3:本试验验证苯甲酸浓度对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影 响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘 的浓度为1. 〇 X 1 (T7mo 1/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸浓度为0-7.0 X ΙΟΛιο 1/L，测定其室 温磷光光谱。得到的磷光光谱图如图4所示，磷光强度随苯甲酸浓度的变化关系曲线如图5 和图6所示，从图4可以看出，随着苯甲酸的加入，探针分子在612nm处的室温磷光强度逐渐 增强。从图5可以看出，在苯甲酸浓度为0~7.0 X10_3mol/L的范围内，随着苯甲酸的加入磷 光强度逐渐增强，最后趋于稳定;从图6可以看出，当苯甲酸浓度在0~7.0 XHTVol/L范围 内，溶液的室温磷光强度与苯甲酸浓度呈现良好的线性关系(R2 = 〇.9917)，其线性回归方 程为y = 15.09x+2.185;对空白样进行20次平均测定，按3σ/Κ( 〇为空白标准偏差，K为回归方 程斜率），计算检出限为〇.68ymol/L，线性范围为0~0.70X10_3mol/L。表明本磷光试剂可以 尚灵敏检测苯甲酸。
[0035]试验4:本试验验证苯甲酸与其它酸共存时，对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下 磷光光谱影响，具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其 中1-溴代芘的浓度为1.0Xl(T7m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸与其它常见食品添加剂和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗坏血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的浓度为1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常见酸的 浓度为1.0 X10_3m〇l/L，测定各溶液的室温磷光光谱图，如图7所示，图7中纵坐标表示磷光 强度，横坐标表示室温磷光发射波长(A em/nm，激发波长为345nm)，各食品添加剂和酸在激发 波长为344nm、最大发射波长612nm处的光强如图8所不，图8的横坐标中，1为苯甲酸，2为草 酸+苯甲酸，3为柠檬酸+苯甲酸，4为蛋氨酸+苯甲酸，5为丝氨酸+苯甲酸，6为苏氨酸+苯甲 酸，7为白氨酸+苯甲酸，8为苯丙氨酸+苯甲酸，9为半胱氨酸+苯甲酸，10为天冬氨酸+苯甲 酸，11为冰乙酸+苯甲酸，12为磷酸+苯甲酸，13为抗坏血酸+苯甲酸，14为酒石酸+苯甲酸，15 为糖精+苯甲酸，16为葡萄糖+苯甲酸，从图7和图8可以看出，常见的食品添加剂如糖精和葡 萄糖、常见酸如草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨 酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸均不明显干扰苯甲酸复合物的室温磷光发射，其室温磷 光强度与溶液中仅存在苯甲酸时相似。由此表明，Ι-BrPy对苯甲酸的室温磷光检测不受其 它常见的食品添加剂和常见酸的影响。
[0036]试验5:本试验是磷光分子探针Ι-BrPy检测实际样品饮料中的苯甲酸的应用，具体 如下：
[0037] 一、将苯甲酸加入到碳酸饮料、软饮料中，苯甲酸的浓度为分别为0.0100,0.0150， 0.0200mM，做为测试样品。
[0038] 二、将1-溴代芘加入到浓度为3.0X l(T3m〇l/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓 度为1.0 X l(T7mol/L;向溶液中加入苯甲酸标准品，并在345nm激发下，检测612nm处室温磷 光发射强度，得到磷光发射强度随苯甲酸浓度的标准曲线；
[0039]三、在345nm激发下，检测612nm处步骤一中测试样品的室温磷光发射强度，然后从 标准曲线上查出测试样品的浓度值。
[0040]计算测试样品中的苯甲酸的回收率，测试及计算结果如表1所示，
[0041 ]表1回收率实验结果
[0042]
[0043]样品：1，2为碳酸饮料;3为软饮料.。
[0044] 从表1可以看出，实验结果，苯甲酸的回收率在95.0~103 %之间，结果表明，本方 法可应用于实际样品饮料中的苯甲酸检测。
[0045] 实施例2:本实施例的室温磷光检测苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作为磷 光分子探针，在环糊精(CD)水溶液中，采用室温磷光光谱法进行检测;其中1-溴代芘的浓度 为5.0 X 10_6mol/L，环糊精为γ -环糊精（γ -CD)，γ -CD的浓度为3.0 X 10_3mol/L。进行下列 试验：
[0046] 试验1:本试验验证其它常见的食品添加剂及常见的酸对1-溴代芘磷光分子探针 溶液室温下磷光光谱影响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0X ΙθΛιοΙ/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓度为5.OX l(T6m〇l/L，再加入各种常见的食品添加剂(苯甲酸、 糖精和葡萄糖)及常见的酸(草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱 氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸），加入的食品添加剂及常见的酸的浓度为 Ι-BrPy浓度的104倍，测定各溶液在激发波长为345nm最大发射波长612nm处的的磷光光谱 强度，得到的磷光光谱强度与物质种类的关系的直方图如图9所示，从图中可以看出，仅苯 甲酸导致溶液室温磷光发生显著增强，而其它常见的食品添加剂对溶液室温磷光光谱影响 不明显。这表明，磷光探针1-溴代芘可在常见的食品添加剂及常见的酸中单一选择性检测 苯甲酸。从图中可以看出除苯甲酸之外的常见食品添加剂及酸对溶液室温磷光光谱影响不 明显。
[0047] 试验2:本试验验证pH值对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影响。具体 试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0X l(T3m〇l/L的γ -CD溶液中，其中1-溴代芘的浓度 为5.0 X 1 (T6mo 1 /L，做为溶液A;向溶液A中加入苯甲酸，其中苯甲酸的浓度为1.0 X 1 (T3mo 1 / L，做为溶液B;将溶液A与溶液B用浓HC1或NaOH溶液调节pH值，测定溶液室温磷光强度随pH 值的变化情况，结果是pH对溶液体系的磷光强度没有影响。
[0048] 试验3:本试验验证苯甲酸浓度对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影 响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘 的浓度为5.0 X 10_6mol/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸浓度为0-7.0 X 10_3mol/L，测定其室 温磷光光谱。结果是:随着苯甲酸的加入，探针分子在612nm处的室温磷光强度逐渐增强，在 苯甲酸浓度为〇~7.0 Xl(T3m〇l/L的范围内，随着苯甲酸的加入磷光强度逐渐增强，最后趋 于稳定；当苯甲酸浓度在〇~6.8 X l(r4m〇l/L范围内，溶液的室温磷光强度与苯甲酸浓度呈 现良好的线性关系（R 2 = 〇. 9909)，其线性回归方程为y = 24.89x+8.575;对空白样进行20次 平均测定，按3σ/Κ(σ为空白标准偏差，K为回归方程斜率），计算检出限为1.06μπι 〇 1/L，线性 范围为0~6.8X10_4mo 1 /L。表明本磷光试剂可以高灵敏检测苯甲酸。
[0049] 试验4:本试验验证苯甲酸与其它酸共存时，对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下 磷光光谱影响，具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其 中1-溴代芘的浓度为5.0 Xl(T6m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸与其它常见食品添加剂和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗坏血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的浓度为1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常见食品 添加剂和酸的浓度为l.〇Xl〇_3mol/L，测定各溶液的室温磷光光谱，结果是:常见的食品添 加剂如糖精和葡萄糖、常见酸如草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、 半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸均不明显干扰苯甲酸复合物的室温磷 光发射，其室温磷光强度与溶液中仅存在苯甲酸时相似。由此表明，1 -BrPy对苯甲酸的室温 磷光检测不受其它常见的食品添加剂和常见酸的影响。
[0050] 试验5:本试验是磷光分子探针ι-BrPy检测实际样品饮料中的苯甲酸的应用，具体 如下：
[0051 ] 一、将苯甲酸加入到碳酸饮料、软饮料中，苯甲酸的浓度为分别为0.0100，0.0150， 0.0200mM，做为测试样品。
[0052]二、将1-溴代芘加入到浓度为3.0X l(T3m〇l/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓 度为5.0 X l(T6mol/L;向溶液中加入苯甲酸标准品，并在345nm激发下，检测612nm处室温磷 光发射强度，得到磷光发射强度随苯甲酸浓度的标准曲线；
[0053]三、在345nm激发下，检测612nm处步骤一中测试样品的室温磷光发射强度，然后从 标准曲线上查出测试样品的浓度值。
[0054]实验结果，苯甲酸的回收率在96.8~102.5%之间，说明本方法可应用于实际样品 饮料中的苯甲酸检测。
[0055]实施例3:本实施例的室温磷光检测苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作为磷 光分子探针，在环糊精(CD)水溶液中，采用室温磷光光谱法进行检测;其中1-溴代芘的浓度 为5.0 X 10_7mol/L，环糊精为γ -环糊精（γ -CD)，γ -CD的浓度为3.0 X 10_3mol/L。进行下列 试验：
[0056]试验1:本试验验证其它常见的食品添加剂及常见的酸对1-溴代芘磷光分子探针 溶液室温下磷光光谱影响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0X ΙθΛιοΙ/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓度为5.OX l(T7m〇l/L，再加入各种常见的食品添加剂(苯甲酸、 糖精和葡萄糖)及常见的酸(草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱 氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸），加入的食品添加剂及常见的酸的浓度为 1-BrPy浓度的104倍，测定各溶液在激发波长为345nm最大发射波长612nm处的的磷光光谱 强度，得到磷光光谱强度与与物质种类的关系直方图如图10所示;从图中可以看出，仅苯甲 酸导致溶液室温磷光发生显著增强，而其它常见的食品添加剂对溶液室温磷光光谱影响不 明显。这表明，磷光探针1-溴代芘可在常见的食品添加剂及常见的酸中单一选择性检测苯 甲酸。从图中可以看出除苯甲酸之外的常见食品添加剂及酸对溶液室温磷光光谱影响不明 显。
[0057] 试验2:本试验验证pH值对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影响。具体 试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0X l(T3m〇l/L的γ -CD溶液中，其中1-溴代芘的浓度 为5.0 X 1 (T7mo 1 /L，做为溶液A;向溶液A中加入苯甲酸，其中苯甲酸的浓度为1.0 X 1 (T3mo 1 / L，做为溶液B;将溶液A与溶液B用浓HC1或NaOH溶液调节pH值，测定溶液室温磷光强度随pH 值的变化，结果为pH对溶液体系的磷光强度没有影响。
[0058] 试验3:本试验验证苯甲酸浓度对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影 响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘 的浓度为5.0 X ΙθΛιοΙ/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸浓度为0-7.0 X 10_3mol/L，测定其室 温磷光光谱。结果为，随着苯甲酸的加入，探针分子在612nm处的室温磷光强度逐渐增强。同 时，在苯甲酸浓度为0~7.0 X l(T3m〇l/L的范围内，随着苯甲酸的加入磷光强度逐渐增强，最 后趋于稳定；当苯甲酸浓度在〇~5.6 X l(T4m〇l/L范围内，溶液的室温磷光强度与苯甲酸浓 度呈现良好的线性关系(R 2 = 〇. 9901)，其线性回归方程为y = 33.29x+5.285;对空白样进行 20次平均测定，按3σ/Κ(σ为空白标准偏差，K为回归方程斜率），计算检出限为1.08ymol/L， 线性范围为0~5.6X1 (T4mo 1 /L。表明本磷光试剂可以高灵敏检测苯甲酸。
[0059]试验4:本试验验证苯甲酸与其它酸共存时，对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下 磷光光谱影响，具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其 中1-溴代芘的浓度为5.0 Xl(r7m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸与其它常见食品添加剂和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗坏血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的浓度为1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常见食品 添加剂和酸的浓度为l.〇Xl〇_3mol/L，测定各溶液的室温磷光光谱，结果为，常见的食品添 加剂如糖精和葡萄糖、常见酸如草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、 半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸均不明显干扰苯甲酸复合物的室温磷 光发射，其室温磷光强度与溶液中仅存在苯甲酸时相似。由此表明，1 -BrPy对苯甲酸的室温 磷光检测不受其它常见的食品添加剂和常见酸的影响。
[0060]试验5:本试验是磷光分子探针ι-BrPy检测实际样品饮料中的苯甲酸的应用，具体 如下：
[0061 ] -、将苯甲酸加入到碳酸饮料、软饮料中，苯甲酸的浓度为分别为0.0100，0.0150， 0.0200mM，做为测试样品。
[0062]二、将1-溴代芘加入到浓度为3.0X l(T3m〇l/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓 度为5.0 X l(T7mol/L;向溶液中加入苯甲酸标准品，并在345nm激发下，检测612nm处室温磷 光发射强度，得到磷光发射强度随苯甲酸浓度的标准曲线；
[0063]三、在345nm激发下，检测612nm处步骤一中测试样品的室温磷光发射强度，然后从 标准曲线上查出测试样品的浓度值。
[0064] 实验结果，苯甲酸的回收率在94.2~101 %之间，结果表明，本方法可应用于实际 样品饮料中的苯甲酸检测。
[0065]实施例4:本实施例的室温磷光检测苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作为磷 光分子探针，在环糊精(CD)水溶液中，采用室温磷光光谱法进行检测;其中1-溴代芘的浓度 为1.0 X 10_7mol/L，环糊精为γ -环糊精（γ -CD)，γ -CD的浓度为1.0 X 10_3mol/L。进行下列 试验：
[0066]试验1:本试验验证其它常见的食品添加剂及常见的酸对1-溴代芘磷光分子探针 溶液室温下磷光光谱影响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为1.0 X l〇_3mol/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓度为l.〇Xl〇_7mol/L，再加入各种常见的食品添加剂(苯甲酸、 糖精和葡萄糖)及常见的酸(草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱 氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸），加入的食品添加剂及常见的酸的浓度为 Ι-BrPy浓度的104倍，测定各溶液在激发波长为345nm最大发射波长612nm处的的磷光光谱， 结果为，仅苯甲酸导致溶液室温磷光发生显著增强，而其它常见的食品添加剂对溶液室温 磷光光谱影响不明显。这表明，磷光探针1-溴代芘可在常见的食品添加剂及常见的酸中单 一选择性检测苯甲酸。同时可知除苯甲酸之外的常见食品添加剂及酸对溶液室温磷光光谱 影响不明显。
[0067] 试验2:本试验验证pH值对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影响。具体 试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为1.0 X l(T3m〇l/L的γ -CD溶液中，其中1-溴代芘的浓度 为1.0 X 1 (T7mo 1 /L，做为溶液A;向溶液A中加入苯甲酸，其中苯甲酸的浓度为1.0 X 1 (T3mo 1 / L，做为溶液B;将溶液A与溶液B用浓HC1或NaOH溶液调节pH值，测定溶液室温磷光强度随pH 值的变化情况，结果为，pH对溶液体系的磷光强度没有影响。
[0068] 试验3:本试验验证苯甲酸浓度对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影 响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为1.〇 X l(T3mol/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘 的浓度为1. 〇 X 1 (T7mo 1/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸浓度为0-7.0 X ΙΟΛιο 1/L，测定其室 温磷光光谱。结果为，随着苯甲酸的加入，探针分子在612nm处的室温磷光强度逐渐增强。同 时，在苯甲酸浓度为0~7.0 X l(T3m〇l/L的范围内，随着苯甲酸的加入磷光强度逐渐增强，最 后趋于稳定；当苯甲酸浓度在〇~6.2 X l(T4m〇l/L范围内，溶液的室温磷光强度与苯甲酸浓 度呈现良好的线性关系(R 2 = 0.9905)，其线性回归方程为y = 35.09x+5.185;对空白样进行 20次平均测定，按3〇/Κ(σ为空白标准偏差，K为回归方程斜率），计算检出限为0.99ymol/L， 线性范围为0~6.2X1 (T4mo 1 /L。表明本磷光试剂可以高灵敏检测苯甲酸。
[0069]试验4:本试验验证苯甲酸与其它酸共存时，对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下 磷光光谱影响，具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为1. 〇 X l(T3mol/L的γ -⑶溶液中，其 中1-溴代芘的浓度为1.0Xl(T7m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸与其它常见食品添加剂和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗坏血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的浓度为1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常见食品 添加剂和酸的浓度为l.〇Xl〇_3mol/L，测定各溶液的室温磷光光谱，结果为，常见的食品添 加剂如糖精和葡萄糖、常见酸如草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、 半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸均不明显干扰苯甲酸复合物的室温磷 光发射，其室温磷光强度与溶液中仅存在苯甲酸时相似。由此表明，1 -BrPy对苯甲酸的室温 磷光检测不受其它常见的食品添加剂和常见酸的影响。
[0070] 试验5:本试验是磷光分子探针Ι-BrPy检测实际样品饮料中的苯甲酸的应用，具体 如下：
[0071] -、将苯甲酸加入到碳酸饮料、软饮料中，苯甲酸的浓度为分别为0.0100,0.0150， 0.0200mM，做为测试样品。
[0072] 二、将1-溴代芘加入到浓度为1 .OX l(T3m〇l/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓 度为1.0 X l(T7mol/L;向溶液中加入苯甲酸标准品，并在345nm激发下，检测612nm处室温磷 光发射强度，得到磷光发射强度随苯甲酸浓度的标准曲线；
[0073]三、在345nm激发下，检测612nm处步骤一中测试样品的室温磷光发射强度，然后从 标准曲线上查出测试样品的浓度值。
[0074] 实验结果为苯甲酸的回收率在96.0~102%之间，结果表明本方法可应用于实际 样品饮料中的苯甲酸检测。
[0075]实施例5:本实施例的室温磷光检测苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作为磷 光分子探针，在环糊精(CD)水溶液中，采用室温磷光光谱法进行检测;其中1-溴代芘的浓度 为1 · 0 X 10 7mol/L，环糊精为α_环糊精(a_CD)α_⑶的浓度为1 · 0 X 10 3mo 1/L。进彳丁下列试 验：
[0076]试验1:本试验验证其它常见的食品添加剂及常见的酸对1-溴代芘磷光分子探针 溶液室温下磷光光谱影响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为1.〇 X ΙθΛιοΙ/L的α-⑶ 溶液中，其中1-溴代芘的浓度为1.0X10_7mol/L，再加入各种常见的食品添加剂(苯甲酸、糖 精和葡萄糖)及常见的酸(草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨 酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸），加入的食品添加剂及常见的酸的浓度为1-BrPy浓度的10 4倍，测定各溶液在激发波长为345nm、最大发射波长612nm处的的磷光光谱， 结果为，仅苯甲酸导致溶液室温磷光发生显著增强，而其它常见的食品添加剂对溶液室温 磷光光谱影响不明显。这表明，磷光探针1-溴代芘可在常见的食品添加剂及常见的酸中单 一选择性检测苯甲酸，而且除苯甲酸之外的常见食品添加剂及酸对溶液室温磷光光谱影响 不明显。
[0077] 试验2:本试验验证pH值对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影响。具体 试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为1 .〇 X l(T3m〇l/L的α-⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓度为 1.0 X l(T7m〇 1/L，做为溶液A;向溶液Α中加入苯甲酸，其中苯甲酸的浓度为1.0 X l(T3m〇 1/L， 做为溶液B;将溶液A与溶液B用浓HC1或NaOH溶液调节pH值，测定溶液室温磷光强度随pH值 的变化情况，结果为，pH对溶液体系的磷光强度没有影响。
[0078] 试验3:本试验验证苯甲酸浓度对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影 响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为1.0Xl(T3mol/L的α-⑶溶液中，其中1-溴代芘 的浓度为1. 〇 X 1 (T7mo 1/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸浓度为0-7.0 X ΙΟΛιο 1/L，测定其室 温磷光光谱。结果表明，随着苯甲酸的加入，探针分子在612nm处的室温磷光强度逐渐增强。 同时，在苯甲酸浓度为0~7.0Xl(T 3m〇l/L的范围内，随着苯甲酸的加入磷光强度逐渐增强， 最后趋于稳定；当苯甲酸浓度在〇~6.0 X l(T4m〇l/L范围内，溶液的室温磷光强度与苯甲酸 浓度呈现良好的线性关系(R 2 = 〇. 9905)，其线性回归方程为y= 15.58x+7.285;对空白样进 行20次平均测定，按3σ/Κ(σ为空白标准偏差，K为回归方程斜率），计算检出限为0.98μπι 〇1/ L，线性范围为0~6.0X10_4mo 1 /L。表明本磷光试剂可以高灵敏检测苯甲酸。
[0079]试验4:本试验验证苯甲酸与其它酸共存时，对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下 磷光光谱影响，具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为1. ο X ΙθΛιοΙ/L的α-CD溶液中，其 中1-溴代芘的浓度为1.0Xl(T7m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸与其它常见食品添加剂和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗坏血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的浓度为1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常见食品 添加剂和酸的浓度为1. 〇 X 1 (T3mo 1 /L，测定各溶液的室温磷光光谱图。从图中可以看出，常 见的食品添加剂如糖精和葡萄糖、常见酸如草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、 苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸均不明显干扰苯甲酸复合 物的室温磷光发射，其室温磷光强度与溶液中仅存在苯甲酸时相似。由经表明，Ι-BrPy对苯 甲酸的室温磷光检测不受其它常见的食品添加剂和常见酸的影响。
[0080]试验5:本试验是磷光分子探针Ι-BrPy检测实际样品饮料中的苯甲酸的应用，具体 如下：
[0081 ] -、将苯甲酸加入到碳酸饮料、软饮料中，苯甲酸的浓度为分别为0.0100，0.0150， 0.0200mM，做为测试样品。
[0082]二、将1-溴代芘加入到浓度为1.0X10_3mol/L的a-⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓度 为1.0 X l(T7mol/L;向溶液中加入苯甲酸标准品，并在345nm激发下，检测612nm处室温磷光 发射强度，得到磷光发射强度随苯甲酸浓度的标准曲线；
[0083]三、在345nm激发下，检测612nm处步骤一中测试样品的室温磷光发射强度，然后从 标准曲线上查出测试样品的浓度值。
[0084] 实验结果，苯甲酸的回收率在95.2~102%之间，结果表明，本方法可应用于实际 样品饮料中的苯甲酸检测。
[0085]实施例6:本实施例的室温磷光检测苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作为磷 光分子探针，在环糊精(CD)水溶液中，采用室温磷光光谱法进行检测;其中1-溴代芘的浓度 为5.0 X 10_6mo 1 /L，环糊精为β-环糊精(β-CD)，β-CD的浓度为3.0 X 10_3mo 1 /L。进行下列试 验：
[0086]试验1:本试验验证其它常见的食品添加剂及常见的酸对1-溴代芘磷光分子探针 溶液室温下磷光光谱影响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的β-⑶ 溶液中，其中1-溴代芘的浓度为5.0Xl(T6m 〇l/L，再加入各种常见的食品添加剂(苯甲酸、糖 精和葡萄糖)及常见的酸(草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨 酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸），加入的食品添加剂及常见的酸的浓度为1-BrPy浓度的10 4倍，测定各溶液在激发波长为345nm最大发射波长612nm处的的磷光光谱，结 果为，仅苯甲酸导致溶液室温磷光发生显著增强，而其它常见的食品添加剂对溶液室温磷 光光谱影响不明显。这表明，磷光探针1-溴代芘可在常见的食品添加剂及常见的酸中单一 选择性检测苯甲酸，而且除苯甲酸之外的常见食品添加剂及酸对溶液室温磷光光谱影响不 明显。
[0087] 试验2:本试验验证pH值对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影响。具体 试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X l(T3m〇l/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓度为 5.0 X l(T6m〇 1/L，做为溶液A;向溶液Α中加入苯甲酸，其中苯甲酸的浓度为1.0 X l(T3m〇 1/L， 做为溶液B;将溶液A与溶液B用浓HC1或NaOH溶液调节pH值，测定溶液室温磷光强度随pH值 的变化情况，结果表明pH对溶液体系的磷光强度没有影响。
[0088] 试验3:本试验验证苯甲酸浓度对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影 响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘 的浓度为5.0 X 10_6mol/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸浓度为0-7.0 X 10_3mol/L，测定其室 温磷光光谱。结明表明，随着苯甲酸的加入，探针分子在612nm处的室温磷光强度逐渐增强。 同时，在苯甲酸浓度为0~7.0Xl(T 3m〇l/L的范围内，随着苯甲酸的加入磷光强度逐渐增强， 最后趋于稳定；当苯甲酸浓度在〇~6.4 X l(T4m〇l/L范围内，溶液的室温磷光强度与苯甲酸 浓度呈现良好的线性关系(R 2 = 0.9932)，其线性回归方程为y = 24.59x+6.375;对空白样进 行20次平均测定，按3σ/Κ(σ为空白标准偏差，K为回归方程斜率），计算检出限为2.96μπι 〇1/ L，线性范围为0~6.4X10_4mo 1 /L。表明本磷光试剂可以高灵敏检测苯甲酸。
[0089]试验4:本试验验证苯甲酸与其它酸共存时，对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下 磷光光谱影响，具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的β-CD溶液中，其 中1-溴代芘的浓度为5.0 Xl(T6m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸与其它常见食品添加剂和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗坏血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的浓度为1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常见食品 添加剂和酸的浓度为l.〇Xl〇_3mol/L，测定各溶液的室温磷光光谱，结果为，常见的食品添 加剂如糖精和葡萄糖、常见酸如草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、 半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸均不明显干扰苯甲酸复合物的室温磷 光发射，其室温磷光强度与溶液中仅存在苯甲酸时相似。由此表明，1 -BrPy对苯甲酸的室温 磷光检测不受其它常见的食品添加剂和常见酸的影响。
[0090]试验5:本试验是磷光分子探针ι-BrPy检测实际样品饮料中的苯甲酸的应用，具体 如下：
[0091 ] -、将苯甲酸加入到碳酸饮料、软饮料中，苯甲酸的浓度为分别为0.0100，0.0150， 0.0200mM，做为测试样品。
[0092]二、将1-溴代芘加入到浓度为3.0Xl(T3m〇l/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓度 为5.0 X l(T6mol/L;向溶液中加入苯甲酸标准品，并在345nm激发下，检测612nm处室温磷光 发射强度，得到磷光发射强度随苯甲酸浓度的标准曲线；
[0093]三、在345nm激发下，检测612nm处步骤一中测试样品的室温磷光发射强度，然后从 标准曲线上查出测试样品的浓度值。
[0094] 实验结果，苯甲酸的回收率在95.8~101.5%之间，结果表明，本方法可应用于实 际样品饮料中的苯甲酸检测。
[0095]实施例7:本实施例的室温磷光检测苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作为磷 光分子探针，在环糊精(CD)水溶液中，采用室温磷光光谱法进行检测;其中1-溴代芘的浓度 为5.0 X 10_7mo 1 /L，环糊精为β-环糊精(β-CD)，β-CD的浓度为3.0 X 10_3mo 1 /L。进行下列试 验：
[0096]试验1:本试验验证其它常见的食品添加剂及常见的酸对1-溴代芘磷光分子探针 溶液室温下磷光光谱影响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的β-⑶ 溶液中，其中1-溴代芘的浓度为5.0Xl(T7m 〇l/L，再加入各种常见的食品添加剂(苯甲酸、糖 精和葡萄糖)及常见的酸(草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨 酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸），加入的食品添加剂及常见的酸的浓度为1-BrPy浓度的104倍，测定各溶液在激发波长为345nm最大发射波长612nm处的的磷光光谱，结 果表明，仅苯甲酸导致溶液室温磷光发生显著增强，而其它常见的食品添加剂对溶液室温 磷光光谱影响不明显。这表明，磷光探针1-溴代芘可在常见的食品添加剂及常见的酸中单 一选择性检测苯甲酸，而且除苯甲酸之外的常见食品添加剂及酸对溶液室温磷光光谱影响 不明显。
[0097] 试验2:本试验验证pH值对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影响。具体 试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X l(T3m〇l/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓度为 5.0 X l(T7m〇 1/L，做为溶液A;向溶液Α中加入苯甲酸，其中苯甲酸的浓度为1.0 X l(T3m〇 1/L， 做为溶液B;将溶液A与溶液B用浓HC1或NaOH溶液调节pH值，测定溶液室温磷光强度随pH值 的变化情况，结果表明，pH对溶液体系的磷光强度没有影响。
[0098] 试验3:本试验验证苯甲酸浓度对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下磷光光谱影 响。具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘 的浓度为5.0 X ΙθΛιοΙ/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸浓度为0-7.0 X 10_3mol/L，测定其室 温磷光光谱。结果表明，随着苯甲酸的加入，探针分子在612nm处的室温磷光强度逐渐增强。 同时，在苯甲酸浓度为0~7.0Xl(T 3m〇l/L的范围内，随着苯甲酸的加入磷光强度逐渐增强， 最后趋于稳定；当苯甲酸浓度在〇~5.0 X l(T4m〇l/L范围内，溶液的室温磷光强度与苯甲酸 浓度呈现良好的线性关系(R 2 = 0.9927)，其线性回归方程为y = 34.69x+4.285;对空白样进 行20次平均测定，按3σ/Κ(σ为空白标准偏差，K为回归方程斜率），计算检出限为1.98μπι 〇1/ L，线性范围为0~5.0X10_4mo 1 /L。表明本磷光试剂可以高灵敏检测苯甲酸。
[0099]试验4:本试验验证苯甲酸与其它酸共存时，对1-溴代芘磷光分子探针溶液室温下 磷光光谱影响，具体试验如下:将1-溴代芘加入到浓度为3.0 X 10_3mol/L的β-CD溶液中，其 中1-溴代芘的浓度为5.0 Xl(r7m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸与其它常见食品添加剂和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗坏血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的浓度为1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常见食品 添加剂和酸的浓度为l.〇Xl〇_3mol/L，测定各溶液的室温磷光光谱，结果表明，常见的食品 添加剂如糖精和葡萄糖、常见酸如草酸、柠檬酸、蛋氨酸、丝氨酸、苏氨酸、白氨酸、苯丙氨 酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗坏血酸、酒石酸均不明显干扰苯甲酸复合物的室 温磷光发射，其室温磷光强度与溶液中仅存在苯甲酸时相似。由此表明，Ι-BrPy对苯甲酸的 室温磷光检测不受其它常见的食品添加剂和常见酸的影响。
[0100] 试验5:本试验是磷光分子探针Ι-BrPy检测实际样品饮料中的苯甲酸的应用，具体 如下：
[0101] -、将苯甲酸加入到碳酸饮料、软饮料中，苯甲酸的浓度为分别为0.0100，0.0150， 0.0200mM，做为测试样品。
[0102] 二、将1-溴代芘加入到浓度为3.0Xl(T3m〇l/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘的浓度 为5.0 X l(T7mol/L;向溶液中加入苯甲酸标准品，并在345nm激发下，检测612nm处室温磷光 发射强度，得到磷光发射强度随苯甲酸浓度的标准曲线；
[0103] 三、在345nm激发下，检测612nm处步骤一中测试样品的室温磷光发射强度，然后从 标准曲线上查出测试样品的浓度值。
[0104] 实验结果，苯甲酸的回收率在94.6~102%之间，结果表明，本方法可应用于实际 样品饮料中的苯甲酸检测。
【主权项】
1. 一种室温磷光检测苯甲酸的方法，其特征在于该方法是以1-溴代芘作为磷光分子探 针，在环糊精水溶液中，采用室温磷光光谱法进行定性或定量检测。2. 根据权利要求1所述的一种室温磷光检测苯甲酸的方法，其特征在于定性检测的方 法具体按以下步骤进行:将待测试样加入到环糊精水溶液中，再加入1-溴代芘作为磷光分 子探针，混合均匀后得到待检溶液，在激发波长为345nm的条件下检测待检溶液的室温磷光 光谱，如果在最大发射波长处的磷光强度比空白试样显著增强，则可判定该待测试样中含 有苯甲酸。3. 根据权利要求1或2所述的一种室温磷光检测苯甲酸的方法，其特征在于环糊精水溶 液中，环糊精为α、β、γ-环糊精。4. 根据权利要求1或2所述的一种室温磷光检测苯甲酸的方法，其特征在于环糊精水溶 液中，环糊精的浓度为1.0 X 10-3~4.0 X 10-3mo 1 /L。5. 根据权利要求1或2所述的一种室温磷光检测苯甲酸的方法，其特征在于1-溴代芘的 浓度为1 · 〇 X 10-8mol/L~1 · 0 X 10-6mol/L。6. 根据权利要求1或2所述的一种室温磷光检测苯甲酸的方法，其特征在于最大发射波 长为612nm。7. 根据权利要求1或2所述的一种室温磷光检测苯甲酸的方法，其特征在于显著增强是 指憐光强度提尚了20%以上。8. 根据权利要求1所述的一种室温磷光检测苯甲酸的方法，其特征在于定量检测的方 法具体按以下步骤进行:将苯甲酸标准品加入到环糊精水溶液中，配制一系列标准试样，再 加入1-溴代芘作为磷光分子探针，混合均匀后得到标准试样溶液，在激发波长为345nm的条 件下测试标准试样溶液的室温磷光光谱，得到在最大发射波长处的磷光强度，以苯甲酸浓 度为横作标，以最大发射波长处的磷光强度为纵作标，作出标准曲线；用与标准品相同的方 法检测待测试样的磷光强度，从标准曲线上查出待测试样中的苯甲酸的浓度。9. 根据权利要求8所述的一种室温磷光检测苯甲酸的方法，其特征在于环糊精水溶液 中，环糊精的浓度为1.0 X 10-3~4.0 X 10-3mo 1 /L。10. 根据权利要求8所述的一种室温磷光检测苯甲酸的方法，其特征在于1-溴代芘的浓 度为1 · 0 X 10-8mol/L~1 · 0 X 10-6mol/L。
【文档编号】G01N21/64GK105973863SQ201610613639
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年7月29日
【发明人】郭祥峰, 王金平, 贾丽华
【申请人】齐齐哈尔大学