一种中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，包括试剂盒盒体，试剂盒盒体中装有提取剂离心管、分散助提剂离心管、淋洗剂离心管和两支一次性针管式过滤器；提取剂离心管和淋洗剂离心管为具塞螺旋盖聚丙烯锥形底离心管，分散助提剂离心管为具塞螺旋盖聚丙烯平底离心管；第一支一次性针管式过滤器由柱体塞、聚乙烯柱体和针头塞构成，聚乙烯柱体内由上至下装有上挡筛板、双层填料、下挡筛板；第二支一次性针管式过滤器由柱活塞、聚乙烯柱体和针头式过滤器构成，针头式过滤器内有滤膜。本实用新型具有构成合理、制作成本低、操作简单、环境污染小、稳定性好、抗干扰能力强等优点，并能满足减少溶剂使用量和提高提取效率的需求，便于推广。
【专利说明】一种中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及食品安全【技术领域】，特别是涉及一种中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒。
【背景技术】
[0002]苯并(a)花(Benzo (a) Pyrene, B (a) P)是多环芳香族碳氢化合物中具有代表性的、国际公认的强致癌物质之一，通过呼吸道、消化道、皮肤等均可被人体或动物吸收，能够导致人和动物的肿瘤和癌变，高剂量时甚至能够引起免疫抑制，对健康造成潜在的威胁。常温下呈浅黄色晶状固体，分子式为C20H12，相对分子质量为252，沸点310_320°C，熔点179-180°C，易溶于环己烷、己烷、苯等有机溶剂，微溶于乙醇、甲醇，苯并(a)芘用360nm紫外光照射时，可产生典型的紫色荧光。
[0003]在中药材中，其残留主要是由于在加工过程中对原料反复烘烤、蒸炒，而温度控制不当导致烧焦现象，生成苯并(a)芘，残留在原料的外壳上。近年来，我国、欧盟和韩国等多国对食品中苯并(a)芘含量有严格的限量标准:中药和粮食一般不超过5 μ g/kg。我国GB2762-2005《食品污染物限量》规定限量为10 μ g/kg。因此开展苯并(a)芘残留量的检测技术研究，对中药材进行科学的风险评估与监测十分重要。
[0004]苯并(a)芘检测的难点在于有效的排除干扰，干扰包括使用试剂带入和样品基质中固有两部分，试剂处理是苯并(a)芘检测排除假阳性的一个关键性步骤，在一些试剂中曾发现苯并(a)芘含量甚至超过食品标准限量的现象，同时样品前处理的结果将直接影响检测结果的准确性和可靠性。
[0005]样品前处理主要包括提取和净化。已报道的关于苯并(a)芘的测定中，大多采用传统的超声辅助提取，以及液-液萃取法和固相萃取法提取样品中目标物。这种方法消耗大量有毒有害的有机试剂，繁琐费时，在萃取过程中容易产生大量乳化剂，影响萃取效率，并且需要专业的提取设备、成本高，难以在普通小型实验室推广，其应用范围受到限制。
[0006]另夕卜，现行的国标GB/T5009.27-2003《食品中苯并(a)芘的测定》、GB/T22509-2008《动植物油脂苯并(a)芘的测定反相高效液相色谱法》和行业标准NY/T919-2004《饲料中苯并(a)芘的测定高效液相色谱法》、NY/T1666-2008《肉制品中苯并(a)芘的测定高效液相色谱法》等标准的检测前处理方法均不适用于中药材。因此，建立一种效果好、实际用量少、便捷快速且针对中药材这一基质的前处理装置迫在眉睫。
实用新型内容
[0007]本实用新型所要解决的技术问题是，提供一种提取效率高且可以有效去除杂质的中药材中苯并(a)花检测前处理试剂盒。
[0008]为了解决上述技术问题，本实用新型采用的技术方案是:一种中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，包括试剂盒盒体，试剂盒盒体中装有提取剂离心管、分散助提剂离心管、淋洗剂离心管和两支一次性针管式过滤器，提取剂离心管和淋洗剂离心管为具塞螺旋盖锥形底离心管，分散助提剂离心管为具塞螺旋盖平底离心管，第一支一次性针管式过滤器由柱体塞、柱体和针头塞构成，柱体内由上至下装有上挡筛板、双层填料、下挡筛板；第二支一次性针管式过滤器由柱活塞、柱体和针头式过滤器构成,针头式过滤器内有滤膜；所述提取剂离心管中的提取剂和淋洗剂离心管中的淋洗剂为经活性炭重蒸的色谱纯的环己烷，分散助提剂离心管中的分散助提剂为氯化钠和无水硫酸镁的白色粉末混合物，第一支一次性针管式过滤器中的填料为上层无水硫酸钠、下层中性氧化铝，并注入环己烷浸过填料的表面。
[0009]所述提取剂离心管、分散助提剂离心管和淋洗剂离心管为聚丙烯管，所述第一支一次性针管式过滤器和第二支一次性针管式过滤器为聚乙烯管。
[0010]所述提取剂离心管和淋洗剂离心管容量分别为20-50mL。
[0011]所述分散助提剂尚心管的容量为15_20mL。
[0012]所述第一支一次性针管式过滤器的柱体容量为50_70mL，第二支一次性针管式过滤器的柱体容量为10-30mL。
[0013]所述上挡筛板和下挡筛板的筛孔大小为0.15-0.30 μ m。
[0014]所述针头过滤器内有0.3-0.8 μ m的滤膜。
[0015]所述第一支一次性针管式过滤器中的环己烷液面高于上挡筛板5mm。
[0016]本实用新型的有益效果是:
[0017](I)制作过程简单、无污染、室温保存；
[0018](2)前处理过程仅需20分钟左右，快速简易，单份测定，所耗费用低；
[0019](3)提取剂为环己烷溶液，降低了提取溶剂的极性，对中药材中苯并(a)芘具有高选择性提取性，减少了含水类基质提取液中的水含量，减轻了后续的除水压力；
[0020](4)分散助提剂中无水硫酸镁在吸水的同时产热，促进了目标化合物的萃取；，
[0021](5) —次性针管式过滤器中填料对中药材中杂质具有有效的清除能力；
[0022]( 6 )本试剂盒构成简单、合理，经济实惠，有利于推广使用。
【专利附图】
【附图说明】
[0023]图1是本实用新型中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒结构示意图；
[0024]图2是中药材基质样品用本实用新型提供的中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒处理后的空白谱图；
[0025]图3是中药材基质样品用本实用新型提供的苯并(a)芘检测前处理试剂盒处理后的进样分析的2.5 μ g/kg加标HPLC谱图；
[0026]图4是中药材基质样品用本实用新型提供的苯并(a)芘检测前处理试剂盒处理后的进样分析的5.0 μ g/kg加标HPLC谱图；
[0027]图5是苯并(a)芘标准曲线。
【具体实施方式】
[0028]下面结合附图和【具体实施方式】对本实用新型作进一步详细说明:
[0029]如图1所示，本实用新型的中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，试剂盒盒体，试剂盒盒体中装有提取剂离心管1、分散助提剂离心管2、淋洗剂离心管3和两支一次性针管式过滤器，提取剂离心管I和淋洗剂离心管3为具塞螺旋盖锥形底离心管，分散助提剂离心管2为具塞螺旋盖平底离心管,第一支一次性针管式过滤器4由柱体塞、柱体和针头塞构成，柱体内由上至下装有上挡筛板、双层填料、下挡筛板；第二支一次性针管式过滤器5由柱活塞、柱体和针头式过滤器构成，针头式过滤器内有滤膜；所述提取剂离心管I中的提取剂和淋洗剂离心管3中的淋洗剂为经活性炭重蒸的色谱纯的环己烷，分散助提剂离心管2中的分散助提剂为氯化钠和无水硫酸镁的白色粉末混合物，第一支一次性针管式过滤器4中的填料为上层无水硫酸钠、下层中性氧化铝，并注入环己烷浸过填料的表面。
[0030]所述提取剂离心管1、分散助提剂离心管2和淋洗剂离心管3为聚丙烯管，所述第一支一次性针管式过滤器4和第二支一次性针管式过滤器5为聚乙烯管。
[0031]所述提取剂离心管I和淋洗剂离心管3容量分别为20_50mL。
[0032]所述分散助提剂尚心管2的容量为15_20mL。
[0033]所述第一支一次性针管式过滤器4的柱体容量为50_70mL，第二支一次性针管式过滤器5的柱体容量为10-30mL。
[0034]所述上挡筛板和下挡筛板的筛孔大小为0.15-0.30 μ m。
[0035]所述针头过滤器内有0.3-0.8 μ m的滤膜。
[0036]所述第一支一次性针管式过滤器4中的环己烷液面高于上挡筛板5mm。
[0037]为进一步了解本实用新型的技术内容、特征和作用，兹例举以下实施例，并配合附图详细说明如下:
[0038]中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，包括提取剂离心管1、分散助提剂离心管
2、淋洗剂离心管3、装有填料的第一支一次性针管式过滤器4、含滤膜的第二支一次性针管式过滤器5。
[0039]优选的，提取剂和淋洗剂装在50mL具塞螺旋盖聚丙烯锥形底离心管中，分散助提剂装在20mL具塞螺旋盖聚丙烯平底离心管中。
[0040]优选的，提取剂为色谱纯化学试剂，即经活性炭重蒸的环己烷。环己烷在色谱图上出现了大量杂峰且有少量苯并(a)芘，故利用苯并(a)芘能被带正电荷的吸附剂——活性炭吸附的特性，将环己烷中加入活性炭重蒸馏后再使用，试验结果表明效果很好。
[0041]优选的，分散助提剂为氯化钠和无水硫酸镁的白色粉末混合物。
[0042]优选的，第一支一次性针管式过滤器4的柱体容量为70mL。
[0043]进一步地，第一支一次性针管式过滤器4由聚乙烯柱体塞、透明聚乙烯柱体和聚乙烯针头塞构成，聚乙烯柱体内由上至下装有0.22 μ m上挡筛板、双层填料、0.22 μ m下挡筛板。
[0044]进一步地，双层填料上层是氯化钠，下层是IV级中性氧化铝粉末，其活度测定方法参照国家标准GB/T22509-2008《动植物油脂苯并(a)芘的测定反相高效液相色谱法》中附录A0
[0045]优选的，第二支一次性针管式过滤器5的柱体容量为10mL。
[0046]进一步地，针头过滤器内有0.45 μ m的滤膜。
[0047]所述的试剂盒的制备:
[0048]所述的提取剂的制备:配制经活性炭重蒸的环己烷溶液25mL，转移至50mL具塞螺旋盖聚丙烯锥形底离心管中。[0049]所述的分散助提剂的制备:称取2g氯化钠和2g无水硫酸镁充分混合，转移至20mL具塞螺旋盖聚丙烯平底离心管中。
[0050]所述的淋洗剂的制备:配制经活性炭重蒸的环己烷溶液50mL，转移至50mL具塞螺
旋盖聚丙烯锥形底离心管中。
[0051]所述的第一支一次性针管式过滤器制备:一次性针管式过滤器内装有净化填料，净化填料为双层，上层是5g氯化钠，下层是30g IV级中性氧化铝粉末。
[0052]所述的第一支一次性针管式过滤器填装过程:现在柱体底部垫上一层0.22 μ m下挡筛板，加入下层填料和上层填料，在填料上部再盖上一层0.22 μ m上挡筛板，放入环己烧，液面闻于上挡筛板5mm左右。
[0053]所述的第二支一次性针管式过滤器可以把中药材样品溶液过滤后进入分析仪器如液相色谱仪进行测定。
[0054]本实用新型的具体应用实施:
[0055]1、取中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，包括提取剂离心管、分散助提剂离心管、淋洗剂离心管和两支一次性针管式过滤器。
[0056]2、将含苯并(a)芘的中药材粉碎样品和分散助提剂放入提取剂离心管中进行混合，充分振摇获得混合溶液，14000r/min离心3min。取下第一支一次性针管式过滤器的柱体塞和柱头塞，将上清液经过第一支一次性针管式过滤器，淋洗液也经过第一支一次性针管式过滤器自然滴出至锥形瓶中。将混合滤液在45°C水浴中旋转蒸发至干，准确添加ImL乙腈溶解定容，充分混合后经过第二支一次性针管式过滤器过滤后存入进样瓶中，供液相色谱仪进行测定，结果提取回收率达到75.2%-109.1%，符合测定要求。
[0057]3、以空白的中药材基质样品中，添加2.5 μ g/kg和5.0 μ g/kg的苯并(a)花标准溶液，同2项操作，样品溶液注入液相色谱仪进行测定。
[0058]结果见图2至图5，图2是中药材基质样品用本实用新型提供的中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒处理后的空白谱图，图3是中药材基质样品用本实用新型提供的苯并(a)芘检测前处理试剂盒处理后的进样分析的2.5 μ g/kg加标HPLC谱图，图4是中药材基质样品用本实用新型提供的苯并(a)芘检测前处理试剂盒处理后的进样分析的5.0 μ g/kg加标HPLC谱图，图5是苯并(a)芘标准曲线。
[0059]本实用新型提取效率高且可以有效去除杂质，用于快速前处理中药材中苯并(a)芘，经该试剂盒处理后的样品可以直接进行液相色谱仪检测。中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒具有构成合理、制作成本低、操作简单、环境污染小、稳定性好、抗干扰能力强等优点，并能满足减少溶剂使用量和提高提取效率的需求，便于推广。并为进一步整合并最终建立系统的苯并(a)芘测定的仪器分析前处理方法，提供参考和数据积累。
[0060]以上所述的实施例仅用于说明本实用新型的技术思想及特点，其目的在于使本领域内的技术人员能够理解本实用新型的内容并据以实施，不能仅以本实施例来限定本实用新型的专利范围，即凡本实用新型所揭示的精神所作的同等变化或修饰，仍落在本实用新型的专利范围内。
【权利要求】
1.一种中药材中苯并(a)花检测前处理试剂盒，包括试剂盒盒体，其特征在于，试剂盒盒体中装有提取剂离心管(I)、分散助提剂离心管(2)、淋洗剂离心管(3)和两支一次性针管式过滤器，提取剂离心管(I)和淋洗剂离心管(3)为具塞螺旋盖锥形底离心管，分散助提剂离心管(2)为具塞螺旋盖平底离心管，第一支一次性针管式过滤器(4)由柱体塞、柱体和针头塞构成，柱体内由上至下装有上挡筛板、双层填料、下挡筛板；第二支一次性针管式过滤器(5)由柱活塞、柱体和针头式过滤器构成，针头式过滤器内有滤膜；所述提取剂离心管(I)中的提取剂和淋洗剂离心管(3)中的淋洗剂为经活性炭重蒸的色谱纯的环己烷，分散助提剂离心管(2)中的分散助提剂为氯化钠和无水硫酸镁的白色粉末混合物，第一支一次性针管式过滤器(4)中的填料为上层无水硫酸钠、下层中性氧化铝，并注入环己烷浸过填料的表面。
2.根据权利要求1所述的中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，其特征在于，所述提取剂离心管(I)、分散助提剂离心管(2)和淋洗剂离心管(3)为聚丙烯管，所述第一支一次性针管式过滤器(4)和第二支一次性针管式过滤器(5)为聚乙烯管。
3.根据权利要求1所述的中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，其特征在于，所述提取剂离心管(I)和淋洗剂离心管(3)容量分别为20-50mL。
4.根据权利要求3所述的中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，其特征在于，所述分散助提剂离心管(2)的容量为15-20mL。
5.根据权利要求4所述的中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，其特征在于，所述第一支一次性针管式过滤器(4)的柱体容量为50-70mL，第二支一次性针管式过滤器(5)的柱体容量为10-30mL。
6.根据权利要求1或5所述的中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，其特征在于，所述上挡筛板和下挡筛板的筛孔大小为0.15-0.30 μ m。
7.根据权利要求1或5所述的中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，其特征在于，所述一次性针管式过滤器内有0.3-0.8 μ m的滤膜。
8.根据权利要求1所述的中药材中苯并(a)芘检测前处理试剂盒，其特征在于，所述第一支一次性针管式过滤器(4)中的环己烷液面高于上挡筛板5mm。
【文档编号】G01N1/34GK203732332SQ201420040528
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年1月22日 优先权日:2014年1月22日
【发明者】崔颖, 章骅, 肖亚兵, 王伟, 陈文硕 申请人:天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心