一种两步法免疫层析测试装置制造方法
【专利摘要】本实用新型涉及一种两步法免疫层析检测装置，包括层析膜、底板支撑物、吸水垫、过渡垫、样品垫、标记垫、防水隔离层、内部塑料件和外部塑料件，所述层析膜粘附在位于内部塑料件内的底板支撑物上，所述吸水垫粘附在底板支撑物的一端并与层析膜搭接，所述过渡垫粘附在底板支撑物的另一端并与层析膜搭接，所述样品垫和标记垫分别安装在内部塑料件内的上部且二者与过渡垫之间择一通过防水隔离层隔开，所述外部塑料件以滑动配合方式套设于内部塑料件外并暴露出内部塑料件的任一端部。本实用新型操作简单、灵敏度高、反应充分可控、稳定性好、重复性好且易于识别，既可以定性检测，也可以定量检测，有益于人们即使快速床旁诊断。
【专利说明】一种两步法免疫层析测试装置
【技术领域】
[0001 ] 本实用新型涉及一种两步法免疫层析检测装置。
【背景技术】
[0002]传统的侧向层析所用的检测模式包含五个组件，分别为样品垫、标记垫、层析膜、吸水垫以及底板支持物，存在以下缺点:(1)样品滴加到样品垫后通过毛细管虹吸作用层析到标记垫，由于标记抗体是预先干燥固定在标记垫上，因此样品中的检测物是在溶解标记抗体的同时与标记垫上的标记抗体反应形成标记复合物B,但是由于反应不充分,样品与标记抗体反应变成标记复合物B的产率有一个效率问题，同时标记复合物B在层析膜中层析至检测线位置，再与检测线上的抗体反应，形成双抗夹心型复合物C，而且只有形成复合物C才是有效的反应信号，但是标记复合物B和样品未反应的抗原会竞争与检测线上的抗体反应，因此复合物C的形成同样存在结合效率问题。可见复合物C的有效信号是复合物B的效率再乘于复合物B与检测线抗体的反应效率，因此灵敏度低。(2)由于标记抗体是固定在标记垫上，因此当样品溶解标记抗体时，大部分的标记物都随着样品直接冲刷经过层析膜，并无法与检测线上的抗体发生有效反应，因此对复合物C不产生贡献。
实用新型内容
[0003]为了克服现有免疫层析模式存在的缺陷，本实用新型的目的在于提供一种操作简单、易于识别的两步法免疫层析检测装置，既可以定性检测，也可以定量检测。
[0004]为了实现上述目的，本实用新型的技术方案是:一种两步法免疫层析检测装置，包括层析膜、底板支撑物、吸水垫、过渡垫、样品垫、标记垫、防水隔离层、内部塑料件和外部塑料件，所述层析膜粘附在位于内部塑料件内的底板支撑物上，所述吸水垫粘附在底板支撑物的一端并与层析膜搭接，所述过渡垫粘附在底板支撑物的另一端并与层析膜搭接，所述样品垫和标记垫分别安装在内部塑料件内的上部且二者与过渡垫之间择一通过防水隔离层隔开，所述外部塑料件以滑动配合方式套设于内部塑料件外并暴露出内部塑料件的任一端部。
[0005]进一步的，所述防水隔离层在起始靠右位置时隔离标记垫和过渡垫，使得样品垫与过渡垫搭接在一起；所述防水隔离层向左滑动至靠左位置时隔离样品垫和过渡垫，使得标记垫与过渡垫搭接在一起。
[0006]进一步的，所述外部塑料件与防水隔离层相连接，所述外部塑料件在内部塑料件外左右滑动时带动防水隔离层左右滑动，使得样品垫和标记垫交替通过过渡垫与层析膜搭接。
[0007]进一步的，所述内部塑料件上开设有便于向样品垫加入样本的样品加样孔、便于向标记垫加入稀释液的稀释液加样孔以及便于观察层析膜的内观察窗，所述外部塑料件上开设有其左右移动时不会阻挡内观察窗的外观察窗。
[0008]进一步的，所述内部塑料件上开设有便于吸水垫快速吸水的吸水通风孔。[0009]进一步的，所述层析膜上喷涂有至少一条检测线、至少一条质控线和一条指示线，所述检测线上喷涂有对应检测物质的抗原或抗体，所述指示线喷涂在层析膜靠近吸水垫的一端。
[0010]进一步的，所述样品垫为具有样本过滤功能的聚酯膜、玻纤或滤纸，所述标记垫是在标记垫介质上用标记物标记的抗原或抗体喷涂而成。
[0011]进一步的，所述标记垫介质为聚酯膜、玻纤、滤纸或无纺布，所述标记物为胶体金、乳胶、荧光颗粒、量子点或上转换发光物质。
[0012]与现有技术相比，本实用新型具有以下有益效果:(1)在操作过程中检测装置只显示一个加样孔，而且加样孔可以设置提醒信息，反应一步结束后再现出另一个加样孔，操作简单、明了易懂；(2)保留了两步法反应充分的优点，检测灵敏度高，不受“Η00Κ效应”的影响；(3)克服了现有双向层析方法的缺点，使有进入反应系统的样本从一侧反应至另一侦牝所有样本都经过检测线，不同检测线接触样本的机会均等，同时标记物经过检测线的机会均等，因此反应充分可控、特异性强，还具有稳定性好、重复性好的特点；(4)适用于单项检测，尤其适用于多项联合检测，根据标志物不同可直接判读定性检测，也可以借助检测阅读仪器进行定量检测，短时间可快速判读结果，有益于人们即使快速床旁诊断。
[0013]下面结合附图和【具体实施方式】对本实用新型做进一步详细的说明。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1为本实用新型实施例的剖面示意图。
[0015]图2为本实用新型实施例在步骤(I)时的状态示意图。
[0016]图3为本实用新型实施例在步骤(2)时的状态示意图。
[0017]图4为连接板在样品垫和标记垫上面的结构示意图。
[0018]图5为连接板在样品垫和标记垫下面的结构示意图。
[0019]图6为连接板在样品垫和标记垫中间的结构示意图。
[0020]图中:1_层析膜，2-底板支撑物，3-吸水垫，4-过渡垫，5-样品垫，6-标记垫，7-防水隔离层，8-内部塑料件，9-外部塑料件，10-内观察窗，11-样品加样孔，12-稀释液加样孔，13-外观察窗，14-连接板，R-指示线标记，C-质控线标记，Tl、T2、T3、T4、T5、T6-检测线标记，①-步骤(1)，②-步骤(2)。
【具体实施方式】
[0021]如图f 3所示，一种两步法免疫层析检测装置，包括层析膜1、底板支撑物2、吸水垫3、过渡垫4、样品垫5、标记垫6、防水隔离层7、内部塑料件8和外部塑料件9，所述层析膜I粘附在位于内部塑料件8内的底板支撑物2上，所述吸水垫3粘附在底板支撑物2的一端并与层析膜I搭接，所述过渡垫4粘附在底板支撑物2的另一端并与层析膜I搭接，所述样品垫5和标记垫6分别安装在内部塑料件8内的上部且二者与过渡垫4之间择一通过防水隔离层7隔开，所述外部塑料件9以滑动配合方式套设于内部塑料件8外并暴露出内部塑料件8的任一端部。
[0022]在本实施例中，所述防水隔离层7的长度不能同时隔断标记垫6、样品垫5与过渡垫4。不能同时隔断是指当防水隔离层7在起始靠右位置时，只能隔离标记垫6和过渡垫4，而样品垫5与过渡垫4搭接在一起；当防水隔离层7向左滑动至靠左位置时，防水隔离层7将样品垫5和过渡垫4隔离，而标记垫6与过渡垫4搭接在一起。当然，左右方向可以进行调换。
[0023]在本实施例中，所述外部塑料件9与防水隔离层7通过一定方式连接在一起，所述外部塑料件9在内部塑料件8外左右滑动时带动防水隔离层7左右滑动，使得样品垫5和标记垫6交替通过过渡垫4与层析膜I搭接。
[0024]在本实施例中，所述内部塑料件8上开设有便于向样品垫5加入样本的样品加样孔11、便于向标记垫6加入稀释液的稀释液加样孔以及便于观察层析膜I的内观察窗10，所述内部塑料件8上还可以开设有便于吸水垫3快速吸水的吸水通风孔；所述外部塑料件9上开设有尺寸比内观察窗10大的外观察窗13，使其左右移动时也不会阻挡内观察窗10观察层析膜I的结果。
[0025]在本实施例中，所述层析膜I上喷涂有检测线、质控线和指示线。所述检测线包含但不仅限于一条，所述检测线上喷涂有对应检测物质的抗原或抗体(如心肌标记物Troponin 1、MYO、CK-MB的特异抗体或孕激素抗原)，并沿着过渡垫4向吸水垫3纵向均匀分布，每种抗原或抗体喷膜宽度为1-3毫米，每种抗原或抗体之间间隔为2-3毫米。所述质控线包含但不仅限于一条(如羊抗鼠或羊抗兔)。所述指示线包含水溶性染料(如溴甲酚紫、酚红染料)，其喷涂在层析膜I靠近吸水垫3的一端，用于指示样本量是否足够以及样本层析反应时间。
[0026]在本实施例中，所述样品垫5可采用不同介质作为样本过滤器，例如具有样本过滤功能的聚酯膜、玻纤或滤纸等，用于过滤样本的血红细胞、大颗粒物质，此处使用从Ahlstrom Filtration购买的8964玻纤,但并不局限于此。所述标记垫6是在标记垫6介质上用标记物标记的抗原或抗体喷涂而成，所述标记垫6介质可以是但并不局限于聚酯膜、玻纤、滤纸或无纺布，此处使用从Ahlstrom Filtration购买的6613聚酯膜,所述标记物为可用于识别和检测采集信号的物质，例如胶体金、乳胶或荧光颗粒等，此处采用胶体金标记的所要检测物的抗体(如心肌标记物Troponin I >MYO>CK-MB的特异胶体金标记抗体或孕激素胶体金标记抗体)和胶体金标记的免疫蛋白IgG (鼠-1gG胶体金标记抗体或兔-1gG胶体金标记抗体)，此处检测物为心肌标记物Troponin I>MYO>CK-MB或孕激素,但并不局限于此。
[0027]在本实施例中，该两步法免疫层析检测装置可分为检测试纸条的制备和检测装置的组装。该检测试纸条的制备包含层析膜I的制备方法和标记垫6的制备方法，其中标记垫6的制备方法是将胶体金标记的Troponin 1、MY0、CK_MB抗体溶液和鼠-1gG胶体金标记抗体溶液混合后喷涂在聚酯膜上，37度干燥6-12小时后制备成胶体金标记垫6 ;其中层析膜I的制备方法是将抗Troponin 1、MYO、CK-MB抗体、羊抗鼠抗体和溴甲酚紫染料依次按顺序均匀喷涂在层析膜I上，依次按顺序是指沿着过渡垫4向吸水垫3方面依次纵向喷涂高度为I毫米、宽度为4毫米的长条形，质控线位于靠近吸水垫3和层析膜I连接处8毫米处，指示线位于靠近吸水垫3和层析膜I连接处3毫米处，各线间隔为2-3毫米；喷涂后的层析膜I经37度干燥6-12小时后密封保存。
[0028]在本实施例中，该两步法免疫层析检测装置的制备方法如下:将层析膜I粘附在底板支撑物2上，将吸水垫3粘附在底板支撑物2 —端并与层析膜I搭接连通，将过渡垫4粘附在底板支撑物2另一端并与层析膜I搭接连通，将样品垫5和标记垫6固定在内部塑料件8上盖的样品加样孔11和稀释液加样孔12的下方位置，将防水隔离层7与外部塑料件9 一起固定连接，将外部塑料件9套设于内部塑料件8外面，并使得防水隔离层7位于样品垫5、标记垫6与过渡垫4之间。
[0029]在本实施例中，该两步法免疫层析检测装置的使用方法如下:(I)将外部塑料件9推至内部塑料件8右侧齐平，在样品加样孔11内加入80ul的样本，等待2分钟；(2)观察指示线被样本冲洗褪色，将外部塑料件9向内部塑料件8左端滑动到位；(3)加入IOOul的稀释液至稀释液加样孔12，10分钟后观察结果；(4)检测线若出现红色条带，说明样本中所检测物为阳性，若没有出现红色条带，说明样本中不含有检测物或样本中检测物的浓度低于试剂盒检测最低灵敏度，也可通过定量阅读仪进行浓度测定实现试剂盒的定量检测。
[0030]在本实施例中，该两步法免疫层析检测装置的工作原理如下:将外部塑料件9推至内部塑料件8右侧齐平，在样品加样孔11加入样品后，样品在样品垫5的作用下吸入过渡垫4上，并继续层析至层析膜I上，并与层析膜I上的相应抗体进行反应形成抗体-抗原复合物；而此时防水隔离层7在标记垫6和过渡垫4中间，隔离开过渡垫4和标记垫6，使过渡垫4上的溶液无法渗透到标记垫6上；样本浸过层析膜I时会将指示线冲洗褪色，2分钟后反应基本完成，将外部塑料件9向内部塑料件8左端滑动，此时外部塑料件9将加样孔遮挡住并且现出稀释液加样孔12。防水隔离层7在外部塑料件9移动过程中向吸水垫3方向侧移动至样品垫5和过渡垫4之间并将二者隔离开，同时标记垫6和过渡垫4之间由于失去防水隔离层7而连接在一起；当加IOOul的缓冲液至稀释液加样孔12后，稀释液会溶解标记垫6上的胶体金标记物，溶解的标记物会层析至过渡垫4，并继续层析至层析膜I上与抗体-抗原复合物结合反应，形成抗体-抗原-标记抗体双抗体夹心复核结构并显色，胶体金标记的鼠-1gG与层析膜I上的质控线抗体反应并显色，质控线的显色与否可用来判断检测试纸条是否有效，检测线的显色情况可以用来判断样品中是否含有待检测物，而且显色的强度与样本中的检测物浓度呈正相关，通过相应的检测阅读仪可以进行定量检测。
[0031]在本实施例中，所述内部塑料件8在样品加样孔11旁边可标示步骤(I)以及加样量，所述内部塑料件8在稀释液加样孔12旁边可标示步骤(2)以及加入缓冲液量，所述内部塑料件8在加样孔相反侧的一端可标注步骤(I)至(2)方向，包含但不仅限于使用箭头做标示。为了方便制备，所述样品垫5和标记垫6还可以同时通过连接板14粘附在一起，但二者之间不能搭接在一起，如图4飞所示，其中连接板14可以在样品垫5和标记垫6上面，也可以在下面，也可以在样品垫5和标记垫6的中间。
[0032]本实用新型通过样品垫5、吸水垫3、标记垫6与层析膜I的分离设计，具有如下优点:(1)保留了两步法的优点，使反应更加充分，灵敏度更高。(2)有效地解决了现有层析模式容易加错孔的危险。(3)同时将加样口在加完样之后封盖起来，有效地杜绝了污染的风险性。(4)使反应往一个方向进行，可以充分反应，不受到层析膜I长度的限制，同时在滴加稀释液使标记物溶解后，溶解溶液往相同方向层析，可以把膜上的样本推动往吸水垫3方向层析，反应更加完全，灵敏度更高。(5)其防水隔离层7可以有效隔离样品垫5和过渡垫4，使残留在样本垫内的样本不影响到标记物与层析膜I上的复合物反应，定量结果更准确。
[0033]以上所述仅为本实用新型的较佳实施例，凡依本实用新型申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本实用新型的涵盖范围。
【权利要求】
1.一种两步法免疫层析检测装置，其特征在于:包括层析膜、底板支撑物、吸水垫、过渡垫、样品垫、标记垫、防水隔离层、内部塑料件和外部塑料件，所述层析膜粘附在位于内部塑料件内的底板支撑物上，所述吸水垫粘附在底板支撑物的一端并与层析膜搭接，所述过渡垫粘附在底板支撑物的另一端并与层析膜搭接，所述样品垫和标记垫分别安装在内部塑料件内的上部且二者与过渡垫之间择一通过防水隔离层隔开，所述外部塑料件以滑动配合方式套设于内部塑料件外并暴露出内部塑料件的任一端部。
2.根据权利要求1所述的两步法免疫层析检测装置，其特征在于:所述防水隔离层在起始靠右位置时隔离标记垫和过渡垫，使得样品垫与过渡垫搭接在一起；所述防水隔离层向左滑动至靠左位置时隔离样品垫和过渡垫，使得标记垫与过渡垫搭接在一起。
3.根据权利要求2所述的两步法免疫层析检测装置，其特征在于:所述外部塑料件与防水隔离层相连接，所述外部塑料件在内部塑料件外左右滑动时带动防水隔离层左右滑动，使得样品垫和标记垫交替通过过渡垫与层析膜搭接。
4.根据权利要求1所述的两步法免疫层析检测装置，其特征在于:所述内部塑料件上开设有便于向样品垫加入样本的样品加样孔、便于向标记垫加入稀释液的稀释液加样孔以及便于观察层析膜的内观察窗，所述外部塑料件上开设有其左右移动时不会阻挡内观察窗的外观察窗。
5.根据权利要求1或3所述的两步法免疫层析检测装置，其特征在于:所述内部塑料件上开设有便于吸水垫快速吸水的吸水通风孔。
6.根据权利要求1所述的两步法免疫层析检测装置，其特征在于:所述层析膜上喷涂有至少一条检测线、至少一条质控线和一条指示线，所述检测线上喷涂有对应检测物质的抗原或抗体，所述指示线喷涂在层析膜靠近吸水垫的一端。
7.根据权利要求1所述的两步法免疫层析检测装置，其特征在于:所述样品垫为具有样本过滤功能的聚酯膜、玻纤或滤纸，所述标记垫是在标记垫介质上用标记物标记的抗原或抗体喷涂而成。
8.根据权利要求7所述的两步法免疫层析检测装置，其特征在于:所述标记垫介质为聚酯膜、玻纤、滤纸或无纺布，所述标记物为胶体金、乳胶、荧光颗粒、量子点或上转换发光物质。
【文档编号】G01N33/558GK203688562SQ201420045235
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年1月24日 优先权日:2014年1月24日
【发明者】林志铿, 陈波, 周敏 申请人:厦门为正生物科技有限公司