1.一种甘胆酸均相酶免疫诊断试剂的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括甘胆酸抗体溶液的制备、甘胆酸酶偶联物溶液的制备、甘胆酸校准品的制备;
甘胆酸抗体溶液的制备:将甘胆酸抗体加入到Tris-HCl缓冲液中,并加入酶底物6-磷酸葡萄糖、NADP、辅助试剂,混合均匀,即为甘胆酸抗体溶液;
甘胆酸酶偶联物溶液的制备:将甘胆酸加入到MES缓冲液中,加入羧基活化剂进行羧基活化,然后在羧基活化后的甘胆酸中加入6-磷酸葡萄糖脱氢酶进行缩合反应得到甘胆酸酶偶联物粗品,经透析纯化后加入到Tris-HCl缓冲液中,并加入辅助试剂,混合均匀,即为甘胆酸酶偶联物溶液;
甘胆酸校准品的制备:将BSA溶于PBS缓冲液中制成BSA-PBS溶液,再将甘胆酸溶于BSA-PBS溶液中,即为甘胆酸校准品。
2.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫诊断试剂的制备方法,其特征在于,所述甘胆酸抗体溶液中甘胆酸抗体的浓度为0.05-10mg/ml。
3.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫诊断试剂的制备方法,其特征在于,所述甘胆酸酶偶联物浓度为1.0-10.0μg/ml。
4.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫诊断试剂的制备方法,其特征在于,所述羧基活化剂为EDC-NHS。
5.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫诊断试剂的制备方法,其特征在于,所述甘胆酸进行羧基活化的温度为0-37℃,时间为5-60min,pH为5.5-6.5。
6.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫诊断试剂的制备方法,其特征在于,所述缩合反应时加入的6-磷酸葡萄糖脱氢酶与甘胆酸的质量比为1:1000-1000:1。
7.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫诊断试剂的制备 方法,其特征在于,所述透析纯化的透析液为PBS缓冲液,pH为7.4-7.8,温度为0-5℃,透析时间10-20h。
8.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫诊断试剂的制备方法,其特征在于,甘胆酸抗体溶液中所述辅助试剂包括稳定剂、防腐剂,所述稳定剂为BSA、蔗糖、甘露糖、海藻糖、PEG中的一种或多种,所述防腐剂为叠氮化钠。
9.根据权利要求1所述的甘胆酸均相酶免疫诊断试剂的制备方法,其特征在于,甘胆酸酶偶联物溶液中所述辅助试剂包括金属离子化合物、防腐剂,所述金属离子化合物选自含Mg2+、Ba2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+的化合物中的一种或多种,所述防腐剂为叠氮化钠。
10.如权利要求1-9任一权利要求所述的甘胆酸均相酶免疫诊断试剂在人血清中甘胆酸含量体外定量测定中的应用。