一种安胎丸近红外检测质量含量的方法与流程

本发明涉及一种安胎丸检测方法，具体涉及一种安胎丸近红外检测质量含量的方法。

背景技术：

近红外光谱分析技术被广泛称为绿色分析技术，其具有如下独特的优势：分析速度快，分析效率高，分析过程简单却环保、无需样品预处理或少处理。近红外光谱分析法是一种通过建立校正模型对未知样品进行定性或定量分析的间接分析方法，其分析过程主要包括：收集样品、近红外光谱的采集和预处理、校正模型的建立和验证、预测未知样品，定量分析时还包括样品标准值的化学分析。

在中药质量控制及生产应用领域，近红外光谱作为一种在线检测技术应用于指标成分的测定已有相关专利文献，如专利申请号(200710022408.9，200810050095.2和200410090617.3)等，这些专利报道了近红外光谱在中药检测领域的应用，但并没有将所建模型真正应用于安胎丸的质量检测方面。安胎丸由白术、当归、川芎、黄芩、白芍五味药材研制而成的一种复方制剂，主要功效为养血安胎。安胎丸在临床上主要用于妊娠血虚，胎动不安，面色淡黄，不思饮食，神疲乏力等。为确保药品质量，保证药材的有效性，通过要采用hplc对安胎丸中有效成分进行检验，hplc作为一种浓度检测方法，其分析成本高，液相色谱仪价格及日常维护费用贵，分析时间一般比较长，不能及时在线得出检测结果。

技术实现要素：

为了解决现有技术中安胎丸的质量难以控制，不能快速准确得出其有效成分的问题，本发明提供一种安胎丸近红外检测质量含量的方法，可以实时监控安胎丸提取液中有效成分的变化情况，并根据这些情况灵活调整提取方案，从而获得优质的安胎丸提取液。

本发明的目的将通过以下技术方案实现：一种安胎丸近红外检测质量含量的方法，包括以下步骤：

步骤一，将安胎丸用甲醇溶解后，过滤，所得滤液即为供试品溶液；

步骤二，对安胎丸进行近红外光谱检测并通过高效液相色谱测定相应的供试品溶液中有效成分的浓度；

步骤三，选择合理的建模近红外光谱数据区域，建立近红外光谱数据与供试品溶液中有效成分的浓度之间的对应关系；

步骤四，利用建立的对应关系，通过对待测安胎丸进行红外光谱检测，实现对待测安胎丸中有效成分的浓度测定。

优选的，所述的一种安胎丸近红外检测质量含量的方法，所述步骤一中，称取25g剪碎后的安胎丸，置于具塞锥形瓶中，加入25ml甲醇，经过超声处理45min，使安胎丸完全溶解，再补足甲醇因超声的损失量，过0.45μm的微孔滤膜，即得供试品溶液。

优选的，所述的一种安胎丸近红外检测质量含量的方法，所述步骤一中，供试品溶液不止20份，对安胎丸依次进行近红外光谱检测，将安胎丸依次溶解制备供试品溶液，供试品溶液依次进行高效液相色谱检测，所得检测数据用于建立对应关系。

优选的，所述的一种安胎丸近红外检测质量含量的方法，所述步骤二中，采用高效液相色谱测定浓度时，流动相为磷酸溶液和乙腈，磷酸溶液的质量分数为0.1％，采用梯度洗脱的方式，乙腈的浓度随洗脱时间逐步增加，流速0.8ml/min，柱温35℃，进样量10μl，检测波长为280nm。

优选的，所述的一种安胎丸近红外检测质量含量的方法，所述步骤二中，安胎丸进行近红外光谱检测时，以空气为背景，采用漫反射测样方式，波长检测范围为1000～1800nm，扫描次数为32次，分辨率为2nm，每个安胎丸重复扫描3次，得出平均的准确的光谱数据。

优选的，所述的一种安胎丸近红外检测质量含量的方法，所述步骤二中，供试品溶液中有效成分包括阿魏酸、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、洋川芎内酯和白术内酯，通过高效液相色谱检测供试品溶液中相应成分的含量。

优选的，所述的一种安胎丸近红外检测质量含量的方法，所述步骤三中，选择建模近红外光谱数据区域的方法包括全波长、相关系数法、迭代优化对近红外光谱进行波长的选择，以偏最小二乘法对近红外光谱数据与其对应的真实含量值做回归拟合计算，建立校正模型，并采用评价指标考察其稳定性和预测精度。

优选的，所述的一种安胎丸近红外检测质量含量的方法，所述步骤三中，波长选择方法包括全波长、相关系数法、迭代优化对近红外光谱进行波长的选择，以偏最小二乘法对近红外光谱数据与其对应的真实含量值做回归拟合计算，建立校正模型，并采用评价指标考察其稳定性和预测精度。

优选的，所述的一种安胎丸近红外检测质量含量的方法，所述步骤三中，评价指标包括交互验证标准偏差、校正标准偏差、主因子数、决定系数，通过交互验证标准偏差和校正标准偏差优选出最佳模型。

与现有技术相比，本发明的有益效果：本方法建立了近红外光谱法快速测定安胎丸中关键质控指标成分含量的分析方法。在研究中，针对不同的成分优选出最佳的光谱与处理方法，对近红外原始光谱进行预处理，并优选出合适的建模波段，采用偏最小二乘法建立了各指标成分的含量定量分析校正模型。

与hplc法相比较，近红外光谱法操作更为简便、快速，且适合大批量样品的含量测定，能够满足工业化生产中对大规模样品信息采集的需求，对制剂最终产品的稳定性可控具有重要意义。

附图说明

图1为本发明实施例1中阿魏酸的真实值与预测值的关系图；

图2为本发明实施例1中黄芩苷的真实值与预测值的关系图；

图3为本发明实施例1中汉黄芩苷的真实值与预测值的关系图；

图4为本发明实施例1中黄芩素的真实值与预测值的关系图；

图5为本发明实施例1中汉黄芩素的真实值与预测值的关系图；

图6为本发明实施例1中洋川芎内酯的真实值与预测值的关系图；

图7为本发明实施例1中白术内酯的真实值与预测值的关系图。

具体实施方式

为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。

实施例1

实验仪器及试剂：美国戴安高效液相色谱仪ultimate3000(包括梯度泵sr-3000、自动进样器wps-3000、柱恒温系统tcc-3000、紫外检测器dad-3100、色谱工作站变色龙7.2)；xs205dualrange型十万分之一分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)。娃哈哈纯净水(市场购买)，乙腈(色谱纯、德国默克)，甲酸(分析级，广州化学试剂厂)。

标准品溶液的配制：精密称取各标准品于容量瓶中，加适量甲醇溶解配制成混合溶液，其中含阿魏酸0.00306mg/ml、黄芩苷0.10250mg/ml、汉黄芩苷0.01840mg/ml、黄芩素0.064mg/ml、汉黄芩素0.0378mg/ml、洋川芎内脂0.00715mg/ml、白术内酯0.042mg/ml，摇匀。

供试品溶液的制备：取本品一颗安胎丸，剪碎，取约0.25g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入25ml甲醇，密塞，称量，超声处理(功率300w，频率40khz)45min，放冷，再称量，用甲醇补足减失的量，摇匀，过0.45μm的微孔滤膜，即得供试品溶液。重复以上操作，制备出90份的供试品溶液。

标准曲线的绘制：色谱柱diamonsilplusc18-a(250×4.6mm，5μm)；流动相0.1％磷酸溶液(a)：乙腈(b)，梯度洗脱(0～5min，5％～10％b；5～10min，10％～15％b；10～15min，15％～20％b；15～40min，20％～40％b；40～45min，40％～70％b；45～50min，70％～80％b；50～55min，80％～90％b；55～60min，90％～95％b)；流速0.8ml/min；检测波长280nm；柱温35℃；进样量10μl。高效液相色谱测试条件保持一致，不同进样量的标准品进样经hplc检测，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到线性回归方程如下。

表1各成分标准曲线

检测安胎丸的近红外光谱，并将其制备的供试品溶液经hplc检测，根据表1线性拟合方程，计算出对应成分的含量，得出结果如下：

表2安胎丸hplc含量测定结果

光谱预处理方法包括卷积平滑、一阶卷积求导(1d)、二阶卷积求导(2d)、多元散射校正(msc)、标准正态变量变换(snv)、归一化法等。采用多种波长选择方法包括全波长、相关系数法、迭代优化等对光谱进行波长的选择。采用偏最小二乘法对样品的光谱数据与其对应的真实含量值做回归拟合计算，建立校正模型。

采用交互验证标准偏差(secv)、校正标准偏差(sec)、主因子数(lv)、决定系数(r²)等作为模型的评价参数。通过secv和secv优选出每种不同波长选择方法下的模型，最佳模型见下表3。

表3安胎丸供试品溶液中有效成分的最佳模型参数

将检验集样品的近红外光谱图输入校正模型，将校正之后的光谱图与供试品溶液中有效成分的浓度之间建立对应关系，根据对应关系，检测不同待测安胎丸的近红外光谱，预测七种成分的含量，并与高效液相色谱法真实值进行比较，参见图1-7。

通过nir得到的预测值与hplc得到的真实值吻合程度较高，在趋势上基本一致，准确率达90％，说明了本检测方法的可行性和可靠性。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。