测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法与流程

本发明涉及医药领域，具体而言，本发明涉及一种测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法。
背景技术：
：广金钱草总黄酮是一种棕褐色粉末，气微香，味苦，具有清热除湿、利尿排石的功效，可用于治疗湿热蕴结所致的淋漓涩痛、尿路结石等病症。现有文献中，无广金钱草总黄酮中总糖含量测定的相关方法报道，为进一步提升该产品的内控质量标准，提高该产品制剂的产品质量，保证广金钱草总黄酮制剂的含量均一性，达到制剂的质量稳定可控，因此，测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法仍有待研究。技术实现要素：本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法。采用该方法可以快速、准确地测定广金钱草总黄酮中总糖含量。在本发明的第一方面，本发明提出了一种测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：(1)利用水或者乙醇对广金钱草总黄酮进行提取处理，以便得到总糖提取液；(2)向所述总糖提取液中加入4％苯酚试剂和硫酸，以便得到待测液；以及(3)采用紫外分光光度法在487nm的波长下对所述待测液进行检测，以便得到吸光度，并采用标准曲线法计算广金钱草总黄酮中总糖含量。由此，根据本发明实施例的测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法通过利用水或者乙醇对广金钱草总黄酮进行提取处理，得到总糖提取液后，在4％苯酚试剂和硫酸的作用下使总糖提取液中的糖类化合物显色，然后采用紫外分光光度法在测定待测液在487nm处的吸光度，进而采用标准曲线法计算广金钱草总黄酮中总糖含量。采用该方法可以快速、准确地测定广金钱草总黄酮中总糖含量。另外，根据本发明上述实施例的测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法还可以具有如下附加的技术特征：在本发明的一些实施例中，步骤(1)中，将所述广金钱草总黄酮按照质量体积为15～120mg/100ml进行水提取或者乙醇提取。由此，可以有效地对广金钱草总黄酮的糖类化合物进行提取。在本发明的一些实施例中，步骤(1)中，所述乙醇浓度为5～50％，优选5～30％。在本发明的一些实施例中，步骤(1)中，所述提取处理为超声提取或者回流提取，所述提取处理时间为15～150min，优选60～120min。由此，可以显著提高广金钱草总黄酮中糖类化合物的提取率。在本发明的一些实施例中，步骤(1)中进一步包括：(1-1)将所述总糖提取液进行柱色谱纯化处理，以便得到总糖洗脱液；(1-2)将所述总糖洗脱液进行浓缩，其中，色谱柱为聚酰胺柱、d101大孔吸附树脂柱、da-201大孔吸附树脂、ab-8大孔吸附树脂柱、hpd100大孔吸附树脂或x-5大孔吸附树脂。由此，可以显著提高测定得到的总糖含量的准确度。在本发明的一些实施例中，步骤(1-1)中，所述柱色谱纯化处理采用的洗脱液为水和/或乙醇。由此，可以进一步提高测定得到的总糖含量的准确度。在本发明的一些实施例中，步骤(1-1)进一步包括：采用水对所述总糖提取液进行第一柱色谱纯化处理；采用5～30％乙醇对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理。由此，可以进一步提高测定得到的总糖含量的准确度。在本发明的一些实施例中，步骤(1-1)进一步包括：采用水对所述总糖提取液进行第一柱色谱纯化处理；采用5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇中的至少一种对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理。由此，可以进一步提高测定得到的总糖含量的准确度。在本发明的一些实施例中，依次采用5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理。由此，可以进一步提高测定得到的总糖含量的准确度。在本发明的第二方面，本发明提出了一种测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法，包括：(1-1)将所述广金钱草总黄酮与水按照30mg/100ml的质量体积比回流提取60min，以便得到总糖提取液；(1-2)采用d101大孔吸附树脂柱并以水为洗脱液对所述总糖提取液进行第一柱色谱纯化处理；(1-3)依次采用5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理，以便得到总糖洗脱液；(1-4)将所述总糖洗脱液进行浓缩，并用水进行定容，以便得到待测液；以及(1-5)采用紫外分光光度法在487nm的波长下对所述待测液进行检测，以便得到吸光度，并采用标准曲线法计算广金钱草总黄酮中总糖含量。由此，可以采用该方法可以快速、准确地测定广金钱草总黄酮中总糖含量。根据本发明上述实施例的测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法还可以包括：(2-1)将所述广金钱草总黄酮与水按照15mg/100ml的质量体积比回流提取90min，以便得到总糖提取液；(2-2)采用聚酰胺柱并以水为洗脱液对所述总糖提取液进行第一柱色谱纯化处理；(2-3)依次采用5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理，以便得到总糖洗脱液；(2-4)将所述总糖洗脱液进行浓缩，并用水进行定容，以便得到待测液；以及(2-5)采用紫外分光光度法在487nm的波长下对所述待测液进行检测，以便得到吸光度，并采用标准曲线法计算广金钱草总黄酮中总糖含量。由此，可以采用该方法可以快速、准确地测定广金钱草总黄酮中总糖含量。根据本发明上述实施例的测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法还可以包括：(3-1)将所述广金钱草总黄酮与水按照120mg/100ml的质量体积比回流提取120min，以便得到总糖提取液；(3-2)采用ab-8大孔吸附树脂并以水为洗脱液对所述总糖提取液进行第一柱色谱纯化处理；(3-3)依次采用5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理，以便得到总糖洗脱液；(3-4)将所述总糖洗脱液进行浓缩，并用水进行定容，以便得到待测液；以及(3-5)采用紫外分光光度法在487nm的波长下对所述待测液进行检测，以便得到吸光度，并采用标准曲线法计算广金钱草总黄酮中总糖含量。由此，可以采用该方法可以快速、准确地测定广金钱草总黄酮中总糖含量。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。附图说明本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1是根据本发明一个实施例的空白对照的紫外扫描图；图2是根据本发明一个实施例的对照品待测液的紫外扫描图；图3是根据本发明一个实施例的供试品待测液的紫外扫描图。具体实施方式下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。此外，除非另有明确的规定和限定，本申请中描述的“乙醇”的浓度均指体积浓度。在本发明的第一方面，本发明提出了一种测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：(1)利用水或者乙醇对广金钱草总黄酮进行提取处理，以便得到总糖提取液；(2)向所述总糖提取液中加入4％苯酚试剂和硫酸，以便得到待测液；以及(3)采用紫外分光光度法在487nm的波长下对所述待测液进行检测，以便得到吸光度，并采用标准曲线法计算广金钱草总黄酮中总糖含量。由此，根据本发明实施例的测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法通过利用水或者乙醇对广金钱草总黄酮进行提取处理，得到总糖提取液后，在4％苯酚试剂和硫酸的作用下使总糖提取液中的糖类化合物显色，然后采用紫外分光光度法在测定待测液在487nm处的吸光度，进而采用标准曲线法计算广金钱草总黄酮中总糖含量。采用该方法可以有效地除去黄酮苷类和蛋白质类成分的干扰，进而能够显著提高测定广金钱草总黄酮中总糖含量的效率和准确度。根据本发明的具体实施例，步骤(1)中，可以将广金钱草总黄酮按照质量体积为15～120mg/100ml进行水提取或者乙醇提取。发明人通过实验发现，基于15～120mg的广金钱草总黄酮，采用100ml的水或乙醇作为提取液进行提取，可以将广金钱草总黄酮中的糖类化合物充分提取到提取液中。根据本发明的具体实施例，步骤(1)中，可以采用5～30％浓度的乙醇提取广金钱草总黄酮中的糖类化合物。根据本发明的具体实施例，步骤(1)中，提取处理的方式可以为超声提取或者回流提取，提取处理的时间可以为15～150min，优选60～120min。由此，可以显著提高广金钱草总黄酮中糖类化合物的提取率。根据本发明的具体实施例，步骤(1)中，步骤(1)中进一步包括：(1-1)将总糖提取液进行柱色谱纯化处理，以便得到总糖洗脱液；(1-2)将总糖洗脱液进行浓缩，其中，色谱柱为聚酰胺柱、d101大孔吸附树脂柱、da-201大孔吸附树脂、ab-8大孔吸附树脂柱、hpd100大孔吸附树脂或x-5大孔吸附树脂。发明人通过大量实验意外地发现，广金钱草总黄酮中的黄酮苷类、蛋白质类成分对后续紫外分光光度法测定总糖含量具有较大干扰，采用柱色谱法对总糖提取液进行纯化处理，可以有效地将总糖提取液中的黄酮苷类、蛋白质类成分分离除去，避免其对测定结果产生影响，从而提高测定结果的准确度。根据本发明的具体示例，发明人发现，采用d101大孔吸附树脂柱、聚酰胺柱、ab-8大孔吸附树脂柱可以显著提高总糖洗脱液的纯度，有效分离广金钱草总黄酮中的黄酮苷类、蛋白质类成分，进而提高广金钱草总黄酮中总糖含量测定的准确度。根据本发明的具体实施例，步骤(1-1)中，柱色谱纯化处理采用的洗脱液可以为水和/或乙醇。由此，可以将总糖提取液中的糖类化合物充分洗脱，从而避免柱色谱纯化处理过程中糖类化合物的损失，进而提高后续测定结果的准确度。根据本发明的具体实施例，步骤(1-1)进一步包括：采用水对总糖提取液进行第一柱色谱纯化处理；采用5～30％乙醇对总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理。由此，可以显著提高对总糖提取液中糖类化合物的洗脱效率的同时，不会将黄酮苷类、蛋白质类成分洗脱至洗脱液中，从而提高后续测定结果的准确度。根据本发明的具体实施例，步骤(1-1)进一步包括：采用水对所述总糖提取液进行第一柱色谱纯化处理；采用5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇中的至少一种对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理。由此，可以显著提高对总糖提取液中糖类化合物的洗脱效率的同时，不会将黄酮苷类、蛋白质类成分洗脱至洗脱液中，从而提高后续测定结果的准确度。根据本发明的具体实施例，依次采用5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理，洗脱效果最佳。发明人发现，若继续采用更高浓度的乙醇进行洗脱，测定结果中在272nm处出现了干扰峰，严重影响总糖含量的测定准确度，经确定该干扰峰为黄酮类物质。所以确定依次采用5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理分离效果最佳。在本发明的第二方面，本发明提出了一种测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法，包括：(1-1)将所述广金钱草总黄酮与水按照30mg/100ml的质量体积比回流提取60min，以便得到总糖提取液；(1-2)采用d101大孔吸附树脂柱并以水为洗脱液对所述总糖提取液进行第一柱色谱纯化处理；(1-3)依次采用5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理，以便得到总糖洗脱液；(1-4)将所述总糖洗脱液进行浓缩，并用水进行定容，以便得到待测液；以及(1-5)采用紫外分光光度法在487nm的波长下对所述待测液进行检测，以便得到吸光度，并采用标准曲线法计算广金钱草总黄酮中总糖含量。由此，可以采用该方法可以快速、准确地测定广金钱草总黄酮中总糖含量。根据本发明上述实施例的测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法还可以包括：(2-1)将所述广金钱草总黄酮与水按照15mg/100ml的质量体积比回流提取90min，以便得到总糖提取液；(2-2)采用聚酰胺柱并以水为洗脱液对所述总糖提取液进行第一柱色谱纯化处理；(2-3)依次采用5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理，以便得到总糖洗脱液；(2-4)将所述总糖洗脱液进行浓缩，并用水进行定容，以便得到待测液；以及(2-5)采用紫外分光光度法在487nm的波长下对所述待测液进行检测，以便得到吸光度，并采用标准曲线法计算广金钱草总黄酮中总糖含量。由此，可以采用该方法可以快速、准确地测定广金钱草总黄酮中总糖含量。根据本发明上述实施例的测定广金钱草总黄酮中总糖含量的方法还可以包括：(3-1)将所述广金钱草总黄酮与水按照120mg/100ml的质量体积比回流提取120min，以便得到总糖提取液；(3-2)采用ab-8大孔吸附树脂并以水为洗脱液对所述总糖提取液进行第一柱色谱纯化处理；(3-3)依次采用5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇对所述总糖提取液进行第二柱色谱纯化处理，以便得到总糖洗脱液；(3-4)将所述总糖洗脱液进行浓缩，并用水进行定容，以便得到待测液；以及(3-5)采用紫外分光光度法在487nm的波长下对所述待测液进行检测，以便得到吸光度，并采用标准曲线法计算广金钱草总黄酮中总糖含量。由此，可以采用该方法可以快速、准确地测定广金钱草总黄酮中总糖含量。下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。一般方法仪器：uv-2600紫外分光光度计(岛津)、gzx-9240mbe电热鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司以聊设备厂)、ms204s电子天平(mettlertoledo)、ag135电子天平(mettlertoledo)。试剂：d-无水葡萄糖对照品(中国食品药品检定所，批号110833-201205)、d101大孔吸附树脂(国药集团化学试剂有限公司)、ab-8大孔吸附树脂(天津兴南允能高分子技术有限公司)、聚酰胺树脂(国药集团化学试剂有限公司)、hpd100大孔吸附树脂(天津浩聚树脂科技有限公司)、x-5大孔吸附树脂(天津浩聚树脂科技有限公司)、da-201大孔吸附树脂(天津浩聚树脂科技有限公司)、苯酚(国药集团化学试剂有限公司，批号20150108)、硫酸(国药集团化学试剂有限公司，批号20141224)、广金钱草总黄酮(武汉康乐药业股份有限公司，批号140501-140508、140601-140607)。按照下列步骤测定广金钱草总黄酮中总糖含量：(1)精密称取d-无水葡萄糖对照品60.21mg，置于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，以便得到储备液；精密量取20ml储备液，置于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，以便得到对照品溶液；(2)对广金钱草总黄酮进行前处理，以便得到供试品溶液；(3)精密量取对照品溶液0.0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8ml分别置于具塞试管中，精密加水至2ml，计算各对照品溶液中d-无水葡萄糖对照品的浓度；依次向试管中加入4％苯酚水溶液1.0ml和硫酸7.0ml，混匀，将具塞试管依次置于40摄氏度水浴中保温20min，置于冰水浴中保温10min后，在室温下放置20min，以便得到对照品待测液；(4)按照《中国药典》2015版四部(通则0401)所述的紫外-可见分光光度法，以2.0ml水为空白对照，测定487nm处对照品待测液的吸光度，以测得的吸光度值为纵坐标，各对照品溶液中d-无水葡萄糖对照品的浓度为横坐标作图，以便得到标准曲线和回归方程；(5)精密量取供试品溶液2.0ml置于具塞试管中，依次向试管中加入4％苯酚水溶液1.0ml和硫酸7.0ml，混匀，将具塞试管依次置于40摄氏度水浴中保温20min，置于冰水浴中保温10min后，在室温下放置20min，以便得到供试品待测液；(6)按照《中国药典》2015版四部(通则0401)所述的紫外-可见分光光度法，以2.0ml水为空白对照，测定487nm处供试品待测液的吸光度，将测得的吸光度值带入步骤(4)得到的回归方程，以便得到广金钱草总黄酮中的总糖含量。实施例1按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮40mg，精密加入水100ml，称定重量，超声处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，以便得到供试品溶液。实施例2按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮40mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，以便得到供试品溶液。实施例3按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮40mg，精密加入10％乙醇100ml，称定重量，超声处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，以便得到供试品溶液。实施例4按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮40mg，精密加入10％乙醇100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，以便得到供试品溶液。实施例5按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮40mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理15min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，以便得到供试品溶液。实施例6按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮40mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理30min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，以便得到供试品溶液。实施例7按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮40mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，以便得到供试品溶液。实施例8按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮40mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理90min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，以便得到供试品溶液。实施例9按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮40mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理120min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，以便得到供试品溶液。实施例10按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮40mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理150min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，以便得到供试品溶液。实施例11按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过聚酰胺柱，以水洗脱，收集洗脱液50ml，以便得到供试品溶液。实施例12按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过d101大孔吸附树脂柱，以水洗脱，收集洗脱液50ml，以便得到供试品溶液。实施例13按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过da-201大孔吸附树脂柱，以水洗脱，收集洗脱液50ml，以便得到供试品溶液。实施例14按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过ab-8大孔吸附树脂柱，以水洗脱，收集洗脱液50ml，以便得到供试品溶液。实施例15按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过hpd100大孔吸附树脂柱，以水洗脱，收集洗脱液50ml，以便得到供试品溶液。实施例16按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过x-5大孔吸附树脂柱，以水洗脱，收集洗脱液50ml，以便得到供试品溶液。实施例17按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过d101大孔吸附树脂柱，依次以水和5％乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液各50ml，合并浓缩后用水定容至50ml，以便得到供试品溶液。实施例18按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过d101大孔吸附树脂柱，依次以水、5％乙醇、10％乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液各50ml，合并浓缩后用水定容至50ml，以便得到供试品溶液。实施例19按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过d101大孔吸附树脂柱，依次以水、5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液各50ml，合并浓缩后用水定容至50ml，以便得到供试品溶液。实施例20按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过d101大孔吸附树脂柱，依次以水、5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液各50ml，合并浓缩后用水定容至50ml，以便得到供试品溶液。实施例21按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过d101大孔吸附树脂柱，依次以水、5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液各50ml，合并浓缩后用水定容至50ml，以便得到供试品溶液。实施例22按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过d101大孔吸附树脂柱，依次以水、5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、40％乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液各50ml，合并浓缩后用水定容至50ml，以便得到供试品溶液。实施例23按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过d101大孔吸附树脂柱，依次以水、5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、40％乙醇、50％乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液各50ml，合并浓缩后用水定容至50ml，以便得到供试品溶液。实施例24按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过d101大孔吸附树脂柱，依次以水、5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、40％乙醇、50％乙醇、95％乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液各50ml，合并浓缩后用水定容至50ml，以便得到供试品溶液。实施例25按照一般方法的描述测定广金钱草总黄酮中总糖含量，其中，步骤(2)中按照下列方法对广金钱草总黄酮进行前处理：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过d101大孔吸附树脂柱，以95％乙醇洗脱，收集洗脱液50ml，以便得到供试品溶液。在实施例1-25中，发明人考察了广金钱草总黄酮中糖类化合物的提取工艺，然后按照一般方法中测定方法的描述，分别测定实施例1-25中处理得到的供试品溶液，各种提取工艺最终测得的广金钱草总黄酮中总糖含量，结果如下表1所示：表1优选方法通过实施例1-25筛选优化得到了较优的提取广金钱草总黄酮中总含糖量的方法，并按照该方法提取广金钱草总黄酮中总糖，进行测定：(1)提取广金钱草总黄酮中总糖：精密称取广金钱草总黄酮30mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理60min，用水补足重量损失，用脱脂棉过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过d101大孔吸附树脂柱，依次以水、5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇洗脱各洗脱50ml，收集合并洗脱液，浓缩至适量(挥发净乙醇)，用水定容至50ml，以便得到供试品溶液。(2)配制对照品溶液：精密称取d-无水葡萄糖对照品60.21mg，置于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，以便得到储备液；精密量取20ml储备液，置于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，以便得到对照品溶液；(3)标准曲线制备：精密量取对照品溶液0.0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8ml分别置于具塞试管中，精密加水至2ml，计算各对照品溶液中d-无水葡萄糖对照品的浓度；依次向试管中加入4％苯酚水溶液1.0ml和硫酸7.0ml，混匀，将具塞试管依次置于40摄氏度水浴中保温20min，置于冰水浴中保温10min后，在室温下放置20min，以便得到对照品待测液。按照《中国药典》2015版四部(通则0401)所述的紫外-可见分光光度法，以2.0ml水为空白对照，测定487nm处对照品待测液的吸光度，以测得的吸光度值为纵坐标，各对照品溶液中d-无水葡萄糖对照品的浓度为横坐标作图，以便得到标准曲线和回归方程；(5)供试品溶液显色和测定：精密量取供试品溶液2.0ml置于具塞试管中，依次向试管中加入4％苯酚水溶液1.0ml和硫酸7.0ml，混匀，将具塞试管依次置于40摄氏度水浴中保温20min，置于冰水浴中保温10min后，在室温下放置20min，以便得到供试品待测液。按照《中国药典》2015版四部(通则0401)所述的紫外-可见分光光度法，以2.0ml水为空白对照，测定487nm处供试品待测液的吸光度，将测得的吸光度值代入步骤(4)得到的回归方程，以便得到广金钱草总黄酮中的总糖含量。下面对上述优选方法进行方法学考察，具体考察该方法的精密度、重复性、准确度和供试品待测液稳定性。实施例26按照下列方法确定紫外分光光度法的检测波长：(1)按照优选方法的描述，制备得到对照品待测液和供试品待测液；(2)按照《中国药典》2015版四部(通则0401)所述的紫外-可见分光光度法，以2.0ml水为空白对照，在190～800nm波长处扫描，得到空白对照的紫外扫描图如图1所示，对照品待测液的紫外扫描图如图2所示、供试品待测液的紫外扫描图如图3所示。从紫外扫描图可以看出，对照品待测液和供试品待测液均在487nm处有最大吸收峰，且空白对照在487nm处无干扰，故以487nm作为紫外分光光度法的检测波长。实施例27按照下列方法制备标准曲线：(1)精密称取d-无水葡萄糖对照品60.21mg，置于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，以便得到储备液；精密量取20ml储备液，置于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，以便得到对照品溶液；(2)精密量取对照品溶液0.0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8ml分别置于具塞试管中，精密加水至2ml，其中各对照品溶液中d-无水葡萄糖对照品的浓度分别为0.00μg/ml、2.396μg/ml、7.189μg/ml、11.982μg/ml、16.774μg/ml、21.567μg/ml；依次向试管中加入4％苯酚水溶液1.0ml和硫酸7.0ml，混匀，将具塞试管依次置于40摄氏度水浴中保温20min，置于冰水浴中保温10min后，在室温下放置20min，以便得到对照品待测液；(4)按照《中国药典》2015版四部(通则0401)所述的紫外-可见分光光度法，以2.0ml水为空白对照，测定487nm处对照品待测液的吸光度，以测得的吸光度值为纵坐标，各对照品溶液中d-无水葡萄糖对照品的浓度为横坐标作图，以便得到标准曲线和回归方程；结果如下表所示：表2总糖标准曲线数据实施例28按照下列方法考察测定方法的精密度：取同一批号的广金钱草总黄酮(批号：140504)，按照优选方法的描述，连续测定6次供试品待测液的吸光度，结果如下表所示：表3精密度考查数据次数123456平均值相对标准偏差(％)吸光度0.4860.4850.4850.4840.4840.4840.4850.17结果表明，测定方法的精密度良好。实施例29按照下列方法考察测定方法的重复性：取同一批号的广金钱草总黄酮(批号：140504)，按照优选方法的描述，制备6份供试品待测液，并平行各供试品待测液中总糖含量，结果如下表所示：表4重复性实验数据结果表明，测定方法的重复性良好。实施例30按照下列方法考察供试品待测液的稳定性：取同一批号的广金钱草总黄酮(批号：140504)，按照优选方法的描述，制备得到供试品待测液，并分别在制备得到供试品待测液后的0、15、30、60、120、180、240min后，测定其吸光度，结果如下表所示：表5稳定性实验数据结果表明，供试品待测液在放置0～4小时时间内的吸光度几乎无变化，供试品待测液的稳定性良好。实施例31按照下列方法考察测定方法的准确度：取同一批号的广金钱草总黄酮(批号：140504)9份，每份约15mg，分为3组，每组3份，按照优选方法的描述测定9份广金钱草总黄酮中的总糖含量，然后分别向每组待测样品中加入总糖含量50％、100％、150％的d-无水葡萄糖对照品，再按照优选方法的描述分别测定其中的总糖含量，结果如下表所示：表6准确度实验数据结果表明，测定方法的回收率高，准确度良好。结论：通过对上述优选方法的精密度、重复性、准确度和供试品待测液稳定性的考察，结果证实该优选方法具有良好的精密度、重复性、准确度，且供试品待测液稳定性良好。实施例32按照优选方法的描述测定不同批号广金钱草总黄酮中总糖含量，结果如下表所示：表7十五批广金钱草总黄酮总糖含量测定结果根据对以上15批广金钱草总黄酮样品的测定结果表明，不同批号的广金钱草总黄酮中总糖含量均不低于9.0％。实施例33：优选方法2提取广金钱草总黄酮中总含糖量的方法，并按照该方法提取广金钱草总黄酮中总糖，进行测定：(1)提取广金钱草总黄酮中总糖：精密称取广金钱草总黄酮15mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理90min，用水补足重量损失，用脱脂棉过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过聚酰胺柱，依次以水、5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇洗脱各洗脱50ml，收集合并洗脱液，浓缩至适量(挥发净乙醇)，用水定容至50ml，以便得到供试品溶液。(2)配制对照品溶液：精密称取d-无水葡萄糖对照品60.21mg，置于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，以便得到储备液；精密量取20ml储备液，置于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，以便得到对照品溶液；(3)标准曲线制备：精密量取对照品溶液0.0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8ml分别置于具塞试管中，精密加水至2ml，计算各对照品溶液中d-无水葡萄糖对照品的浓度；依次向试管中加入4％苯酚水溶液1.0ml和硫酸7.0ml，混匀，将具塞试管依次置于40摄氏度水浴中保温20min，置于冰水浴中保温10min后，在室温下放置20min，以便得到对照品待测液。按照《中国药典》2015版四部(通则0401)所述的紫外-可见分光光度法，以2.0ml水为空白对照，测定487nm处对照品待测液的吸光度，以测得的吸光度值为纵坐标，各对照品溶液中d-无水葡萄糖对照品的浓度为横坐标作图，以便得到标准曲线和回归方程；(5)供试品溶液显色和测定：精密量取供试品溶液2.0ml置于具塞试管中，依次向试管中加入4％苯酚水溶液1.0ml和硫酸7.0ml，混匀，将具塞试管依次置于40摄氏度水浴中保温20min，置于冰水浴中保温10min后，在室温下放置20min，以便得到供试品待测液。按照《中国药典》2015版四部(通则0401)所述的紫外-可见分光光度法，以2.0ml水为空白对照，测定487nm处供试品待测液的吸光度，将测得的吸光度值代入步骤(4)得到的回归方程，以便得到广金钱草总黄酮中的总糖含量。结果：本发明优选方法2所述的方法，具有良好的精密度、重复性、准确度，且供试品待测液稳定性良好。实施例34：优选方法3提取广金钱草总黄酮中总含糖量的方法，并按照该方法提取广金钱草总黄酮中总糖，进行测定：(1)提取广金钱草总黄酮中总糖：精密称取广金钱草总黄酮120mg，精密加入水100ml，称定重量，回流处理120min，用水补足重量损失，用脱脂棉过滤除去滤渣，将滤液蒸至近干，通过ab-8大孔吸附树脂，依次以水、5％乙醇、10％乙醇、15％乙醇洗脱各洗脱50ml，收集合并洗脱液，浓缩至适量(挥发净乙醇)，用水定容至50ml，以便得到供试品溶液。(2)配制对照品溶液：精密称取d-无水葡萄糖对照品60.21mg，置于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，以便得到储备液；精密量取20ml储备液，置于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，以便得到对照品溶液；(3)标准曲线制备：精密量取对照品溶液0.0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8ml分别置于具塞试管中，精密加水至2ml，计算各对照品溶液中d-无水葡萄糖对照品的浓度；依次向试管中加入4％苯酚水溶液1.0ml和硫酸7.0ml，混匀，将具塞试管依次置于40摄氏度水浴中保温20min，置于冰水浴中保温10min后，在室温下放置20min，以便得到对照品待测液。按照《中国药典》2015版四部(通则0401)所述的紫外-可见分光光度法，以2.0ml水为空白对照，测定487nm处对照品待测液的吸光度，以测得的吸光度值为纵坐标，各对照品溶液中d-无水葡萄糖对照品的浓度为横坐标作图，以便得到标准曲线和回归方程；(5)供试品溶液显色和测定：精密量取供试品溶液2.0ml置于具塞试管中，依次向试管中加入4％苯酚水溶液1.0ml和硫酸7.0ml，混匀，将具塞试管依次置于40摄氏度水浴中保温20min，置于冰水浴中保温10min后，在室温下放置20min，以便得到供试品待测液。按照《中国药典》2015版四部(通则0401)所述的紫外-可见分光光度法，以2.0ml水为空白对照，测定487nm处供试品待测液的吸光度，将测得的吸光度值代入步骤(4)得到的回归方程，以便得到广金钱草总黄酮中的总糖含量。结果：本发明优选方法3所述的方法，具有良好的精密度、重复性、准确度，且供试品待测液稳定性良好。在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。当前第1页12