一种基于photoshop软件测量微球直径方法与流程

本发明涉及微球测量领域，特别是一种基于photoshop软件测量微球直径方法。

背景技术

微球(microsphere)是指药物分子分散或被吸附在高分子聚合物载体中而形成的微粒分散系统，其微粒大小0.01～300μm，制剂多为冻干或流动性灭菌粉末、混悬剂。可供注射、口服、滴鼻、皮下埋植或关节腔给药。微球的粒径分布,直接影响着其对不同靶器官血管口径的适应性。微球作为一种缓控释制剂，其直径是影响药物制剂质量的重要因素，因此找到一个准确快速测量微球直径的方法尤其重要。传统的微球直径测量方法有正切机构式的微测力比较装置、显微计数法、电镜扫描法、激光粒度分析仪等，前两种方法操作较为复杂且精密度不高，而电镜扫描法、激光粒度分析仪成本较高，保养困难，不能满足基础实验室的要求。具体地，传统测微球直径中正切机构式的微测力比较装置测量球径有测量范围大、分辨力高、调校方法简单易掌握的特点，但此方法的测量精度易受周围环境(如震动，温度，尤其是气流抖动)的影响，对操作者的要求较高，现在基本已经不用了。显微计数法操作比较虽然比较简单，但因数目过多，人眼容易疲劳，不合适测量多批微球的直径。电镜扫描法相对前两种方法来说快速简便，准确度也高，但因扫描电子显微镜价格较贵，且保养要求较高，不适合做工艺考察多批量测量微球粒径，故应用并不广泛。而激光粒度分布仪法应用较多，但有时检测后会出现多种波峰状态，部分粒度分布图中出现了双峰、多峰、宽峰等现象，检测结果差异大，给微球真实直径的判断造成困扰，且一旦样品池被污染，清洁非常麻烦。

综上所述，目前的微球直径测量方法具有繁琐耗时和测量费用高的缺点。

技术实现要素：

本发明的目的在于，提供一种基于photoshop软件测量微球直径方法。本发明具有测量方法快速简便、设备要求低和测量准确的特点。

本发明的技术方案：一种基于photoshop软件测量微球直径方法，包括下述步骤：

a.拍摄微球照片：将待测量的微球分散均匀，然后置于装有网形目镜尺的显微镜下放大拍照，得到微球照片；

b.对微球计数：使用photoshop软件打开微球照片，在计数模式下标记微球照片中的微球数目；

c.设置测量比例：在photoshop软件中测量微球照片中网形目镜尺的单位长度的像素长度；将像素长度的值输入photoshop软件“设置测量比例”项下“像素长度”的空格栏中；将单位长度的值输入photoshop软件“设置测量比例”项下“逻辑长度”的空格栏中；之后photoshop软件自动运算出测量比例；

d.测量：设置测量比例后，在photoshop软件中测量已标记微球数目的微球直径。

前述的基于photoshop软件测量微球直径方法所述的步骤a中，所述的将待测量的微球分散均匀，是使用水将将待测量的微球分散均匀。

前述的基于photoshop软件测量微球直径方法所述的步骤b的对微球计数具体是，使用photoshop软件打开微球照片，选择photoshop软件中“分析栏”项下“记数工具”选项并打钩，放大图片，在计数模式下标记微球照片中的微球数目；

前述的基于photoshop软件测量微球直径方法所述的步骤d的测量具体是，设置测量比例后，在photoshop软件中按微球数目的顺序依次拖动鼠标测量已标记微球数目的微球直径，并选择photoshop软件中“分析栏”项的“测量记录”选项并打钩，每测一个微球就点一下测量记录，直到测量完已标记微球数目的微球直径。

有益效果

与现有技术相比，本发明采用光学显微镜结合数码拍摄，再应用photoshop软件的的计数工具和标尺工具对微球直径进行测量，该方法测量准确、快速简便，且对设备要求不高，除此外，本发明测量操作简单，形象直观易于掌握能满足基础实验室的需要，对微球的直径测量提供了一种行之有效的方法。

为了验证本发明的有益效果，申请人通过下述三种方法对三七总皂苷白蛋白微球(pns-bsa-ms)的微球直径进行测量：

方法1：本发明测量方法；

方法2：olympusbx41显微镜验证；

方法3：激光粒度分布仪验证；

方法1的具体步骤如下：

a.拍摄微球照片：将待测量的三七总皂苷白蛋白微球置于载玻片上，使用蒸馏水分散均匀，盖上盖玻片制备成玻片，然后将置于玻片装有c2型网形目镜尺的光学显微镜(型号ub102ibiologicalmicroscope)下放大拍照(放大倍数为100^x)，得到微球照片；所述的c2型网形目镜尺为上海宇隆仪器有限公司制造

b.对微球计数：使用photoshop软件打开微球照片，选择photoshop软件中“分析栏”项下“记数工具”选项并打钩，放大图片，在计数模式下标记出200个微球(微球数目为200，如图1所示)；

c.设置测量比例：在photoshop软件中选择分析栏”项下“标尺工具”(如图2所示)，在标尺工具状态下测量微球照片中网形目镜尺1000μm(单位长度为1000μm)的像素长度(本例中测得的像素长度为295)；将像素长度的值输入photoshop软件“设置测量比例”项下“像素长度”的空格栏中；将单位长度的值输入photoshop软件“设置测量比例”项下“逻辑长度”的空格栏中(如图3所示)；由photoshop软件自动运算出测量比例；

d.测量：设置测量比例后，在photoshop软件中按微球数目的顺序依次拖动鼠标测量已标记微球数目的微球直径，并选择photoshop软件中“分析栏”项的“测量记录”选项并打钩，每测一个微球就点一下测量记录，直到测量完已标记微球数目的微球直径(如图4所示)。

测完的数据可全部选中导出为txt工作簿，然后把txt工作簿里的内容复制到excel文档中，选择“长度”数据列，复制到新的excel文档中，再通过excel软件自带的函数计算出200个微球的平均直径和标准偏差，并绘出直径分布图(如图5所示)，pns-bsa-ms微球直径分布表见表1，表1为方法1测定pns-bsa-ms微球直径分布表。

表1

方法1测得的微球直径均值为30.62μm，直径主要分布在20-40μm之间。

方法2的具体步骤是应用olympusbx41显微镜，olympusdp72显像系统通过dp2-bsw软件对200个微球的数值进行测量，同时对选定的10个微球的直径进行测量，并与ps法进行对比(如图6所示)。结果见表2、表3，表2是方法2测定pns-bsa-ms微球直径分布表，表3是方法1和方法2测量相同10个微球直径比较。结果发现两种方法所测量的相同10个微球的直径数值非常接近，平均标准偏差为1.11，表明两种方法测量的结果误差在一定范围内，说明本发明有效可行。

表2

表3

方法3的具体步骤是采用激光粒度分布仪测量同一批微球：将样品配制成一定浓度的水溶液，加入到激光粒度分布仪样品池中，当光学浓度达到仪器最低浓度要求时，开始检测，得出聚合物微球粒径及分布。粒径分布图见图7。激光粒度分布仪测出的结果与本发明所测量的微球平均粒径数值非常接近，为30.18μm。表明两种方法测量的结果误差在一定范围内，说明本发明有效可行。

综上所述，本发明具有测量方法快速简便、设备要求低和测量准确的特点。

附图说明

图1是方法1中在计数模式下数出200个微球图；

图2是photoshop软件中选择标尺工具界面图；

图3是photoshop软件中输入测量比例界面图；

图4是方法1测得的200个微球图中部分微球的直径；

图5是方法1测得的微球直径分布图；

图6是方法2的部分微球直径测量图；

图7是激光粒径分布仪粒径分布图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。

实施例1。一种基于photoshop软件测量微球直径方法,包括下述步骤：

a.拍摄微球照片：将待测量的微球分散均匀，然后置于装有网形目镜尺的显微镜下放大拍照，得到微球照片；

b.对微球计数：使用photoshop软件打开微球照片，在计数模式下标记微球照片中的微球数目；

c.设置测量比例：在photoshop软件中测量微球照片中网形目镜尺的单位长度的像素长度；将像素长度的值输入photoshop软件“设置测量比例”项下“像素长度”的空格栏中；将单位长度的值输入photoshop软件“设置测量比例”项下“逻辑长度”的空格栏中；之后photoshop软件自动运算出测量比例；

d.测量：设置测量比例后，在photoshop软件中测量已标记微球数目的微球直径。

前述的步骤a中，所述的将待测量的微球分散均匀，是使用水将将待测量的微球分散均匀。

前述的步骤b的对微球计数具体是，使用photoshop软件打开微球照片，选择photoshop软件中“分析栏”项下“记数工具”选项并打钩，放大图片，在计数模式下标记微球照片中的微球数目；

前述的步骤d的测量具体是，设置测量比例后，在photoshop软件中按微球数目的顺序依次拖动鼠标测量已标记微球数目的微球直径，并选择photoshop软件中“分析栏”项的“测量记录”选项并打钩，每测一个微球就点一下测量记录，直到测量完已标记微球数目的微球直径。