本发明属于烟叶成熟度检测技术领域，具体涉及一种基于鲜烟叶切片观察统计的烤烟成熟度判定方法。
背景技术：
烟叶的成熟度是影响烤烟内在质量，外观商品等级、加工时的物理性状和烟叶香吃味等实用价值的重要因素。烤后烟叶的光泽、香吃味、组织结构等都与烟叶的成熟度有着密不可分的联系，成熟度对烟叶的外观质量与品质至关重要。在烘烤中，欠熟叶热反应灵敏，遇热收缩快，不易烘烤；过熟叶细胞解体过早，两者都不能保证烘烤过程中进行的充分而完善的生化变化；成熟叶热反应迟钝，原生质凝固慢，烤后有纹理，因而烘烤质量高。因此在烤烟适度成熟的时候进行采收是保证烤烟品质的关键。
但是现有的烟叶成熟度判断通常是以经验为主，烟农主要根据烟叶颜色变黄程度、茎叶角度、叶尖叶缘变化等外观特征来判断烟叶的成熟度然后进行采收，但当前生产中普遍存在下部叶采收过迟，中上部叶采收过早的现象。下部采过熟而多出杂色烟，中部采生、上部采青，中上部烟叶采收后虽然色泽较鲜亮，但颜色偏柠檬，青筋、浮青较多，结构较紧密，香吃味不好。除此之外，还存在由于凭借外观特征进行判定的方法不够准确，会因人而异，存在主观性，且尚无针对某种特色烤烟品种相应的成熟度量化指标的问题，这些问题均会导致烤烟成熟度判定有误差。
针对以上问题，有必要发明一种基于鲜烟叶切片观察统计的烤烟成熟度判定方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种基于鲜烟叶切片观察统计的烤烟成熟度判定方法。
本发明的目的是这样实现的，包括以下步骤：
（1）鲜烟叶采集及一次判定：先对待判定烤烟的鲜烟叶进行外观判定，并采集外观判定成熟的鲜烟叶，备用；
（2）鲜烟叶切片：将步骤（1）采集的鲜烟叶采用石蜡切片法进行切片处理，备用；
（3）观察：将步骤（2）得到的切片进行观察测量与数据统计分析；
（4）二次判定：当鲜烟叶栅栏组织比海绵组织的比值在0.7-0.9μm之间、栅栏组织细胞间隙度在20%-30%之间，即可判断为适度成熟的烟叶。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
1、本发明针对采收的外观成熟的烟叶进行进一步的鲜烟叶切片，观察测量与数据统计分析，栅栏组织比海绵组织的比值、栅栏组织细胞间隙度等参数对比，从而直观、准确的判断烤烟成熟度，为田间烟叶的采收提供指导。
2、本发明的鲜烟叶切片方法，通过石蜡包埋切片，使得处理后的切片厚薄均匀、连续完整，在显微镜下图片清晰，便于分析处理。
3、本发明得到的烤烟成熟度指标有助于量化成熟度，保障采收适熟烟叶，确保烟叶烤后品质，有利于提高烟叶工业可用性，增加烟农收入。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
本发明所述的基于鲜烟叶切片观察统计的烤烟成熟度判定方法，包括以下步骤：
（1）鲜烟叶采集及一次判定：先对待判定烤烟的鲜烟叶进行外观判定，并采集外观判定成熟的鲜烟叶，备用；
（2）鲜烟叶切片：将步骤（1）采集的鲜烟叶采用石蜡切片法进行切片处理，备用；
（3）观察：将步骤（2）得到的切片进行观察测量与数据统计分析；
（4）二次判定：当鲜烟叶栅栏组织比海绵组织的比值在0.7-0.9μm之间、栅栏组织细胞间隙度在20%-30%之间，即可判断为适度成熟的烟叶。
进一步的，步骤（1）中所述的鲜烟叶为烤烟中部叶。
进一步的，所述的烤烟品种为k326和/或红花大金元。
进一步的，步骤（1）中所述的外观成熟的鲜烟叶判定特点有：a.烟叶绿色减退变为绿黄色、浅黄色；b.主脉变白发亮，支脉退青变白；c.茸毛部分脱落或基本脱落，树脂类物质增多，手摸烟叶有黏手感觉；d.叶基部产生分离层，容易采摘，采摘时断面整齐，不带茎皮；e.叶尖下垂，茎叶角度增大；f.叶面起皱，叶尖黄色程度增大或枯焦卷边。
进一步的，步骤（2）中的鲜烟叶切片具体包括以下步骤：
a、取材与固定：将烟叶剪切成3-5mm的小方块放入事先配好的faa固定液中保存，固定24h以上即可开始进行脱水处理；
b、脱水：取出固定的材料，依次使用50%、60%、70%、80%、90%、95%的酒精进行梯度脱水，每次30min，之后再用纯酒精进行2h脱水，然后更换纯酒精浸泡过夜，最后再换纯酒精脱水1h；
c、透明：将脱水后的材料取出，依次使用二甲苯：酒精=1:2、二甲苯：酒精=1:1、二甲苯：酒精=2:1的溶液进行透明处理，每次6h，接着使用纯二甲苯继续处理，每处理6h后更换纯二甲苯，更换2次；
d、浸蜡：二甲苯：石蜡（2:1）常温下1天，35℃恒温箱6-12小时，45℃恒温箱6-12小时，60℃恒温箱浸泡6-12小时；二甲苯：石蜡（1:1）60℃恒温箱浸泡6-12小时；二甲苯：石蜡（1:2）60℃恒温箱浸泡6-12小时；石蜡60℃恒温箱6-12小时；
e、包埋：浸蜡后，将材料封埋在蜡块中，冷却；
f、切片与粘片：将包埋好的材料经过修块后切片，采用转动切片机切成厚度为10μm的连续切片，再将切片粘到载玻片上；
g、展片：将粘好的片放到40℃的烘箱中2d；
h、脱蜡和染色：将有材料的玻片依次放入纯二甲苯中处理30min、二甲苯：酒精=1:1的溶液中处理15min，接着依次使用纯酒精、95%酒精、90%酒精、85%酒精、70%酒精、60%酒精、50%酒精、30%酒精、蒸馏水分别清洗5min，接着继续使用4%铁矾媒染2h，再使用蒸馏水清洗5min，继续使用苏木精染色8-12h，再使用蒸馏水清洗5min，继续放入2%铁矾中分色5min，再依次使用蒸馏水、30%酒精、50%酒精、60%酒精、70%酒精、85%酒精、90%酒精、95%酒精、纯酒精、二甲苯：酒精=1:1的溶液、纯二甲苯分别处理5min，即可；
i、封片：从二甲苯中取出玻片，立即用中性树胶封固，之后放入40℃烘箱中烘2-3d，得到鲜烟叶切片。
进一步的，步骤（3）中所述的观察测量具体为：分别在olympus显微镜下观察和拍照，对烤烟叶片解剖结构进行观察比较；在moticdmbi-223显微系统下对栅栏组织厚度、海绵组织厚度、栅栏组织细胞间隙度指标进行测量；测量结果为不少于50组重复数据的平均值。
进一步的，步骤（3）中所述的数据统计分析具体为：将观察测量数据经microsoftexcel整理，并取平均值。
实施例1
一种基于鲜烟叶切片观察统计的烤烟成熟度判定方法，包括以下步骤：
（1）鲜烟叶采集及一次判定：先对待判定烤烟的鲜烟叶进行外观判定，并采集外观判定成熟的鲜烟叶，备用；所述的鲜烟叶为烤烟中部叶。所述的烤烟品种为k326。所述的外观成熟的鲜烟叶判定特点包括：a.烟叶绿色减退变为绿黄色、浅黄色；b.主脉变白发亮，支脉退青变白；c.茸毛部分脱落或基本脱落，树脂类物质增多，手摸烟叶有黏手感觉；d.叶基部产生分离层，容易采摘，采摘时断面整齐，不带茎皮；e.叶尖下垂，茎叶角度增大；f.叶面起皱，叶尖黄色程度增大或枯焦卷边。
（2）鲜烟叶切片：将步骤（1）采集的鲜烟叶采用石蜡切片法进行切片处理，备用；具体包括以下步骤：
a、取材与固定：将烟叶剪切成3mm的小方块放入事先配好的faa固定液中保存，固定24h即可开始进行脱水处理；
b、脱水：取出固定的材料，依次使用50%、60%、70%、80%、90%、95%的酒精进行梯度脱水，每次30min，之后再用纯酒精进行2h脱水，然后更换纯酒精浸泡过夜，最后再换纯酒精脱水1h；
c、透明：将脱水后的材料取出，依次使用二甲苯：酒精=1:2、二甲苯：酒精=1:1、二甲苯：酒精=2:1的溶液进行透明处理，每次6h，接着使用纯二甲苯继续处理，每处理6h后更换纯二甲苯，更换2次；
d、浸蜡：二甲苯：石蜡（2:1）常温下1天，35℃恒温箱6小时，45℃恒温箱6小时，60℃恒温箱浸泡6小时；二甲苯：石蜡（1:1）60℃恒温箱浸泡6小时；二甲苯：石蜡（1:2）60℃恒温箱浸泡6小时；石蜡60℃恒温箱6小时；
e、包埋：浸蜡后，将材料封埋在蜡块中，冷却；
f、切片与粘片：将包埋好的材料经过修块后切片，采用转动切片机切成厚度为10μm的连续切片，再将切片粘到载玻片上；
g、展片：将粘好的片放到40℃的烘箱中2d；
h、脱蜡和染色：将有材料的玻片依次放入纯二甲苯中处理30min、二甲苯：酒精=1:1的溶液中处理15min，接着依次使用纯酒精、95%酒精、90%酒精、85%酒精、70%酒精、60%酒精、50%酒精、30%酒精、蒸馏水分别清洗5min，接着继续使用4%铁矾媒染2h，再使用蒸馏水清洗5min，继续使用苏木精染色8h，再使用蒸馏水清洗5min，继续放入2%铁矾中分色5min，再依次使用蒸馏水、30%酒精、50%酒精、60%酒精、70%酒精、85%酒精、90%酒精、95%酒精、纯酒精、二甲苯：酒精=1:1的溶液、纯二甲苯分别处理5min，即可；
i、封片：从二甲苯中取出玻片，立即用中性树胶封固，之后放入40℃烘箱中烘2d，得到鲜烟叶切片。
（3）观察：将步骤（2）得到的切片进行观察测量与数据统计分析；所述的观察测量具体为：分别在olympus显微镜下观察和拍照，对烤烟叶片解剖结构进行观察比较；在moticdmbi-223显微系统下对栅栏组织厚度、海绵组织厚度、栅栏组织细胞间隙度指标进行测量；测量结果为50组重复数据的平均值。所述的数据统计分析具体为：将观察测量数据经microsoftexcel整理，并取平均值。
（4）二次判定：当鲜烟叶栅栏组织比海绵组织的比值在0.7μm、栅栏组织细胞间隙度在20%，可判断为适度成熟的烟叶。
实施例2
一种基于鲜烟叶切片观察统计的烤烟成熟度判定方法，包括以下步骤：
（1）鲜烟叶采集及一次判定：先对待判定烤烟的鲜烟叶进行外观判定，并采集外观判定成熟的鲜烟叶，备用；所述的鲜烟叶为烤烟中部叶。所述的烤烟品种为红花大金元。所述的外观成熟的鲜烟叶判定特点包括：a.烟叶绿色减退变为绿黄色、浅黄色；b.主脉变白发亮，支脉退青变白；c.茸毛部分脱落或基本脱落，树脂类物质增多，手摸烟叶有黏手感觉；d.叶基部产生分离层，容易采摘，采摘时断面整齐，不带茎皮；e.叶尖下垂，茎叶角度增大；f.叶面起皱，叶尖黄色程度增大或枯焦卷边。
（2）鲜烟叶切片：将步骤（1）采集的鲜烟叶采用石蜡切片法进行切片处理，备用；具体包括以下步骤：
a、取材与固定：将烟叶剪切成5mm的小方块放入事先配好的faa固定液中保存，固定28h即可开始进行脱水处理；
b、脱水：取出固定的材料，依次使用50%、60%、70%、80%、90%、95%的酒精进行梯度脱水，每次30min，之后再用纯酒精进行2h脱水，然后更换纯酒精浸泡过夜，最后再换纯酒精脱水1h；
c、透明：将脱水后的材料取出，依次使用二甲苯：酒精=1:2、二甲苯：酒精=1:1、二甲苯：酒精=2:1的溶液进行透明处理，每次6h，接着使用纯二甲苯继续处理，每处理6h后更换纯二甲苯，更换2次；
d、浸蜡：二甲苯：石蜡（2:1）常温下1天，35℃恒温箱12小时，45℃恒温箱12小时，60℃恒温箱浸泡12小时；二甲苯：石蜡（1:1）60℃恒温箱浸泡12小时；二甲苯：石蜡（1:2）60℃恒温箱浸泡12小时；石蜡60℃恒温箱12小时；
e、包埋：浸蜡后，将材料封埋在蜡块中，冷却；
f、切片与粘片：将包埋好的材料经过修块后切片，采用转动切片机切成厚度为10μm的连续切片，再将切片粘到载玻片上；
g、展片：将粘好的片放到40℃的烘箱中2d；
h、脱蜡和染色：将有材料的玻片依次放入纯二甲苯中处理30min、二甲苯：酒精=1:1的溶液中处理15min，接着依次使用纯酒精、95%酒精、90%酒精、85%酒精、70%酒精、60%酒精、50%酒精、30%酒精、蒸馏水分别清洗5min，接着继续使用4%铁矾媒染2h，再使用蒸馏水清洗5min，继续使用苏木精染色12h，再使用蒸馏水清洗5min，继续放入2%铁矾中分色5min，再依次使用蒸馏水、30%酒精、50%酒精、60%酒精、70%酒精、85%酒精、90%酒精、95%酒精、纯酒精、二甲苯：酒精=1:1的溶液、纯二甲苯分别处理5min，即可；
i、封片：从二甲苯中取出玻片，立即用中性树胶封固，之后放入40℃烘箱中烘3d，得到鲜烟叶切片。
（3）观察：将步骤（2）得到的切片进行观察测量与数据统计分析；所述的观察测量具体为：分别在olympus显微镜下观察和拍照，对烤烟叶片解剖结构进行观察比较；在moticdmbi-223显微系统下对栅栏组织厚度、海绵组织厚度、栅栏组织细胞间隙度指标进行测量；测量结果为60组重复数据的平均值。所述的数据统计分析具体为：将观察测量数据经microsoftexcel整理，并取平均值。
（4）二次判定：当鲜烟叶栅栏组织比海绵组织的比值在0.9μm、栅栏组织细胞间隙度在30%，可判断为适度成熟的烟叶。
实施例3
一种基于鲜烟叶切片观察统计的烤烟成熟度判定方法，包括以下步骤：
（1）鲜烟叶采集及一次判定：先对待判定烤烟的鲜烟叶进行外观判定，并采集外观判定成熟的鲜烟叶，备用；所述的鲜烟叶为烤烟中部叶。所述的烤烟品种为k326。所述的外观成熟的鲜烟叶判定特点包括：a.烟叶绿色减退变为绿黄色、浅黄色；b.主脉变白发亮，支脉退青变白；c.茸毛部分脱落或基本脱落，树脂类物质增多，手摸烟叶有黏手感觉；d.叶基部产生分离层，容易采摘，采摘时断面整齐，不带茎皮；e.叶尖下垂，茎叶角度增大；f.叶面起皱，叶尖黄色程度增大或枯焦卷边。
（2）鲜烟叶切片：将步骤（1）采集的鲜烟叶采用石蜡切片法进行切片处理，备用；具体包括以下步骤：
a、取材与固定：将烟叶剪切成4mm的小方块放入事先配好的faa固定液中保存，固定32即可开始进行脱水处理；
b、脱水：取出固定的材料，依次使用50%、60%、70%、80%、90%、95%的酒精进行梯度脱水，每次30min，之后再用纯酒精进行2h脱水，然后更换纯酒精浸泡过夜，最后再换纯酒精脱水1h；
c、透明：将脱水后的材料取出，依次使用二甲苯：酒精=1:2、二甲苯：酒精=1:1、二甲苯：酒精=2:1的溶液进行透明处理，每次6h，接着使用纯二甲苯继续处理，每处理6h后更换纯二甲苯，更换2次；
d、浸蜡：二甲苯：石蜡（2:1）常温下1天，35℃恒温箱8时，45℃恒温箱8时，60℃恒温箱浸泡8时；二甲苯：石蜡（1:1）60℃恒温箱浸泡8时；二甲苯：石蜡（1:2）60℃恒温箱浸泡8时；石蜡60℃恒温箱8时；
e、包埋：浸蜡后，将材料封埋在蜡块中，冷却；
f、切片与粘片：将包埋好的材料经过修块后切片，采用转动切片机切成厚度为10μm的连续切片，再将切片粘到载玻片上；
g、展片：将粘好的片放到40℃的烘箱中2d；
h、脱蜡和染色：将有材料的玻片依次放入纯二甲苯中处理30min、二甲苯：酒精=1:1的溶液中处理15min，接着依次使用纯酒精、95%酒精、90%酒精、85%酒精、70%酒精、60%酒精、50%酒精、30%酒精、蒸馏水分别清洗5min，接着继续使用4%铁矾媒染2h，再使用蒸馏水清洗5min，继续使用苏木精染色10，再使用蒸馏水清洗5min，继续放入2%铁矾中分色5min，再依次使用蒸馏水、30%酒精、50%酒精、60%酒精、70%酒精、85%酒精、90%酒精、95%酒精、纯酒精、二甲苯：酒精=1:1的溶液、纯二甲苯分别处理5min，即可；
i、封片：从二甲苯中取出玻片，立即用中性树胶封固，之后放入40℃烘箱中烘3d，得到鲜烟叶切片。
（3）观察：将步骤（2）得到的切片进行观察测量与数据统计分析；所述的观察测量具体为：分别在olympus显微镜下观察和拍照，对烤烟叶片解剖结构进行观察比较；在moticdmbi-223显微系统下对栅栏组织厚度、海绵组织厚度、栅栏组织细胞间隙度指标进行测量；测量结果为55组重复数据的平均值。所述的数据统计分析具体为：将观察测量数据经microsoftexcel整理，并取平均值。
（4）二次判定：当鲜烟叶栅栏组织比海绵组织的比值在0.8μm、栅栏组织细胞间隙度在25%，即可判断为适度成熟的烟叶。
实施例4
一种基于鲜烟叶切片观察统计的烤烟成熟度判定方法，包括以下步骤：
（1）鲜烟叶采集及一次判定：先对待判定烤烟的鲜烟叶进行外观判定，并采集外观判定成熟的鲜烟叶，备用；所述的鲜烟叶为烤烟中部叶。所述的烤烟品种为红花大金元。所述的外观成熟的鲜烟叶判定特点包括：a.烟叶绿色减退变为绿黄色、浅黄色；b.主脉变白发亮，支脉退青变白；c.茸毛部分脱落或基本脱落，树脂类物质增多，手摸烟叶有黏手感觉；d.叶基部产生分离层，容易采摘，采摘时断面整齐，不带茎皮；e.叶尖下垂，茎叶角度增大；f.叶面起皱，叶尖黄色程度增大或枯焦卷边。
（2）鲜烟叶切片：将步骤（1）采集的鲜烟叶采用石蜡切片法进行切片处理，备用；具体包括以下步骤：
a、取材与固定：将烟叶剪切成3mm的小方块放入事先配好的faa固定液中保存，固定26h以上即可开始进行脱水处理；
b、脱水：取出固定的材料，依次使用50%、60%、70%、80%、90%、95%的酒精进行梯度脱水，每次30min，之后再用纯酒精进行2h脱水，然后更换纯酒精浸泡过夜，最后再换纯酒精脱水1h；
c、透明：将脱水后的材料取出，依次使用二甲苯：酒精=1:2、二甲苯：酒精=1:1、二甲苯：酒精=2:1的溶液进行透明处理，每次6h，接着使用纯二甲苯继续处理，每处理6h后更换纯二甲苯，更换2次；
d、浸蜡：二甲苯：石蜡（2:1）常温下1天，35℃恒温箱10小时，45℃恒温箱10小时，60℃恒温箱浸泡10小时；二甲苯：石蜡（1:1）60℃恒温箱浸泡10小时；二甲苯：石蜡（1:2）60℃恒温箱浸泡10小时；石蜡60℃恒温箱10小时；
e、包埋：浸蜡后，将材料封埋在蜡块中，冷却；
f、切片与粘片：将包埋好的材料经过修块后切片，采用转动切片机切成厚度为10μm的连续切片，再将切片粘到载玻片上；
g、展片：将粘好的片放到40℃的烘箱中2d；
h、脱蜡和染色：将有材料的玻片依次放入纯二甲苯中处理30min、二甲苯：酒精=1:1的溶液中处理15min，接着依次使用纯酒精、95%酒精、90%酒精、85%酒精、70%酒精、60%酒精、50%酒精、30%酒精、蒸馏水分别清洗5min，接着继续使用4%铁矾媒染2h，再使用蒸馏水清洗5min，继续使用苏木精染色9h，再使用蒸馏水清洗5min，继续放入2%铁矾中分色5min，再依次使用蒸馏水、30%酒精、50%酒精、60%酒精、70%酒精、85%酒精、90%酒精、95%酒精、纯酒精、二甲苯：酒精=1:1的溶液、纯二甲苯分别处理5min，即可；
i、封片：从二甲苯中取出玻片，立即用中性树胶封固，之后放入40℃烘箱中烘2d，得到鲜烟叶切片。
（3）观察：将步骤（2）得到的切片进行观察测量与数据统计分析；所述的观察测量具体为：分别在olympus显微镜下观察和拍照，对烤烟叶片解剖结构进行观察比较；在moticdmbi-223显微系统下对栅栏组织厚度、海绵组织厚度、栅栏组织细胞间隙度指标进行测量；测量结果为80组重复数据的平均值。所述的数据统计分析具体为：将观察测量数据经microsoftexcel整理，并取平均值；
（4）二次判定：当鲜烟叶栅栏组织比海绵组织的比值在0.75-0.85μm之间、栅栏组织细胞间隙度在24%-26%之间，可判断为适度成熟的烟叶。
试验例1——烤后烟叶外观质量及经济性状对比试验
（1）设置2个处理：本发明成熟度判定方法、常规成熟度判定方法。通过2个不同处理，选取烤烟品种k326，田间生长正常无病害的成熟中部叶各2份，每个处理各编烟5杆，放入密集烤房的中间层相同位置，使用相同烘烤工艺（提质增香烘烤工艺或“三段式”烘烤工艺）。
（2）以烤烟分级标准为基础，从工艺成熟度、颜色、色度、油分、叶片结构、身份方面判定2个处理烤后烟叶的外观质量指标，对2个处理烤后烟叶随机选取20片称重，取平均值作为单叶重，同时根据分级情况统计2个处理烤后烟叶的均价、中上等烟及下低等烟比例。
试验结果见表1、表2。
表1：不同成熟度判定方法对烤后烟叶外观质量的影响
由表1可知，根据本发明成熟度判定法采收的k326烤后烟叶外观质量表现比常规成熟度判定法好，本发明成熟度判定法k326烤后烟叶工艺成熟度表现为适熟，颜色多为桔黄+，叶片结构疏松，身份多为中等，油分有，色度中至强；而常规成熟度判定法k326烤后烟叶工艺成熟度表现为初熟，颜色多为桔黄，叶片结构尚疏松，色度为中，身份多为薄，这说明本发明成熟度判定法对保障烟叶烤后外观质量有一定效果。
表2：不同成熟度判定方法对烤后烟叶经济性状的影响
由表2可知，根据本发明成熟度判定法采收的k326烤后烟叶经济性状比常规成熟度判定法更优。与常规成熟度判定法相比，本发明成熟度判定法k326烤后烟叶单叶重高19.18%，每公斤干烟均价高3.03元/kg，上等烟比例提高4.34个百分点，中等烟比例提高2.07个百分点，下低等烟比例降低6.95个百分点，这说明本发明成熟度判定法有利于提高烤后烟叶经济价值，增加烟农收入。
试验例2——烤后烟叶化学成分对比试验
（1）设置2个处理：本发明成熟度判定方法、常规成熟度判定方法。通过2个不同处理，选取烤烟品种k326，田间生长正常无病害的成熟中部叶各2份，每个处理各编烟5杆，放入密集烤房的中间层相同位置，使用相同烘烤工艺（提质增香烘烤工艺或“三段式”烘烤工艺）。
（2）取2个处理c3f等级初烤烟叶，进行常规化学成分检测，其中氮、钾含量测定方法按ny/t2017-2011，总植物碱测定按yc/t160-2002，水溶性糖测定按yc/t32-1996等所述标准进行，还原糖测定采用斐林液比色法，氯含量测定采用干法灰化-hg(cns)2-fe(no3)3比色法。
试验结果见表3。
表3：不同成熟度判定方法对烤后烟叶化学成分的影响
一般认为优质烟的总糖含量18%~22%，还原糖16%~18%，总氮含量1.5%~3.5%，烟碱含量1.5%~3.5%，钾含量2%以上，氯含量1%以下，淀粉含量4%~5%左右，氮碱比以1或略小于1为宜，糖碱比一般为6~10，接近10的烤烟质量最好。由表3可知，本发明成熟度判定方法烤后烟叶的总氮、钾、水溶性总糖、还原糖含量均优于常规成熟度判定方法，且本发明成熟度判定方法烤后烟叶的糖碱比指标优于常规成熟度判定方法，糖碱比指标较好，说明烟叶酸碱平衡，化学成分更协调，这说明本发明成熟度判定法烤后烟叶的化学成分更协调，品质相对较好。
试验例3——烤后烟叶感官质量评吸对比试验
（1）设置2个处理：本发明成熟度判定方法、常规成熟度判定方法。通过2个不同处理，选取烤烟品种k326，田间生长正常无病害的成熟中部叶各2份，每个处理各编烟5杆，放入密集烤房的中间层相同位置，使用相同烘烤工艺（提质增香烘烤工艺或“三段式”烘烤工艺）。
（2）取2个处理c3f等级初烤烟样1kg，送红云红河集团昆明卷烟厂切丝卷制成单料烟，平衡水分后由红云红河烟草（集团）有限责任公司7位评吸专家进行评价。评吸指标按照云南中烟单体烟叶感官质量评吸标准分为香气质、香气量、浓度、刺激性、劲头、杂气、干净度、湿润感和回味9个指标，对7位专家的感官评吸打分取平均值作为最终得分。
试验结果见表4。
表4：不同成熟度判定方法对烤后烟叶感官评吸质量的影响
感官评吸得分是评价烟叶品质的一项重要指标，也是判定烟叶工业可用性的关键指标。由表4可知，本发明成熟度判定方法烤后烟叶的感官评吸总分高于常规成熟度判定方法的感官评吸总分，本发明成熟度判定方法烤后烟叶的香气质好、香气量足、香气细腻、津润感好，这说明本发明成熟度判定法烤后烟叶的感官评吸较好，烟叶工业可用性更高。
试验例4——不同成熟度判定范围烤后烟叶外观质量及经济性状对比试验
试验在玉溪市江川区九溪试验基地进行，烤烟品种为k326。
试验方法：
（1）设置3个处理：本发明成熟度判定范围（栅栏组织比海绵组织的比值在0.7-0.9μm之间、栅栏组织细胞间隙度在20%-30%之间）、ck1（栅栏组织比海绵组织的比值在0.5-0.7μm之间、栅栏组织细胞间隙度在10%-20%之间）、ck2（栅栏组织比海绵组织的比值在0.9-1.2μm之间、栅栏组织细胞间隙度在30%-40%之间）。经过一次判定选取田间生长正常无病害的成熟中部叶，鲜烟叶切片制作并观察，二次判定后根据栅栏组织比海绵组织的比值及栅栏组织细胞间隙度将一次判定的成熟烟叶分成3个处理。
（2）每个处理各编烟3杆，放入烤房的中间层位置，使用相同烘烤工艺（提质增香烘烤工艺或“三段式”烘烤工艺）。
（3）从工艺成熟度、颜色、色度、油分、叶片结构、身份方面判定3个处理烤后烟叶的外观质量指标，对3个处理烤后烟叶随机选取20片称重，取平均值作为单叶重，同时根据分级情况统计3个处理烤后烟叶的均价、中上等烟及下低等烟比例。
试验结果见表5、表6。
表5：不同成熟度判定范围对烤后烟叶外观质量的影响
由表5可知，根据本发明成熟度判定法给出的判定范围采收的k326烤后烟叶外观质量表现比对照判定范围好，本发明成熟度判定范围烤后烟叶工艺成熟度表现为适熟，烟叶桔黄色更深，叶片结构疏松，身份多为中等，油分有，色度强；而对照1判定范围烤后烟叶工艺成熟度表现为初熟，叶片结构尚疏松，色度为中，身份多为薄，油分少，对照2判定范围烤后烟叶工艺成熟度表现为过熟，叶片结构疏松，色度为中，身份多为中等，油分有，这说明本发明成熟度判定法给出的判定范围能正确反映烟叶成熟度，确保烤后烟叶外观质量较好。
表6：不同成熟度判定范围对烤后烟叶经济性状的影响
由表6可知，根据本发明成熟度判定法给出的判定范围采收的k326烤后烟叶经济性状优于对照成熟度判定范围经济性状。与对照1成熟度判定范围相比，本发明成熟度判定范围烤后烟叶单叶重高7.58%，每公斤干烟均价高3.57元/kg，上等烟比例提高4.12个百分点，中等烟比例提高3.53个百分点，下低等烟比例降低6.45个百分点；与对照2成熟度判定范围相比，本发明成熟度判定范围烤后烟叶单叶重高3.65%，每公斤干烟均价高3.89元/kg，上等烟比例提高6.34个百分点，中等烟比例提高2.87个百分点，下低等烟比例降低8.81个百分点。这说明本发明成熟度判定范围，烟叶成熟度较好，有利于提高烤后烟叶经济价值，增加烟农收入。
试验例5——不同成熟度判定范围烤后烟叶感官评吸质量对比试验
试验在玉溪市江川区九溪试验基地进行，烤烟品种为k326。
试验方法：
（1）设置3个处理：本发明成熟度判定范围（栅栏组织比海绵组织的比值在0.7-0.9μm之间、栅栏组织细胞间隙度在20%-30%之间）、ck1（栅栏组织比海绵组织的比值在0.5-0.7μm之间、栅栏组织细胞间隙度在10%-20%之间）、ck2（栅栏组织比海绵组织的比值在0.9-1.2μm之间、栅栏组织细胞间隙度在30%-40%之间）。经过一次判定选取田间生长正常无病害的成熟中部叶，鲜烟叶切片制作并观察，二次判定后根据栅栏组织比海绵组织的比值及栅栏组织细胞间隙度将一次判定的成熟烟叶分成3个处理。
（2）每个处理各编烟3杆，放入烤房的中间层位置，使用相同烘烤工艺（提质增香烘烤工艺或“三段式”烘烤工艺）。
（2）取3个处理c3f等级初烤烟样1kg，送红云红河集团昆明卷烟厂切丝卷制成单料烟，平衡水分后由红云红河烟草（集团）有限责任公司7位评吸专家进行评价。评吸指标按照云南中烟单体烟叶感官质量评吸标准分为香气质、香气量、浓度、刺激性、劲头、杂气、干净度、湿润感和回味9个指标，对7位专家的感官评吸打分取平均值作为最终得分。
试验结果见表7。
表7：不同成熟度判定范围对烤后烟叶感官评吸质量的影响
感官评吸得分是评价烟叶品质的一项重要指标，也是判定烟叶工业可用性的关键指标。由表7可知，本发明成熟度判定范围烤后烟叶的感官评吸总分高于对照1和对照2成熟度判定范围烤后烟叶的感官评吸总分。与本发明成熟度判定范围相比，对照1成熟度判定范围烤后烟叶劲头略欠、香气厚实感不足，对照2成熟度判定范围烤后烟叶香气量中等、浓度中等、余味略苦涩。本发明成熟度判定范围烤后烟叶的香气质好、香气量足、清甜香突出、浓度中等、劲头适中，这说明本发明成熟度判定法给出的判定范围较适宜，烤后烟叶的感官评吸质量较好，烟叶工业可用性更高。