一种胱抑素C检测试剂盒的制作方法

本发明涉及生物医药技术领域，具体是一种胱抑素c检测试剂盒。

背景技术：

肾脏疾病是临床上一种常见的疾病，迄今为止，早诊断、早治疗以及逆转损伤的肾功能是唯一能阻止肾脏疾病恶化的途径。临床评价肾脏疾病进展和严重程度一般以肾功能为参考，以肾小球滤过率(gfr)作为反映肾功能最重要的指标。

胱抑素c，是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，且是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，其分子量为13.3kd，由122个氨基酸残基组成，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环中的胱抑素c仅经肾小球滤过而被清除，为反映肾小球滤过率变化的内源性标志物，并在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代谢分解，不返回血液。因此，可以通过血液中胱抑素c的浓度来反映肾小球的过滤速率，而且，胱抑素c血清浓度不受敏症过程、性别、年龄和肌肉重量影响，是反映肾小球滤过率变化的理想同源性标志物，并逐步发展为评估肾功能的一项敏感性好、特异性高的指标。

但是由于血清胱抑素c的含量很低，其测定方法需要较高的灵敏度和特异性，由最初免疫电泳的定性检测，到放射免疫、荧光免疫和酶免疫的定量检测，以及到免疫比浊的自动化检测，发展十分迅速。单向免疫扩散(srid)、放射免疫测定法(ria)、荧光免疫测定发(fia)、时间分辨荧光免疫测定法(trfia)、酶联免疫测定法(elisa)、胶乳颗粒法、颗粒增强透射免疫比浊法(petia)、颗粒增强散射免疫比浊法(penia)。目前，胶乳颗粒增强比浊法是最为普遍通用的方法，但是胶乳颗粒增强比浊法存在灵敏度较低，精密度、准确性、线性范围等方面的问题，在临床应用上存在着局限性。因此，本领域技术人员提供了一种胱抑素c检测试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种胱抑素c检测试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种胱抑素c检测试剂盒，包括r1试剂和r2试剂，其特征在于，所述r1试剂由缓冲液、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、反应加速剂组成，所述r2试剂由缓冲液a、稳定剂a、表面活性剂a、防腐剂a、反应加速剂a组成。

作为本发明进一步的方案：所述r1试剂包括以下浓度的物质：三氨基甲烷3g/l、氯化钠9g/l、一零一1g/l、一零八1g/l、一一七55g/l、一一八1ml/l；

所述r2试剂包括以下浓度的物质：三氨基甲烷3g/l、氯化钠9g/l、一零一1g/l、一零八1g/l、一一七55g/l、抗胱抑素c血清1ml/l。

作为本发明再进一步的方案：胱抑素c检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤，以配置1lr1试剂为例：

步骤一：按照r1试剂的原料通过工具称取三氨基甲烷3g/l、氯化钠9g/l、一零一1g/l、一零八1g/l、一一七55g/和一一八1ml/l；

步骤二：对步骤一中称取的原料进行人工复核；

步骤三：对步骤二中复核的原料进行溶解操作，制得混合溶液；

步骤四：对步骤三中的混合溶液调ph值至7.5±0.2(室温)，加去离子水补足至1l，离子水搅拌加入，得到1l的混合溶液；

步骤五：对步骤四中称取1l的混合溶液用工艺用水稀释至1.0公斤，用磁力搅拌器2-3档搅拌60±15分钟，制得溶液，并且通过ph剂确认溶液ph值在7.5±0.2之间；

步骤六：对步骤五制得的溶液进行包装，制得所述胱抑素c检测试剂盒。

作为本发明再进一步的方案：步骤二中的溶解操作包括以下步骤：

步骤a：在1升容器内加水0.8公斤，加入三氨基甲烷，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，制得溶液；

步骤b：在步骤a制得的溶液中加入一零一，用磁力搅拌器2-3档搅拌均匀，制得溶液；

步骤c：在步骤b制得的溶液中加入一零八，用磁力搅拌器2-3档搅拌溶解，制得溶液；

步骤d：在步骤c制得溶液中加入氯化钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌使其溶解，制得缓冲液；

步骤e：将步骤d制得的缓冲液1倒入一个烧杯内，加入一一七，用磁力搅拌器2-3档搅拌制得混合溶液。

作为本发明再进一步的方案：溶解过程中各个步骤中磁力搅拌器搅拌的时间均为30±3分钟。

作为本发明再进一步的方案：所述r2试剂的制备步骤与r1试剂的制备步骤相同。

作为本发明再进一步的方案：步骤一中的称取工具为：灵敏度0.1mg的al104精密电子天平、灵敏度10mg的tc30k型精密电子天平和灵敏度10mg为t1000y型电子天平。

作为本发明再进一步的方案：步骤五中1.0公斤的水通过电子秤进行称量

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明提供一种灵敏且稳定的胱抑素c检测试剂盒，本发明使用方便，操作简单；参与偶联反应的成分都很稳定，不会引起内外源物质的干扰，稳定性好，可以长时间使用，为了实现上述的试剂改良目的，对试剂生产流程和试剂进行改进，使试剂的灵敏度，重复性，线性，稳定性都有了很大的提高。

附图说明

图1为一种胱抑素c检测试剂盒的生产工艺流程示意图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

实施例1：

一种胱抑素c检测试剂盒，包括r1试剂和r2试剂，其特征在于，所述r1试剂由缓冲液、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、反应加速剂组成，所述r2试剂由缓冲液a、稳定剂a、表面活性剂a、防腐剂a、反应加速剂a组成。

所述r1试剂包括以下浓度的物质：三氨基甲烷3g/l、氯化钠9g/l、一零一1g/l、一零八1g/l、一一七55g/l、一一八1ml/l；

所述r2试剂包括以下浓度的物质：三氨基甲烷3g/l、氯化钠9g/l、一零一1g/l、一零八1g/l、一一七55g/l、抗胱抑素c血清1ml/l。

一种胱抑素c检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤，以配置1lr1试剂为例：

步骤一：按照r1试剂的原料通过工具称取三氨基甲烷3g/l、氯化钠9g/l、一零一1g/l、一零八1g/l、一一七55g/和一一八1ml/l；

步骤二：对步骤一中称取的原料进行人工复核；

步骤三：对步骤二中复核的原料进行溶解操作，制得混合溶液；

步骤四：对步骤三中的混合溶液调ph值至7.5±0.2(室温)，加去离子水补足至1l，离子水搅拌加入，得到1l的混合溶液；

步骤五：对步骤四中称取1l的混合溶液用工艺用水稀释至1.0公斤，用磁力搅拌器2-3档搅拌60±15分钟，制得溶液，并且通过ph剂确认溶液ph值在7.5±0.2之间；

步骤六：对步骤五制得的溶液进行包装，制得所述胱抑素c检测试剂盒。

实施例2：

一种胱抑素c检测试剂盒中r1试剂和r2试剂中成分及相应含量更换为：

所述r1试剂包括以下浓度的物质：三氨基甲烷5g/l、氯化钠9g/l、一零一1g/l、一零八1g/l、一一七55g/l、一一八4ml/l；

所述r2试剂包括以下浓度的物质：三氨基甲烷3g/l、氯化钠9g/l、一零一1g/l、一零八1g/l、一一七32g/l、抗胱抑素c血清3ml/l。

本发明通过西门子1200型全自动生化分析仪进行试剂盒性能研究，

实验一

实验方法

用纯水测试试剂(盒)，在测试主波长546nm下，记录测试启动时的吸光度(a1)和约5分钟(t)后的吸光度(a2)，a2测试结果即为试剂空白吸光度测定值。

实验结果

结论：三个批号的胱抑素试剂盒分别在西门子1200生化仪测定，实验结果符合试剂空白吸光度：a546nm(1cm)≤1.5。

实验二

测定理论浓度约1.0mg/l样本，

实验结果

结论：三个批号的胱抑素试剂盒分别在西门子1200生化仪测定，实验结果表明测定理论值在1.0mg/l样品，吸光度变化要求>0.03a。

实验三

在重现性条件下，用质控品测试试剂盒。测试10次，分别计算测量值的平均值和标准差，按公式(2)计算变异系数(cv)，应符合产品技术要求

实验结果

结论：在高低两个不同浓度水平的质控血清测试下，使用西门子1200生化分析仪测得的批内不精密度均小于8％，属于可接受范畴。

上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。