本发明属于中药分析领域，涉及一种中药材的质量控制方法，具体涉及一种密蒙花药材的质量控制方法。
背景技术：
密蒙花，别名蒙花、黄饭花、小锦花、羊耳朵等，为马钱科醉鱼草属植物密蒙花的干燥花蕾及花序。密蒙花具有祛风，凉血，润肝，明目等功效，可用于治疗目赤肿痛，多泪羞明，青盲翳障等症状。
密蒙花中主要含有黄酮类、苯乙醇苷类、萜类、挥发油等成分。其中黄酮类、苯乙醇苷类是其主要成分，黄酮类成分包括蒙花苷、密蒙花新苷、芹菜素、木犀草素及其苷类等，苯乙醇苷类成分包括毛蕊花苷、异毛蕊花苷、β-羟基毛蕊花苷、肉苁蓉苷f、连翘酯苷b、金石蚕苷等。现代研究表明，密蒙花中的黄酮类成分具有降血脂、保肝、抗炎等作用；苯乙醇苷类成分具有抗菌、抗炎、免疫调节等生理活性。其中，抗菌、抗炎、拟激素样作用可用于抑制炎症因子、抑制细胞凋亡、与雄激素受体结合发挥拟激素样作用来治疗性激素水平下降致使的干眼症；醛糖还原酶抑制活性可通过防止山梨醇在晶体组织中蓄积形成白内障；同时保肝、降血糖、免疫调节作用可通过维持血糖水平、增强机体免疫延缓糖尿病并发症的发展；以上活性成分可显著改善干眼症及糖尿病视网膜病变症状，与清热养肝、名目退翳功效相符，可视为发挥临床疗效的物质基础。
随着科技的日益发展，药学、生物医学、化学、计算机、数理统计学等学科的现代理论和科学技术不断渗透到中医药领域，为药材质量标准现代化提供了新的科学方法和手段，随着药材的质量标准和监管水平的逐年提高，建立国际公认的药材质量控制和评价体系已成为提高我国中药产业国际市场竞争力所亟待解决的问题。
虽然药典对密蒙花的性状、功效作了描述，但与其他常规药材相比，缺少更加准确的化学定性鉴别手段及基本项目检查，迫切需要寻找能够更加全面突出药材基本化学特征的、能与体内药效相关联的指标性成分，并建立系统的质量控制方法。
中国专利20161025487.8公开了一种ase方法提取密蒙花中蒙花苷的方法，包括以下步骤：步骤1：将密蒙花粉碎后，过筛；步骤2：称取0.5重量份密蒙花粉，与0.5重量份硅藻土混合均匀待用；步骤3：在预先放好过滤膜的萃取池中，加入适量的硅藻土至达到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子；步骤4：对萃取池内的混合物进行去酯；步骤5：步骤4结束后，对萃取池内的混合物进行提取；提取结束后得到萃取液。
中国专利201610254580.6公开了一种密蒙花中蒙花苷的测定方法，包括以下步骤：步骤1：将密蒙花粉碎后采用ase萃取法萃取得到萃取液；步骤2：将萃取液离心分离后，得到上清液；步骤3：将上清液采用液相色谱法进行分析。
中国专利201410279787.x公开了一种密蒙花以及提取物在制备药物中的应用，该发明将密蒙花粉碎后在室温浸提或者加热回流或者超临界萃取中获得的提取物，提取所使用的溶剂为水与乙醇以任何比例相混溶的液体；或者是乙醚、石油醚、氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂以任何比例相混溶的液体；或者是液态co2。
尽管现有技术公开了从密蒙花提取蒙花苷的工艺并测定蒙花苷含量的方法，来实现对不同产地甚至不同批次的密蒙花药材的质量检测。但是，蒙花苷是一种在许多药材中均常见的黄酮类成分，仅仅通过测定蒙花苷的含量难以全面、客观系统的评价密蒙花药材及其提取物与制剂的品质。目前尚未见同时以黄酮类和苯乙醇苷类活性成分为质控指标的多指标测定方法用于全面有效控制密蒙花药材质量的报道。
技术实现要素：
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，采用hplc-uv方法建立用于测定密蒙花药材中蒙花苷，木犀草素两种黄酮类成分和毛蕊花苷、异毛蕊花苷两种苯乙醇苷类化学成分含量的质量控制方法，以期通过同时控制两类活性成分的含量达到对密蒙花药材及其提取物与制剂质量的有效控制，以实现对密蒙花系列产品质量标准的提升，为客观评价密蒙花系列产品品质提供技术支撑，对控制密蒙花相关产品质量和保证疗效具有重要意义。
解释：
1、如未有特别说明，本发明中涉及到的“相同”指与该词前述的指标的数值完全一致；本发明中涉及到的“相似”或“相近”指与该词前述的指标的数值存在±1％的误差的数值。
2、如未有特别说明，本发明中所采用的水均为超纯水。
3、如未有特别说明，本发明中的％为体积百分含量。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种密蒙花药材的质量控制方法，包括以下步骤：
s1、采用hplc-uv法测定密蒙花药材中黄酮类成分以及苯乙醇苷类成分的含量；
s2、以步骤(1)所测得黄酮类成分总量或苯乙醇苷类成分总量或步骤(1)所测得黄酮类成分和苯乙醇苷类成分的总量，结合黄酮类代表性成分与苯乙醇苷类代表性成分的峰面积比值，作为评价指标，用于评定密蒙花药材品质及质量控制的标准。
优选地，步骤s1中所述的黄酮类成分为蒙花苷和木犀草素。
优选地，步骤s2中所述的苯乙醇苷类成分为毛蕊花苷和异毛蕊花苷。
优选地，步骤s2中所述的黄酮类代表成分为蒙花苷。
优选地，步骤s2中所述的苯乙醇苷类代表性成分为毛蕊花苷。
优选地，步骤s2中所述的黄酮类成分总量、苯乙醇苷类成分总量、黄酮类和苯乙醇苷类成分总量为算术总量或者为加权后计算的重量。
优选地，步骤(1)中所述的hplc-uv测定的步骤为：
(1)供试品溶液的制备；
称取密蒙花药材，加入体积浓度为30％-100％甲醇，重新称重，提取30-90min后，再称重，加体积浓度为30％-100％甲醇补足减少的重量，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液即为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备；
称取蒙花苷、木犀草素、毛蕊花苷和异毛蕊花苷，得混合对照品，向混合对照品中加入体积浓度为10％-100％的甲醇，制成混合对照品溶液；
(3)样品中黄酮类成分和苯乙醇苷类成分的测定；
取步骤(1)制备得到的供试品溶液、步骤(2)制备得到的混合对照品溶液分别注入高效液相色谱仪进行测定，获得色谱图，按外标一点法分别计算蒙花苷、木犀草素、毛蕊花苷和异毛蕊花苷的含量。
进一步优选地，所述的高效液相色谱测定的条件为：
色谱柱：反相c18色谱柱；
流动相：以乙腈为a相，体积浓度为0.1％甲酸水溶液为b相；
梯度洗脱程序为：0-100min，a相：98％-10％；b相：2％-90％；
流速：1ml/min；
检测波长：330nm。
本发明还提供了上述质量控制方法在密蒙花提取物及其制剂的质量控制中的应用。
优选地，所述的密蒙花提取物为密蒙花药材的水提物或者乙醇提取物。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明选取与密蒙花的祛风、凉血、润肝、明目等传统功效密切相关，且含量相对较高、具有代表性的蒙花苷、木犀草素、毛蕊花苷和异毛蕊花苷共4种活性成分作为测定指标，可有效控制密蒙花药材的质量。
(2)本发明通过建立黄酮类和苯乙醇苷类化学成分指标，用于密蒙花药材及其提取物与制剂的品质评价及质量控制，较现行密蒙花药材质量标准仅以蒙花苷一种成分作为含量测定指标，可更加全面地控制密蒙花产品的质量。
(3)本发明采用的hplc-uv检测方法，快速、简便、准确度好，可以客观、全面、准确地评价密蒙花药材及其提取物与制剂的质量，对控制密蒙花药材及其提取物与制剂的质量和保证临床疗效具有重要意义。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
一种密蒙花药材的质量控制方法，包括以下步骤：
s1、采用hplc-uv法测定密蒙花药材中黄酮类成分蒙花苷、木犀草素以及苯乙醇苷类成分毛蕊花苷和异毛蕊花苷的含量；
所述的hplc-uv测定的步骤为：
(1)供试品溶液的制备；
称取密蒙花药材，加入体积浓度为30％-100％甲醇，重新称重，提取30-90min后，再称重，加体积浓度为30％-100％甲醇补足减少的重量，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液即为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备；
称取蒙花苷、木犀草素、毛蕊花苷和异毛蕊花苷，得混合对照品，向混合对照品中加入体积浓度为10％-100％的甲醇，制成混合对照品溶液；
(3)样品中黄酮类成分和苯乙醇苷类成分的测定；
取步骤(1)制备得到的供试品溶液、步骤(2)制备得到的混合对照品溶液分别注入高效液相色谱仪进行测定，获得色谱图，按外标一点法分别计算蒙花苷、木犀草素、毛蕊花苷和异毛蕊花苷的含量。
所述的高效液相色谱测定的条件为：
色谱柱：反相c18色谱柱；
流动相：以乙腈为a相，体积浓度为0.1％甲酸水溶液为b相；
梯度洗脱程序为：0-100min，a相：98％-10％；b相：2％-90％；
流速：1ml/min；
检测波长：330nm；
s2、以步骤(1)所测得黄酮类成分总量或苯乙醇苷类成分总量或步骤(1)所测得黄酮类成分和苯乙醇苷类成分的总量，结合黄酮类代表性成分蒙花苷与苯乙醇苷类代表性成分毛蕊花苷的峰面积比值，作为评价指标，用于评定密蒙花药材品质及质量控制的标准。
优选地，步骤s2中所述的黄酮类成分总量、苯乙醇苷类成分总量、黄酮类和苯乙醇苷类成分总量为算术总量或者为加权后计算的重量。
本发明还提供了上述质量控制方法在密蒙花提取物及其制剂的质量控制中的应用。
优选地，所述的密蒙花提取物为密蒙花药材的水提物或者乙醇提取物。
实施例1
一种密蒙花药材的质量控制方法，包括以下步骤：
s1、黄酮类和苯乙醇苷类成分测定
(1)供试品溶液的制备
分别取采自不同产地、不同批次的密蒙花药材粉末0.5g，精密称定，分别置于100ml具塞锥形瓶中，加入体积浓度为80％甲醇50ml，密塞，精密称定重量，超声提取60min，再精密称定重量，加体积浓度为80％甲醇补足减少的重量，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液即为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备
取蒙花苷、木犀草素、毛蕊花苷和异毛蕊花苷，加体积浓度80％甲醇制成含蒙花苷50.25μg/ml、木犀草素50.19μg/ml、毛蕊花苷49.98μg/ml和异毛蕊花苷50.08μg/ml的混合对照溶液；
(3)样品中黄酮类成分和苯乙醇苷类成分的测定
取步骤(1)制备得到的供试品溶液、步骤(2)制备得到的混合对照品溶液分别注入高效液相色谱仪进行测定，获得色谱图，按外标一点法分别计算蒙花苷、木犀草素、毛蕊花苷和异毛蕊花苷的含量。测定结果见表1。
以上所述的高效液相色谱测定的条件为：
色谱柱：hypersilc18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)
流动相：以乙腈为a相，体积浓度为0.1％甲酸水溶液为b相；
梯度洗脱程序为：
0-100min，a相：98％-10％；b相：2％-90％；
流速：1ml/min
检测波长：330nm。
表1密蒙花药材中黄酮类及苯乙醇苷类主要功效化学成分测定结果(％，n＝3)
(4)密蒙花药材质量评价标准的建立；
分别以步骤1所测得黄酮类和苯乙醇苷类成分总量，及蒙花苷与异毛蕊花苷的峰面积比值作为评价指标用于制定评价密蒙花药材品质的评价标准。
本发明根据检测结果，可以提供参照标准为:本发明检测的6批密蒙花药黄酮类成分总量平均值为1.12％，苯乙醇苷类成分总量平均值为1.30％，因此，可以黄酮类成分总量不低于0.8％、苯乙醇苷类成分总量不低于1.0％，且蒙花苷与毛蕊花苷峰面积比在0.5-3.0之间作为密蒙花药材的含量测定限量标准。
本发明通过建立黄酮类和苯乙醇苷类化学成分指标，用于密蒙花药材及其提取物与制剂的品质评价及质量控制，较现行密蒙花药材质量标准仅以蒙花苷一种成分作为含量测定指标，可更加全面地控制密蒙花产品的质量，同时本发明采用的hplc-uv检测方法，快速、简便、准确度好，可以客观、全面、准确地评价密蒙花药材及其提取物与制剂的质量，对控制密蒙花药材及其提取物与制剂的质量和保证临床疗效具有重要意义。