生物素-亲和素或链霉亲和素的无微球均相化学发光体系的制作方法

文档序号:19902940发布日期:2020-02-11 14:06阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于生物素-亲和素或生物素-链霉亲和素的无微球均相化学发光体系,其特征在于:包括:生物素标记的抗体或抗原、9,10-二氢吖啶标定的抗体或抗原、hrp标记的亲和素或链霉亲和素。

2.根据权利要求1所述的无微球均相化学发光体系,其特征在于:所述的制备hrp标记的亲和素或链霉亲和素的步骤如下:在1mghrp中加入60mmol/lnaio40.1ml于4℃作用30分钟,再加入0.1ml浓度0.16mol/l的乙二醇,30分钟后,加入1mga或sa,4℃静置24小时;透析过夜,加等体积的饱和硫酸铵溶液,4000r/min离心15分钟,将沉淀物溶解于pbs中,280nm下测吸光度并进行200-280nm波长扫描;用sephadexg-75装柱,hrp-sa或hrp-a上样100ul,用0.025mol/lkcl-0.2mol/l乙酸缓冲液,以0.5ml/2min的速度淋洗,分部收集;用du800紫外分光光度计测量收集各管样品的od280值,绘制洗脱曲线,收集单白峰,透析液用peg-2000进行浓缩;取1的hrp-sa或hrp-a和100ul去离子双蒸馏水,用紫外分光光度计在200-280nm波长扫描,至hrp-sa在280nm处有吸收峰。

3.根据权利要求2所述的无微球均相化学发光体系,其特征在于:所述的pbs的ph为7.4。

4.根据权利要求1所述的无微球均相化学发光体系,其特征在于:所述的制备生物素标记的抗体或抗原的步骤如下:将待生物素标记的抗原或抗体用缓冲液稀释到1-2.5ml,制得抗原或抗体溶液,所述缓冲液为0.1mol/l的碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/l的硼酸缓冲液;将1mg的nhsb溶解于1ml的dms0中,制得nhsb溶液;取1ml抗原或抗体溶液在其中加入120u1nhsb溶液,室温下搅拌,保温2-4小时,再向其中加入9.6μl浓度为1mol/l的nh4cl,搅拌10分钟;在4℃,对pbs进行透析,除去游离的生物素;将样品上1ml的分子筛柱,以pbs缓慢洗脱,收集1ml/管,抗原或抗体在1-3m1之间洗下;洗脱液中加入其体积50%的重蒸甘油,置于20℃保存。

5.根据权利要求4所述的无微球均相化学发光体系,其特征在于:所述的所述的碳酸氢钠缓冲液的ph为8.0。

6.根据权利要求5所述的无微球均相化学发光体系,其特征在于:所述的硼酸缓冲液的ph为8.6。

7.权利要求1-6所述的无微球均相化学发光体系定量测量抗原或抗体的方法,其特征在于:所述的方法步骤如下:s1、试剂配制:分别配制校准品、辅助剂和触发剂,制备生物素标记的抗体或抗原、9,10-二氢吖啶标定的抗体或抗原、hrp标记的亲和素或链霉亲和素;s2、加样:在校准品或样本中加入生物素标记的抗体或抗原、9,10-二氢吖啶标定的抗体或抗原、hrp标记的亲和素或链霉亲和素,震荡混匀,制得待测混合物a;s3、检测:在待测混合物a中加入辅助剂,震荡混匀,静置,加入触发剂,震荡混匀,制得待测混合物b,进行检测,读取发光值;s4、计算:对校准品的浓度和发光值进行logistic四参数拟合,通过样本rlu计算样本浓度。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:步骤s2中所述的校准品、样本、酶标记物、生物素标记物和发光标记物的加入体积为25ul。

9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:步骤s3中所述的辅助剂和触发剂的加入体积分别为5ul和75ul。

10.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:步骤s3中所述的静置时间为1-2分钟。

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