1.一种使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法,其特征在于,包括如下步骤,
采集细胞样本的步骤;
加入样本密度分离液的步骤:将细胞样本转移至离心管中,并往离心管中加入样本密度分离液,所述样本密度分离液是丙三醇与乙醇的混合溶液,丙三醇与乙醇的体积比为(1-2):(2-1);
重力离心步骤:离心管在800g~1000g离心力作用下离心1min~10min,完毕后,弃去上层废液,得到含有细胞样本的沉淀物;
制备细胞悬液步骤:往含有细胞样本的沉淀物的离心管中加入缓冲液,用漩涡混匀器将离心管底部的细胞打散,制成细胞悬液。
2.根据权利要求1所述的使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法,其特征在于,所述丙三醇与乙醇的体积比为(1-2):1,所述重力离心步骤为在800g离心力作用下离心5min。
3.根据权利要求1所述的使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法,其特征在于,还包括微重力离心步骤,加入样本密度分离液后先进行微重力离心步骤,再进行重力离心步骤,所述微重力离心步骤为:离心管在150g~200g离心力作用下离心1min~5min,完毕后将上层液体吸走。
4.根据权利要求3所述的使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法,其特征在于,所述丙三醇与乙醇的体积比为1:(2-1),所述微重力离心步骤为在200g离心力作用下离心2min。
5.根据权利要求1-4所述使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法,其特征在于,所述细胞样本为宫颈细胞样本,所述样本密度分离液与细胞样本的体积比为(3-7):(7-3),所述细胞沉淀物与缓冲液的体积比为1:1。
6.根据权利要求5所述使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法,其特征在于,所述细胞样本采集操作为:将宫颈标本采集刷刷头毛尖插入宫颈口,轻轻用力使刷头上的刷毛紧贴子宫颈口,用手捏住刷杆尾部,顺时针方向旋转五圈;取出采集刷,卸下刷头放入细胞保存液瓶中,封盖。
7.根据权利要求5所述使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法,其特征在于,所述样本密度分离液与细胞样本的体积比为4:6。
8.权利要求1-7任一所述使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法最终获得的细胞悬液。
9.一种免疫细胞染色方法,其特征在于,包括如下步骤:
将权利要求8所述的细胞悬液滴加到制片仓的载玻片上静止沉降,完成制片;
将上述载玻片用磷酸缓冲液冲洗,然后滴加内源性过氧化物酶阻断剂,室温下孵育;再用磷酸缓冲液冲洗,之后滴加封闭液,室温下孵育;
继续滴加稀释后的一抗溶液,32℃恒温水浴30~60min;然后用磷酸缓冲液冲洗,再滴加二抗溶液,32℃恒温水浴10~20min;再用磷酸缓冲液冲洗;最后滴加dab显色液。
10.根据权利要求9所述的免疫细胞染色方法,其特征在于,所述静止沉降时间为10min,所述磷酸缓冲液冲洗为用磷酸缓冲液冲洗3次,每次1~2分钟;所述室温下孵育时间为10~20min。