一种超高效检测样本中非法添加违禁成分的方法与流程

本发明涉及药物检测技术领域，具体涉及市售药品或者保健品中是否存在相关违禁添加成分的定性检定方法。

背景技术：

《麻醉药品和精神药品管理条例》中对麻醉药品和精神药品进行了详细的使用和销售管理规定，进出口相关药品对这类成分的添加均列为非法添加违禁药品，市面流通的镇痛类药物和提升兴奋类保健品中是否存在的相关成分的添加也是制得关注。

目前常见含量检测分析采用hplc法或lc/ms法对相关成分进行含量检测和定量，这类分析方法的测量是先选定目标进行定向和定量检测，但由于该类分析多种多样，且相关新型“毒”品层出不穷，这就给常规市售相关药品和保健品中的这类违禁添加成分的检测带来了很大挑战，无法在一针样本中做到快速确定样品中的违禁成分，存在漏检和错检的风险。

技术实现要素：

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种超高效检测样本中非法添加违禁成分的方法，其先将样品采用相应的提取方法后，使用c18色谱柱分离后通过uplc引入高分辨质谱，top-n采集样品质谱数据后进行给定数据库的匹配具有选择性好、灵敏度高、特异性强、准确度高和分析时间短等优点。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种超高效检测样本中非法添加违禁成分的方法，先将样品进行匀浆，再通过加入提取溶剂提取样品中的目标成分，然后使用c18色谱柱分离样品成分，样品经uplc引入高分辨质谱后进行数据库图谱比对分析。

优选的，其检测方法包含以下详细步骤：

s1、配制提取溶液：提取溶液包括20％dmso、77％can、0.1％fa和3％ddh2o，且每100ml提取溶液中含有20mldmso，77ml乙腈和3ml的超纯水，并向其中加入100ul的甲酸，以上溶液均为色谱级，且超纯水使用millipore超纯水机在25℃的条件下制得18.2mω*cm。

s2、样品前处理：称取0.5g的样品，加入0.5ml的匀浆溶液，组织研磨仪研磨混匀60s，取匀浆混匀后的溶液200ul，再加入步骤s1中所得的提取溶液800ul，涡旋混匀，超声30s辅助提取，然后使用12000g，常温离心15min，取800ul上清溶液进行真空干燥，再使用100ul的50％乙腈溶液复溶，使用12000g，常温离心10min后取上清进行lc-ms/ms分析，将采集的数据谱图使用tracefinder4.1(thermo)进行数据库图谱匹配；

所述的步骤s2中使用的lc-ms/ms分析中色谱洗脱方式如表1所示。

表1lc-ms/ms分析中色谱洗脱数据表

色谱柱：rp-c18150×2.1mm1.8um，welch；

流速：0.30ml/min；

水相：0.1％甲酸水溶液；

有机相：0.1％甲酸乙腈。

质谱条件设置：采用电喷雾电离正负离子(esi±)同时检测模式和数据依赖采集(fullmass/dd-ms2)的质谱扫描方式，离子源参数设置如下：sparyvoltage：3.5kv，auxgusheatertemp：350℃，capillarytemperature：300℃，sheathgasflowrate:40,auxgasflowrate：15，hcd：nce30，resolution：70000(fullmass)/17500(dd-ms2)。

优选的，所述步骤s2中匀浆溶液为10％的甲醇。

优选的，所述步骤s2中使用提取液是dmso：acn：h2o＝20:77:3，并向其中加入0.1％fa。

优选的，所述步骤s2中的样品是市售样品、保健品或者相关毒品稽查要求的法检血清样本。

优选的，所述步骤s2中使用的数据库信息来源于chemspider、metlin和mzcloud中收录的毒、麻、精类化合物的ms1和ms2信息数据。

优选的，所述步骤s2中液相色谱的梯度条件设置需根据实际使用的色谱柱来调整色谱洗脱梯度设置，以期达到样本中各个目标峰均匀分布互不干扰检测的目的。

(三)有益效果

本发明提供了一种超高效检测样本中非法添加违禁成分的方法。与现有技术相比具备以下有益效果：该超高效检测样本中非法添加违禁成分的方法，通过先将样品进行匀浆，再通过加入提取溶剂提取样品中的目标成分，然后使用c18色谱柱分离样品成分，样品经uplc引入高分辨质谱后进行数据库图谱比对分析，本发明方法选择性好、灵敏度高、特异性强、准确度高和分析时间短等优点，可在一针中定性到1000多种违禁成分，只需要鉴定的沉淀提取就可以完成多种负责样本的前处理步骤，使用c18色谱柱能有效分离各个成分，通过相应的数据库检索比对谱图，能够准确测定样品中的常见的毒、麻、精一类违禁成分，方法灵敏度，准确度和耐用性较高，可用于市售药物/保健品，进出口药物/保健品和法检要求的缉毒检测，而且实验操作简单，分析时间短，为市售药物/保健品，进出口药物/保健品中非法添加违禁成分的快速检定评估提供了一种可靠的检测方法，为科研和法检提供了一种有效的研究手段，能够最大限度的提取到样品中的目标分析物，可快速精确的确认样品是否含违禁添加的毒、麻、精成分，采用高分辨液质联用的方法具有灵敏度高，特异性强，准确度高和分析时间短等优点，为进口药物和保健品类海关进口药物中的未见添加部分的检定和公安系统中的缉毒检查提供快速检定的依据，对市场中的药品、保健品等是否违禁添加的毒，麻，精成分的检定和保障人类健康有极大的意义。

附图说明

图1为mslist数据库图；

图2为6针样本的tic谱图叠加图；

图3为定性检定图；

图4为离子对ms谱图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1-4，本发明实施例提供一种技术方案：一种超高效检测样本中非法添加违禁成分的方法，先将样品进行匀浆，再通过加入提取溶剂提取样品中的目标成分，然后使用c18色谱柱分离样品成分，样品经uplc引入高分辨质谱后进行数据库图谱比对分析。

本发明中，超高效检测样本中非法添加违禁成分的方法，包含以下详细步骤：

s1、配制提取溶液：提取溶液包括20％dmso、77％can、0.1％fa和3％ddh2o，且每100ml提取溶液中含有20mldmso，77ml乙腈和3ml的超纯水，并向其中加入100ul的甲酸，以上溶液均为色谱级，且超纯水使用millipore超纯水机在25℃的条件下制得18.2mω*cm。

s2、样品前处理：称取0.5g的样品，加入0.5ml的匀浆溶液，组织研磨仪研磨混匀60s，取匀浆混匀后的溶液200ul，再加入步骤s1中所得的提取溶液800ul，涡旋混匀，超声30s辅助提取，然后使用12000g，常温离心15min，取800ul上清溶液进行真空干燥，再使用100ul的50％乙腈溶液复溶，使用12000g，常温离心10min后取上清进行lc-ms/ms分析，将采集的数据谱图使用tracefinder4.1(thermo)进行数据库图谱匹配，匀浆溶液为10％的甲醇，使用提取液是dmso：acn：h2o＝20:77:3，并向其中加入0.1％fa，样品是市售样品、保健品或者相关毒品稽查要求的法检血清样本，使用的数据库信息来源于chemspider、metlin和mzcloud中收录的毒、麻、精类化合物的ms1和ms2信息数据，液相色谱的梯度条件设置需根据实际使用的色谱柱来调整色谱洗脱梯度设置，以期达到样本中各个目标峰均匀分布互不干扰检测的目的；

步骤s2中使用的lc-ms/ms分析中的高效液相的条件如下：

流动相a：0.1％甲酸水溶液；

流动相b：0.1％甲酸乙腈；

色谱柱型号：rp-c18150×2.1mm1.8um，welch；

流速：0.30ml/min，柱温为40℃，进样量5ul。

质谱条件设置：采用电喷雾电离正负离子(esi±)同时检测模式和数据依赖采集(fullmass/dd-ms2)的质谱扫描方式，离子源参数设置如下：sparyvoltage：3.5kv，auxgusheatertemp：350℃，capillarytemperature：300℃，sheathgasflowrate:40,auxgasflowrate：15，hcd：nce30，resolution：70000(fullmass)/17500(dd-ms2)。

hcd：nce30，resolution：70000(fullmass)/17500(dd-ms2)。

下面对本实施例的结果做进一步分析，以验证本发明专利提供的方法可行性，采用非靶向采集样本数据，然后将采集的数据谱图使用tracefinder4.1(thermo)进行数据库(自建)图谱匹配起结果如下，设置ms1偏差10ppm，ms2偏差10ppm，s/n＞100进行提峰比对，匹配中优先ms偏差运算。

样本中tic图各个分析物基本分离，各分析物之间图谱干扰较小，满足定性要求，且能快速，稳定和准确的定性鉴定其中目标化合物(非法添加的毒、麻、精类化合物)，该样本中共定性到43个非法添加违禁成分(毒、麻、精)分析物，可进一步采用定性到的标准品进行mrm含量确认。

综上所述

本发明方法选择性好、灵敏度高、特异性强、准确度高和分析时间短等优点，可在一针中定性到1000多种违禁成分，只需要鉴定的沉淀提取就可以完成多种负责样本的前处理步骤，使用c18色谱柱能有效分离各个成分，通过相应的数据库检索比对谱图，能够准确测定样品中的常见的毒、麻、精一类违禁成分，方法灵敏度，准确度和耐用性较高，可用于市售药物/保健品，进出口药物/保健品和法检要求的缉毒检测，而且实验操作简单，分析时间短，为市售药物/保健品，进出口药物/保健品中非法添加违禁成分的快速检定评估提供了一种可靠的检测方法，为科研和法检提供了一种有效的研究手段，能够最大限度的提取到样品中的目标分析物，可快速精确的确认样品是否含违禁添加的毒、麻、精成分，采用高分辨液质联用的方法具有灵敏度高，特异性强，准确度高和分析时间短等优点，为进口药物和保健品类海关进口药物中的未见添加部分的检定和公安系统中的缉毒检查提供快速检定的依据，对市场中的药品、保健品等是否违禁添加的毒，麻，精成分的检定和保障人类健康有极大的意义。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。