1.一种联合检验新型冠状病毒covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡,所述检测卡由卡壳、设置于卡壳上的两个加样孔和含有covid-19n抗原检测试纸条或covid-19s蛋白抗体检测试纸条的两个观察窗构成,其特征在于:
所述卡壳上的加样孔与观察窗间隔状直线排列,每组加样孔与观察窗同方向设置且间隔状平行排列;所述covid-19n抗原检测试纸条由依次相连的第一样品垫、第一结合垫、第一反应垫和第一吸水垫构成;其中所述第一结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒covid-19n蛋白单克隆抗体,所述第一反应垫上沿样品流动方向依次设有第一检测线和第一质控线,第一检测线上包被有新型冠状病毒covid-19n蛋白捕获抗体,第一质控线上包被有羊抗鼠igg抗体;所述covid-19s蛋白抗体检测试纸条由依次相连的第二样品垫、第二结合垫、第二反应垫和第二吸水垫构成;其中所述第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒covid-19重组s蛋白抗原;所述第二反应垫上沿样品流动方向依次设有第二检测线、第三检测线和第二质控线,第二检测线上包被有抗人igm抗体,所述第三检测线上包被有抗人igg抗体,第二质控线上包被有羊抗鼠igg抗体;所述covid-19n抗原检测试纸条或covid-19s蛋白抗体检测试纸条分别设置在卡壳上的每组加样孔与观察窗所在的位置,每组中的加样孔与所述第一样品垫或第二样品垫相对应,组中相应的观察窗与所述第一反应垫或第二反应垫相对应;所述第一反应垫上的第一检测线与第一质控线的间距不少于1cm,所述第二反应垫上第二检测线、第三检测线和第二质控线之间的距离不少于1cm。
2.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡,其特征在于:所述胶体金标记中所采用的胶体金的粒径为20-30nm;胶体金的质量比浓度为万分之六。
3.根据权利要求1或2所述的联合检验新型冠状病毒covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡,其特征在于:所述新型冠状病毒covid-19n蛋白单克隆抗体与胶体金的结合浓度为每100ml体金浓液加入0.8mgn蛋白单克隆抗体;所述新型冠状病毒covid-19重组s蛋白抗原与胶体金的结合浓度为每100ml体金浓液加入0.8mg重组s蛋白抗原。
4.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡,其特征在于:第一检测线上包被有浓度为1.2mg/ml的新型冠状病毒covid-19n蛋白捕获抗体;第二检测线上包被有浓度为1.8mg/ml的抗人igm抗体,所述第三检测线上包被有浓度为1.6mg/ml的抗人igg抗体。
5.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡,其特征在于:第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒covid-19重组s蛋白抗原及鼠igg,其中重组s蛋白抗原与鼠igg的体积比为2:1。
6.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡,其特征在于:所述第一或第二样品垫采用玻纤sb06,所述第一或第二结合垫为玻纤8965,所述第一或第二反应垫为赛多利斯cn140。
7.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡,其特征在于,所述新型冠状病毒covid-19n蛋白以如下方法制得:
克隆新型冠状病毒covid-19n蛋白基因序列,将其连入表达载体pet-28,构建重组表达载体pet-28-n,经测序鉴定正确后转化至表达菌e.colirosetta中,以iptg诱导蛋白表达,收集发酵产物进行超声破碎,经ni柱纯化即制得新型冠状病毒covid-19n蛋白;其中,所述表达载体pet-28的n端、c端均带有6×his标签。
8.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡,其特征在于,所述新型冠状病毒covid-19重组s蛋白以如下方法制得:
克隆新型冠状病毒covid-19s蛋白中s1域rbd的基因序列;将该基因序列插入带有ppiczα的表达载体中构建重组表达载体,经测序鉴定正确后以此表达载体转染酵母gs115细胞,收集发酵产物进行超声破碎,再通过ni亲和纯化柱进行蛋白纯化制得新型冠状病毒covid-19重组s蛋白。
9.权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡作为判定新型冠状病毒covid-19有无测试装置的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述的联合检验新型冠状病毒covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡的使用方法是:
将被测样品溶液分别滴加到covid-19n抗原检测试纸条和covid-19s蛋白抗体检测试纸条的样品垫上,其中所述被测样品是人血清、血浆或全血样本;待5~20分钟后,根据检测线和质控线的显色情况,判断样品中是否含有新型冠状病毒covid-19n抗原和s蛋白抗体,判断方法如下:
对于covid-19n抗原检测试纸条,1)阳性:第一质控线、第一检测线均呈现红色条带,说明样品中含有新型冠状病毒covid-19n抗原;2)阴性:第一质控线呈现红色条带,第一检测线不呈现红色条带,说明样品中不含新型冠状病毒covid-19n抗原;3)失效:第一质控线、第一检测线均不呈现红色条带或仅有第一检测线呈现红色条带,说明covid-19n抗原检测试纸条失效;
对于和covid-19s蛋白抗体检测试纸条,1)阳性:第二质控线、第二检测线均呈现红色条带,第三检测线不呈现红色条带,说明样品中含有新型冠状病毒covid-19igm抗体;第二质控线、第三检测线均呈现红色条带,第二检测线不呈现红色条带,说明样品中含有新型冠状病毒covid-19igg抗体;2)阴性:第二质控线呈现红色条带,第二检测线和第三检测线均不呈现红色条带,说明样品中不含新型冠状病毒covid-19s蛋白抗体;3)失效:无论第二检测线、第三检测线是否呈现红色条带,第二质控线不呈现红色条带时,说明covid-19抗体检测试纸条失效。