[0001]
本发明属于氘同位素丰度技术领域，涉及一种利用核磁氢谱或氘谱测定氘标记化合物的氘同位素丰度的方法。
背景技术：
[0002]
稳定同位素氘标记试剂是科研工作中必不可少的试剂，除了大量用于核磁溶剂外，氘标记化合物也被广泛地应用于蛋白质组学(氘标记氨基酸类，用于silac定量检测等)、新生儿代谢遗传病筛查(氘标记肉碱等化合物)、氘标记药物(2017年氘标记丁苯那嗪(sd-809)获得fda批准上市)、食品安全(农兽药物残留检测用氘标记内标试剂)、分子砌块(氘标记基础试剂用于新药与定制试剂的研发)和现代农业(氘标记茉莉酸等内源植物激素)等领域。
[0003]
目前，氘标记化合物同位素丰度检测方法主要有稳定同位素比值质谱法、气相色谱法、红外光谱法、拉曼光谱法、质谱法和核磁共振波谱法，前四种适用范围相对狭窄，质谱法是目前最常用的测试手段。然而，由于化合物的极性、沸点等性质各不相同，仍有一些化合物通过常规的质谱法是无法准确计算。与质谱法相比，核磁可以准确的反映出氘原子所处的化学环境和氘原子的结构位点信息。这一特性为研究开发多位点氘标记化合物提供位点信息的技术支持。
[0004]
核磁共振波谱法主要是利用定量核磁共振技术(quantitative nuclear magnetic resonance，qnmr)，qnmr是采用内标法通过谱峰的积分面积来测得氘标记化合物中氢(1h)的含量，进而求得氘标记化合物的同位素丰度，同时也可以获得氘标记位点的信息。
[0005]
goldblatt m等人(goldblatt m,jones w h.determination of the deuterium content of a sample of deuterium oxide by three methods[j].analytical chemistry,1964,36(2):431-432.)在1964年利用1h nmr对重水进行了氘同位素丰度的检测，仅仅只是证实了核磁可以进行氘同位素丰度测试，未给出具体测试条件。ma x,deng等人[ma x,deng p,wang x,et al.direct determination of deuterium of wide concentration range in water by nuclear magnetic resonance[j].talanta,2012:450-455.]在2012年利用1h nmr或2h nmr同样对重水进行了氘同位素丰度的检测，氘同位素丰度范围从自然丰度(0.015atom％d)到100％，回收率在95％～110％，实现了重水的快速检测。通过检索发现，现有的氘同位素丰度核磁共振检测方法主要围绕着重水进行展开的，利用已知的氘同位素丰度值与测得的相对峰面积进行线性拟合得出校准曲线，将被测物测试的相对峰面积带入校准曲线即可求出氘同位素丰度值，主要采用的是相对定量法，同时内标物的选择比较单一，在更换内标物或被测物时，检测方法需要重新优化，并未研究不同的内标物对定量结果的影响。
技术实现要素：
[0006]
本发明的目的就是为了提供一种利用核磁氢谱或氘谱测定氘标记化合物的氘同位素丰度的方法，以简化测试过程，提高测试数据准确度和适用范围。
[0007]
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0008]
一种利用核磁氢谱或氘谱测定氘标记化合物的氘同位素丰度的方法，包括以下步骤：
[0009]
(1)称取氘标记化合物、内标物和氘代溶剂装入核磁管中；
[0010]
(2)再将核磁管放入核磁仪器的进样器中，运行并进样测试；
[0011]
(3)对测试后的核磁图谱进行峰面积积分，并根据积分后的峰面积计算得到氘标记化合物的氘同位素丰度。
[0012]
进一步的，所述的氘标记化合物选自重水、氘重氧水、氘代甲醇、氘代乙醇、氘代丙酮、氘代苯、氘代甲苯、氘代氯仿、氘代二甲基亚砜、氘代n,n-二甲基甲酰胺、氘代碘甲烷、氘代碘苯、氘代溴苯、氘代氯苯、邻苯二甲酸二甲酯-d4、氘代乙腈、氘代四氢呋喃、氘代邻二甲苯或含有氘原子的化合物中的一种或多种。
[0013]
进一步的，所述的内标物为n,n-二甲基甲酰胺、马来酸、富马酸、乙酸、二甲基砜、乙醇、丙酮、1.2.4-三甲氧基苯、对羟基苯甲酸乙酯、邻苯二甲酸二甲酯、甲苯、乙酸、苯甲酸、氘代甲醇、氘代乙醇、氘代丙酮、氘代碘苯、氘代n,n-二甲基甲酰胺、重水、氘代甲苯、氘代二甲基亚砜、氘代乙腈、氘代四氢呋喃、氘代邻二甲苯化合物中的一种或多种。
[0014]
进一步的，所述的氘代溶剂为重水、氘代甲醇、氘代乙醇、氘代丙酮、氘代苯、氘代甲苯、氘代氯仿、氘代二甲基亚砜、氘代n,n-二甲基甲酰胺、氘代碘甲烷、氘代碘苯、氘代溴苯、氘代氯苯、氘代乙腈或氘代四氢呋喃中的一种或多种。
[0015]
进一步的，步骤(1)中，氘标记化合物的取样量为1mg～1000mg，对应的，内标物的取样量为0mg～1000mg，氘代溶剂的取样量为0mg～1000mg。当内标物或氘代溶剂的取样量为0时，则表示此时内标物或氘代溶剂无需添加。将精密称量的样品和内标物混合配制成溶液，通过比较样品指定峰的峰面积与内标物的峰面积计算样品的氘含量，内标物起到定量作用；氘代溶剂为液体，是将样品和内标物溶解到液体中，同时作为核磁定标使用。对于部分氘标记化合物测试时不需要加入内标物，全部氘标记化合物测试是需加入内标物；当被测试样品是固体时，需加入氘代溶剂，当被测试样品为溶液时可以不加入氘代溶剂。
[0016]
进一步的，步骤(2)中，核磁仪器的运行参数为：弛豫延迟时间为0.1s～10h；脉冲角为30℃～90℃；扫描次数为1～2000次；检测频率：400mhz～1000mhz；谱宽：-2.5ppm～12.5ppm；采集时间：0.5s～10s。
[0017]
进一步的，测试的核磁图谱为核磁氢谱或核磁氘谱。
[0018]
更进一步的，所测试得到的核磁图谱为核磁氢谱，适用于部分氘标记化合物的测定，对应氘标记化合物氘同位素丰度值的计算公式如下：
[0019][0020]
其中，d
i
为氘标记化合物氘同位素丰度值，单位atom％d；n
x
为氘标记化合物指定峰的氢原子个数；n
y
为非标记部分指定峰的氢原子个数；i
x
为氘标记指定峰的1h nmr峰面积；i
y
为非标记部分指定峰的1h nmr峰面积。
[0021]
例如：ch3ch2od，n
x
为1；当选择甲基作为指定峰时n
y
为3，当选择亚甲基作为指定峰时n
y
为2。
[0022]
更进一步的，所测试得到的核磁图谱为核磁氢谱，适用于全部氘标记化合物的测定，对应氘标记化合物氘同位素丰度值的计算公式如下：
[0023][0024]
其中，d
i
为氘标记化合物的氘同位素丰度值，单位atom％d；p为氘标记化合物的真实含量值(通过色谱、密度、dsc等常规测试手段获取)；h
y
为非标记部分指定峰1h nmr检测的含量值；
[0025][0026]
其中，h
y
为非标记部分指定峰1h nmr检测的含量值；m
内
为内标物质的质量，单位mg；m
y
为氘标记化合物的质量，单位mg；n
内
为内标物质指定峰的氢原子个数；n
y
为非标记部分指定峰的氢原子个数；m
内
为内标物质的分子量；m
y
为氘标记化合物未氘标记的分子量；i
内
为内标物质指定峰的1h nmr积分面积；i
y
为非标记部分指定峰的1h nmr积分面积；h
内
为内标物纯度。
[0027]
例如：样品为碘苯-d5、内标物为马来酸；m
内
和m
y
天平称量得到、马来酸指定峰n
内
为2、碘苯指定峰n
y
为5、马来酸分子量m
内
为116.07、碘苯分子量m
y
为198.21、i
内
和i
y
为核磁峰面积、h
内
为马来酸纯度99.4％、p为碘苯-d5纯度。
[0028]
更进一步的，所测试得到的核磁图谱为核磁氢谱，则氘标记化合物氘同位素丰度值的计算公式如下：
[0029][0030]
其中，d
i
为氘标记化合物的氘同位素丰度值，单位atom％d；m
内
为氘标记内标物质的质量，单位mg；m
d
为氘标记化合物的质量，单位mg；n
内
为氘标记内标物质指定峰的氘原子个数；n
d
为氘标记部分指定峰的氘原子个数；m
内
为氘标记内标物质的分子量；m
d
为氘标记化合物的分子量；i
内
为氘标记内标物质指定峰的2h nmr积分面积；i
d
为氘标记部分指定峰的2h nmr积分面积。
[0031]
例如：样品为二甲基亚砜-d6、内标物为氘代乙醇，m
内
和m
d
天平称量得到、氘代乙醇甲基指定峰n
内
为3、二甲基亚砜-d6指定峰n
d
为6、氘代乙醇分子量m
内
为52.11、二甲基亚砜-d6分子量m
d
为84.17、i
内
和i
d
为核磁峰面积。
[0032]
本发明采用绝对定量法通过谱峰的积分面积来测得氘标记化合物中氢(1h)的含量，间接地求得氘同位素丰度值，除此之外还可以获得氘标记位点的信息。基于2h nmr的定量核磁共振技术，采用绝对定量法通过谱峰的积分面积来测得氘标记化合物中氘(d)的含量，直接地求得氘同位素丰度值。本发明在更换内标物的同时，无须重新优化检测方法及线性拟合校准曲线，因此本发明提供的检测技术适用范围广泛。
[0033]
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
[0034]
(1)与常规质谱法相比，由于化合物的极性、沸点等性质各不相同，仍有一些(氘代
苯、氘代甲醇、氘代乙醇等)化合物通过常规的质谱法是无法准确计算。与质谱法相比，核磁可以准确的反映出氘原子所处的化学环境和氘原子的结构位点信息。
[0035]
(2)现有的核磁检测方法主要是围绕重水进行测试的，利用相对法，建立拟合标准曲线来进行定量分析，在更换内标物或被测氘标记化合物时均需要重新优化检测方法，同时需要重新拟合标准曲线。本发明利用的是绝对法，在更换内标物或被测氘标记化合物时，无须重新优化检测方法及线性拟合校准曲线，因此本发明提供的检测技术适用范围广泛。
具体实施方式
[0036]
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。本实施例以本发明技术方案为前提进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
[0037]
以下各实施方式或实施例中，所用的核磁仪器即jeol jnm-ecz 500mhz超导核磁共振谱仪，如无特别说明的原料或处理技术，则表明其均为本领域的常规市售产品或常规市售原料。
[0038]
一种利用核磁氢谱或氘谱测定氘标记化合物的氘同位素丰度的方法，包括以下步骤：
[0039]
(1)称取氘标记化合物、内标物和氘代溶剂装入核磁管中；
[0040]
(2)再将核磁管放入核磁仪器的进样器中，运行并进样测试；
[0041]
(3)对测试后的核磁图谱进行峰面积积分，并根据积分后的峰面积计算得到氘标记化合物的氘同位素丰度。
[0042]
在本发明的一种具体的实施方式中，所述的氘标记化合物选自重水、氘重氧水、氘代甲醇、氘代乙醇、氘代丙酮、氘代苯、氘代甲苯、氘代氯仿、氘代二甲基亚砜、氘代n,n-二甲基甲酰胺、氘代碘甲烷、氘代碘苯、氘代溴苯、氘代氯苯、邻苯二甲酸二甲酯-d4、氘代乙腈、氘代四氢呋喃、氘代邻二甲苯或含有氘原子的化合物中的一种或多种。
[0043]
在本发明的一种具体的实施方式中，所述的内标物为n,n-二甲基甲酰胺、马来酸、富马酸、乙酸、二甲基砜、乙醇、丙酮、1.2.4-三甲氧基苯、对羟基苯甲酸乙酯、邻苯二甲酸二甲酯、甲苯、乙酸、苯甲酸、氘代甲醇、氘代乙醇、氘代丙酮、氘代碘苯、氘代n,n-二甲基甲酰胺、重水、氘代甲苯、氘代二甲基亚砜、氘代乙腈、氘代四氢呋喃、氘代邻二甲苯化合物中的一种或多种。
[0044]
在本发明的一种具体的实施方式中，所述的氘代溶剂为重水、氘代甲醇、氘代乙醇、氘代丙酮、氘代苯、氘代甲苯、氘代氯仿、氘代二甲基亚砜、氘代n,n-二甲基甲酰胺、氘代碘甲烷、氘代碘苯、氘代溴苯、氘代氯苯、氘代乙腈或氘代四氢呋喃中的一种或多种。
[0045]
在本发明的一种具体的实施方式中，步骤(1)中，氘标记化合物的取样量为1mg～1000mg，对应的，内标物的取样量为0mg～1000mg，氘代溶剂的取样量为0mg～1000mg。当内标物或氘代溶剂的取样量为0时，则表示此时内标物或氘代溶剂无需添加。
[0046]
将精密称量的样品和内标物混合配制成溶液，通过比较样品指定峰的峰面积与内标物的峰面积计算样品的氘含量，内标物起到定量作用；氘代溶剂为液体，是将样品和内标物溶解到液体中，同时作为核磁定标使用。对于部分氘标记化合物测试时不需要加入内标物，全部氘标记化合物测试是需加入内标物；当被测试样品是固体时，需加入氘代溶剂，当
被测试样品为溶液时可以不加入氘代溶剂。
[0047]
在本发明的一种具体的实施方式中，步骤(2)中，核磁仪器的运行参数为：弛豫延迟时间为0.1s～10h；脉冲角为30℃～90℃；扫描次数为1～2000次；检测频率：400mhz～1000mhz；谱宽：-2.5ppm～12.5ppm；采集时间：0.5s～10s。
[0048]
在本发明的一种具体的实施方式中，测试的核磁图谱为核磁氢谱或核磁氘谱。
[0049]
更具体的实施方式中，所测试得到的核磁图谱为核磁氢谱，适用于部分氘标记化合物的测定，对应氘标记化合物氘同位素丰度值的计算公式如下：
[0050][0051]
其中，d
i
为氘标记化合物氘同位素丰度值，单位atom％d；n
x
为氘标记化合物指定峰的氢原子个数；n
y
为非标记部分指定峰的氢原子个数；i
x
为氘标记指定峰的1h nmr峰面积；i
y
为非标记部分指定峰的1h nmr峰面积。
[0052]
例如：ch3ch2od，n
x
为1；当选择甲基作为指定峰时n
y
为3，当选择亚甲基作为指定峰时n
y
为2。
[0053]
更具体的实施方式中，所测试得到的核磁图谱为核磁氢谱，适用于全部氘标记化合物的测定，对应氘标记化合物氘同位素丰度值的计算公式如下：
[0054][0055]
其中，d
i
为氘标记化合物的氘同位素丰度值，单位atom％d；p为氘标记化合物的真实含量值(通过色谱、密度、dsc等常规测试手段获取)；h
y
为非标记部分指定峰1h nmr检测的含量值；
[0056][0057]
其中，h
y
为非标记部分指定峰1h nmr检测的含量值；m
内
为内标物质的质量，单位mg；m
y
为氘标记化合物的质量，单位mg；n
内
为内标物质指定峰的氢原子个数；n
y
为非标记部分指定峰的氢原子个数；m
内
为内标物质的分子量；m
y
为氘标记化合物未氘标记的分子量；i
内
为内标物质指定峰的1h nmr积分面积；i
y
为非标记部分指定峰的1h nmr积分面积；h
内
为内标物纯度。
[0058]
例如：样品为碘苯-d5、内标物为马来酸；m
内
和m
y
天平称量得到、马来酸指定峰n
内
为2、碘苯指定峰n
y
为5、马来酸分子量m
内
为116.07、碘苯分子量m
y
为198.21、i
内
和i
y
为核磁峰面积、h
内
为马来酸纯度99.4％、p为碘苯-d5纯度。
[0059]
更具体的实施方式中，所测试得到的核磁图谱为核磁氢谱，则氘标记化合物氘同位素丰度值的计算公式如下：
[0060][0061]
其中，d
i
为氘标记化合物的氘同位素丰度值，单位atom％d；m
内
为氘标记内标物质的质量，单位mg；m
d
为氘标记化合物的质量，单位mg；n
内
为氘标记内标物质指定峰的氘原子
个数；n
d
为氘标记部分指定峰的氘原子个数；m
内
为氘标记内标物质的分子量；m
d
为氘标记化合物的分子量；i
内
为氘标记内标物质指定峰的2h nmr积分面积；i
d
为氘标记部分指定峰的2h nmr积分面积。
[0062]
例如：样品为二甲基亚砜-d6、内标物为氘代乙醇，m
内
和m
d
天平称量得到、氘代乙醇甲基指定峰n
内
为3、二甲基亚砜-d6指定峰n
d
为6、氘代乙醇分子量m
内
为52.11、二甲基亚砜-d6分子量m
d
为84.17、i
内
和i
d
为核磁峰面积。
[0063]
以上各实施方式可以任一单独实施，也可以任意两两组合或更多的组合实施。
[0064]
下面结合具体实施例来对上述实施方式进行更详细的说明。
[0065]
实施例1：
[0066]
部分氘标记化合物氢谱定量——乙醇-d(市售氘标记化学试剂，氘同位素丰度值99.5atom％d)同位素丰度分析，包括以下步骤：
[0067]
(1)称取500mg乙醇-d装入核磁管中；
[0068]
(2)设置核磁仪器参数，弛豫延迟时间为5s、脉冲角为30℃、扫描次数为32次、检测频率为500mhz、谱宽：-2.5ppm～12.5ppm、采集时间：2.1s，将核磁管放入进样器中，运行核磁仪器，进样测试；
[0069]
(3)利用核磁软件对测试后的平行样的谱图进行峰面积积分，第一组：n
x
为1、n
y
为3；i
x
为0.52、i
y
为300；第二组：n
x
为1、n
y
为3；i
x
为0.48、i
y
为300；
[0070]
将积分后的峰面积带入公式计算平行样的氘同位素丰度分别为99.48atom％d、99.52atom％d，平均值为99.5atom％d。
[0071]
将其所测数据与市售试剂乙醇-d的标示值行比较，结果基本一致，可见，本发明的同位素丰度测定方法也具有非常高的测量准确度。
[0072]
实施例2：
[0073]
部分氘标记化合物氢谱定量——邻苯二甲酸二甲酯-d4同位素丰度分析，包括以下步骤：
[0074]
(1)称取20mg邻苯二甲酸二甲酯-d4、500mg氘代乙醇装入核磁管中；
[0075]
(2)设置核磁仪器参数，弛豫延迟时间为50s、脉冲角为60℃、扫描次数为1600次、检测频率为500mhz、谱宽：0ppm～15ppm、采集时间：3.8s，将核磁管放入进样器中，运行核磁仪器，进样测试；
[0076]
(3)利用核磁软件对测试后的平行样的谱图进行峰面积积分，第一组：n
x
为4、n
y
为6；i
x
为3.55、i
y
为600；第二组：n
x
为4、n
y
为6；i
x
为3.48.、i
y
为600；
[0077]
将积分后的峰面积带入公式计算平行样的氘同位素丰度分别为99.11atom％d、99.13atom％d，平均值为99.1atom％d。
[0078]
而对同样的邻苯二甲酸二甲酯-d4，采用现有的质谱法，平行测试结果分别为99.08atom％d和99.00atom％d，平均值99.0atom％d，两种方法的测定结果基本一致，可见，本发明的同位素丰度测定方法也具有非常高的测量准确度。
[0079]
实施例3：
[0080]
全部氘标记化合物氢谱定量——碘苯-d5同位素丰度分析，包括以下步骤：
[0081]
(1)分别称取300mg碘苯-d5、10mg马来酸、300mg氘代丙酮甲醇装入核磁管中；
[0082]
(2)设置核磁仪器参数，弛豫延迟时间为6000s、脉冲角为30℃、扫描次数为10次、检测频率为500mhz、谱宽：0ppm～10ppm、采集时间：6.6s，将核磁管放入进样器中，运行核磁仪器，进样测试；
[0083]
(3)利用核磁软件对测试后的平行样的谱图进行峰面积积分，第一组：m
内
为10.1mg、m
y
为300.4mg、n
内
为2、n
y
为5、m
内
为116.07、m
y
为198.21、i
内
为2000、i
y
为336.9、h
内
为99.4％、p为99.2％；第二组：m
内
为10.7mg、m
y
为300.9mg、n
内
为2、n
y
为5、m
内
为116.07、m
y
为198.21、i
内
为2000、i
y
为348.1、h
内
为99.4％、p为99.2％；将积分后的峰面积带入公式和公式计算平行样的氘同位素丰度分别为99.61atom％d、99.58atom％d，平均值为99.6atom％d。
[0084]
同样的，对碘苯-d5采用现有的质谱法进行测试，平行测试结果分别为99.60atom％d和99.64atom％d，平均值99.6atom％d，两种方法的测定结果基本一致，可见，本发明的同位素丰度测定方法也具有非常高的测量准确度。
[0085]
实施例4：
[0086]
全部氘标记化合物氢谱定量——氘代甲醇-d4(市售氘标记化学试剂，氘同位素丰度值99.8atom％d)同位素丰度分析，包括以下步骤：
[0087]
(1)分别称取400mg甲醇-d4、200mg n,n-二甲基甲酰胺、100mg氘代氯仿装入核磁管中；
[0088]
(2)设置核磁仪器参数，弛豫延迟时间为600s、脉冲角为45℃、扫描次数为32次、检测频率为600mhz、谱宽：-2.5ppm～10ppm、采集时间：5.2s，将核磁管放入进样器中，运行核磁仪器，进样测试；
[0089]
(3)利用核磁软件对测试后的平行样的谱图进行峰面积积分，第一组：m
内
为201.4mg、m
y
为413.5mg、n
内
为6、n
y
为3、m
内
为73.09、m
y
为32.04、i
内
为6000、i
y
为56.15、h
内
为99.5％、p为99.8％；第二组：m
内
为217.9mg、m
y
为417.8mg、n
内
为6、n
y
为3、m
内
为73.09、m
y
为32.04、i
内
为6000、i
y
为52.19、h
内
为99.5％、p为99.8％；将积分后的峰面积带入公式和公式计算平行样的氘同位素丰度分别为99.60atom％d、99.60atom％d，平均值为99.6atom％d。
[0090]
将上述测试数据与市售氘代甲醇-d4试剂的标示值进行比较，结果相当，可见，本发明的同位素丰度测定方法也具有非常高的测量准确度。
[0091]
实施例5：
[0092]
全部氘标记化合物氢谱定量——重水(市售氘标记化学试剂，氘同位素丰度值99.8atom％d)同位素丰度分析，包括以下步骤：
[0093]
(1)分别称取400mg重水、5mg二甲基亚砜装入核磁管中；
[0094]
(2)设置核磁仪器参数，弛豫延迟时间为5s、脉冲角为90℃、扫描次数为16次、检测频率为400mhz、谱宽：0ppm～12.5ppm、采集时间：1s，将核磁管放入进样器中，运行核磁仪
器，进样测试；
[0095]
(3)利用核磁软件对测试后的平行样的谱图进行峰面积积分，第一组：m
内
为5.1mg、m
y
为431.8mg、n
内
为6、n
y
为2、m
内
为78.13、m
y
为18.02、i
内
为600、i
y
为83.15、h
内
为99.9％、p为99.5％；第二组：m
内
为6.1mg、m
y
为424.7mg、n
内
为6、n
y
为2、m
内
为78.13、m
y
为18.02、i
内
为600、i
y
为47.93、h
内
为99.9％、p为99.5％；将积分后的峰面积带入公式和公式计算平行样的氘同位素丰度分别为99.89atom％d、99.92atom％d，平均值为99.9atom％d。
[0096]
同时，对上述重水原料采用现有的核磁法进行测试，所得平行测试结果分别为99.88atom％d和99.86atom％d，平均值99.9atom％d，两种方法的测定结果基本一致，且与市售试剂的标示值也相当，可见，本发明的同位素丰度测定方法也具有非常高的测量准确度。
[0097]
实施例6：
[0098]
氘谱定量——苯-d6(市售氘标记化学试剂，氘同位素丰度值99.5atom％d)同位素丰度分析，包括以下步骤：
[0099]
(1)分别称取300mg丙酮-d6、300mg氘代甲苯装入核磁管中；
[0100]
(2)设置核磁仪器参数，弛豫延迟时间为400s、脉冲角为30℃、扫描次数为200次、检测频率为500mhz、谱宽：0ppm～14.5ppm、采集时间：2.8s，将核磁管放入进样器中，运行核磁仪器，进样测试；
[0101]
(3)利用核磁软件对测试后的平行样的谱图进行峰面积积分，第一组：m
内
为315.8mg、m
d
为338.5mg、n
内
为5、n
d
为6、m
内
为100.19、m
d
为64.12、i
内
为500、i
d
为1002；第二组：m
内
为323.7mg、m
d
为339.8mg、n
内
为5、n
d
为6、m
内
为100.19、m
d
为64.12、i
内
为500、i
d
为978；将积分后的峰面积带入公式计算平行样的氘同位素丰度分别为99.61atom％d、99.28atom％d，平均值为99.4atom％d。
[0102]
将上述测试数据与市售苯-d6试剂标示值进行比较，结果相当，可见，本发明的同位素丰度测定方法也具有非常高的测量准确度。
[0103]
实施例7：
[0104]
氘谱定量——二甲基亚砜-d6(市售氘标记化学试剂，氘同位素丰度值99.9atom％d)同位素丰度分析，包括以下步骤：
[0105]
(1)分别称取100mg二甲基亚砜-d6、600mg氘代乙醇装入核磁管中；
[0106]
(2)设置核磁仪器参数，弛豫延迟时间为30s、脉冲角为30℃、扫描次数为100次、检测频率为500mhz、谱宽：-2.5ppm～12.5ppm、采集时间：4.1s，将核磁管放入进样器中，运行核磁仪器，进样测试；
[0107]
(3)利用核磁软件对测试后的平行样的谱图进行峰面积积分，第一组：m
内
为95.4mg、m
d
为579.3mg、n
内
为3、n
d
为6、m
内
为52.11、m
d
为84.17、i
内
为300、i
d
为2252；第二组：m
内
为93.8mg、m
d
为592.1mg、n
内
为3、n
d
为6、m
内
为52.11、m
d
为84.17、i
内
为300、i
d
为2343；将积分后
的峰面积带入公式计算平行样的氘同位素丰度分别为99.84atom％d、99.92atom％d，平均值为99.9atom％d。
[0108]
将上述测试数据与市售二甲基亚砜-d6试剂标示值进行比较，结果相当，可见，本发明的同位素丰度测定方法也具有非常高的测量准确度。
[0109]
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。