一种液基脱落细胞染色液及染色方法与流程

1.本发明涉及医疗试剂技术领域，尤其涉及一种液基脱落细胞染色液及染色方法。


背景技术：

2.苏木精伊红染色方法，简称he染色，常用于脱落细胞染色；将细胞涂片分别经过苏木素染色液和伊红染色，经过适当的时间和处理，使细胞及微生物染上不同深浅的颜色，产生不同的折射率，从而便于光学显微镜下进行观察和研究。
3.现有的he染色液，即苏木素伊红染色液，由于苏木素染色液的氧化膜过多，伊红染色液染色层次不清晰、着色效果不好，进而造成了染色后的细胞涂片的背景模糊，读片困难。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种液基脱落细胞染色液及染色方法，旨在解决现有的苏木素伊红染色液的氧化膜过多，影响对细胞的染色效果的问题。
5.为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种液基脱落细胞染色液染色方法，包括以下步骤：
6.配制苏木素染色液和伊红染色液；
7.将基液细胞涂抹在涂片上并进行固定，得到固定涂片；
8.将所述固定涂片置于所述苏木素染色液中染色，得到第一染色涂片；
9.使用所述伊红染色液对所述第一染色涂片进行染色，得到第二染色涂片；
10.对所述第二染色涂片进行封片后保存。
11.其中，所述对基液细胞涂抹在涂片上并进行固定，得到固定涂片的具体方式为：
12.将所述基液细胞涂抹在涂片上，并将所述涂片至于酒精中，直至所述涂片上的所述基液细胞固定完成，将所述涂片从所述酒精中取出，得到固定涂片。
13.其中，所述将所述固定涂片置于所述苏木素染色液中染色，得到第一染色涂片的具体方式为：
14.将所述固定图片置于苏木素染色液中染色3分钟，取出后水洗3分钟，用0.1％-1％盐酸乙醇分化15秒后，水洗2分钟，并用氨水返蓝35秒，得到第一染色涂片。
15.其中，在对所述第二染色涂片进行封片后保存的具体方式为：
16.将所述第二染色涂片依次使用体积分数为80％的乙醇对所述第二染色涂片脱水一次，使用体积分数为95％的乙醇对所述第一脱水涂片脱水两次以及使用无水乙醇脱水两次后，完成封片，其中，每次脱水的时间均为两分钟。
17.其中，所述酒精的体积分数为95％。
18.其中，所述盐酸乙醇的体积分数为0.1％-1％。
19.其中，所述苏木素染色液的制备方法，包括以下步骤：
20.按重量份计选取苏木精5-6份、无水乙醇300-520份、硫酸铝钾30-40份、蒸馏水
1000-1650份、碘酸钠0.45-0.55份和冰醋酸15-23份；
21.将所述苏木精加入所述无水乙醇中并溶解，得到第一苏木素醇溶液；
22.将所述硫酸铝钾加入所述蒸馏水中，直至所述硫酸铝钾完全溶解于所述蒸馏水中，加入所述第一苏木素醇溶液，得到第一混合液；
23.将所述碘酸钠加入所述第一混合液中并加热，直至所述第一混合液变深紫色后冷却，得到第二混合液；
24.将所述冰醋酸加入所述第二混合液中混合后过滤，得到所述苏木素染色液。
25.其中，所述伊红染色液的制备方法包括，包括以下步骤：
26.按重量份计选取水溶性伊红1-4份、醇溶性伊红1-3份、碱性品红1-2份、中性红1-2份、苯扎氯铵1-3份、十二烷基二甲基苄基溴化铵1-3份、乙醇45-60份和蒸馏水40-55份；
27.将所述苯扎氯铵和所述十二烷基二甲基苄基溴化铵加入所述蒸馏水中混合，得到第三混合液；
28.将所述乙醇加入所述第三混合液中混合，得到第四混合液；
29.将所述水溶性伊红、所述醇溶性伊红、所述碱性品红和所述中性红加入第四混合液混合后过滤，得到所述伊红染色液。
30.第二方面，本发明提供了一种液基脱落细胞染色液，所述苏木素染色液按重量份计包括苏木精5-6份、无水乙醇300-520份、硫酸铝钾30-40份、蒸馏水1000-1650份、碘酸钠0.45-0.55份和冰醋酸15-23份；
31.所述伊红染色液按重量份计包括水溶性伊红1-4份、醇溶性伊红1-3份、碱性品红1-2份、中性红1-2份、苯扎氯铵1-3份、十二烷基二甲基苄基溴化铵1-3份、乙醇45-60份和蒸馏水40-55份。
32.本发明的一种液基脱落细胞染色液染色方法，通过所制备的所述苏木素染色液使用较少的所述碘酸钠作为氧化剂，避免过多的氧化物形成；使得所述苏木素染色液无氧化膜形成，染色后干净无污染，在所述苏木素染色液和所述伊红染色液的成分中未添加甘油，增加了对基液细胞的染色能力，并通过对所述苏木素染色液染色后的基液细胞进行分化并返蓝后，再通过所述伊红染色液进行染色，提升了基液细胞的着色能力，使细胞形态更加清晰，解决了现有的苏木素伊红染色液的氧化膜过多，影响对细胞的染色效果的问题。
附图说明
33.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
34.图1是本发明提供的一种液基脱落细胞染色液染色方法的流程图。
35.图2是所述苏木素染色液的制备方法的流程图。
36.图3是所述伊红染色液的制备方法的流程图。
37.图4是现有的细胞染色方式的染色效果图。
38.图5是本发明提供的一种液基脱落细胞染色液染色方法的染色效果图。
具体实施方式
39.下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
40.请参阅图1至图3，第一方面，本发明提供一种液基脱落细胞染色液染色方法，包括以下步骤：
41.s1、配制苏木素染色液和伊红染色液；
42.所述苏木素染色液按重量份计包括苏木精5-6份、无水乙醇300-520份、硫酸铝钾30-40份、蒸馏水1000-1650份、碘酸钠0.45-0.55份和冰醋酸15-23份；
43.所述伊红染色液按重量份计包括水溶性伊红1-4份、醇溶性伊红1-3份、碱性品红1-2份、中性红1-2份、苯扎氯铵1-3份、十二烷基二甲基苄基溴化铵1-3份、乙醇45-60份和蒸馏水40-55份。
44.s2、将基液细胞涂抹在涂片上并进行固定，得到固定涂片；
45.具体方式为：将所述基液细胞涂抹在涂片上，并将所述涂片至于酒精中，浸泡10-20分钟，直至所述涂片上的所述基液细胞固定完成，将所述涂片从所述酒精中取出，得到固定涂片。所述酒精的体积分数为95％。
46.s3、将所述固定涂片置于所述苏木素染色液中染色，得到第一染色涂片；
47.具体的，将所述固定图片置于苏木素染色液中染色3分钟，取出后水洗3分钟，用0.1％-1％盐酸乙醇分化15秒后，水洗2分钟，并用氨水返蓝35秒，得到第一染色涂片。
48.s5、使用所述伊红染色液对所述第一染色涂片进行染色，得到第二染色涂片；
49.使用所述伊红染色液对所述第一染色涂片进行染色的时间为15秒，得到所述第二染色涂片即染色完成，直接对所述第二染色涂片进行镜检即可对染色后的基液细胞进行查看。
50.s6、对所述第二染色涂片进行封片后保存。
51.具体的，将所述第二染色涂片依次使用体积分数为80％的乙醇对所述第二染色涂片脱水一次，使用体积分数为95％的乙醇对所述第一脱水涂片脱水两次以及使用无水乙醇脱水两次后，完成封片，其中，每次脱水的时间均为两分钟。
52.其中，所述苏木素染色液的制备方法，包括以下步骤：
53.s101、按重量份计选取苏木精5-6份、无水乙醇300-520份、硫酸铝钾30-40份、蒸馏水1000-1650份、碘酸钠0.45-0.55份和冰醋酸15-23份；
54.s102、将所述苏木精加入所述无水乙醇中并溶解，得到第一苏木素醇溶液；
55.s103、将所述硫酸铝钾加入所述蒸馏水中，直至所述硫酸铝钾完全溶解于所述蒸馏水中，加入所述第一苏木素醇溶液，得到第一混合液；
56.s104、将所述碘酸钠加入所述第一混合液中并加热，直至所述第一混合液变深紫色后冷却，得到第二混合液；
57.s105、将所述冰醋酸加入所述第二混合液中混合后过滤，得到所述苏木素染色液。
58.对所述第二混合液的搅拌时间为30分钟。
59.其中，所述伊红染色液的制备方法包括，包括以下步骤：
60.s201、按重量份计选取水溶性伊红1-4份、醇溶性伊红1-3份、碱性品红1-2份、中性
红1-2份、苯扎氯铵1-3份、十二烷基二甲基苄基溴化铵1-3份、乙醇45-60份和蒸馏水40-55份；
61.s202、将所述苯扎氯铵和所述十二烷基二甲基苄基溴化铵加入所述蒸馏水中混合，得到第三混合液；
62.s203、将所述乙醇加入所述第三混合液中混合，得到第四混合液；
63.s204、将所述水溶性伊红、所述醇溶性伊红、所述碱性品红和所述中性红加入第四混合液混合后过滤，得到所述伊红染色液。
64.对所述第四混合液的搅拌时间为2小时。
65.有益效果：
66.1、在步骤s1中所制备的所述苏木素染色液使用较少的所述碘酸钠作为氧化剂，避免过多的氧化物形成；使得所述苏木素染色液无氧化膜形成，染色后干净无污染；
67.2、在所述苏木素染色液和所述伊红染色液的成分中未添加甘油，增加了对基液细胞的染色能力，并通过对所述苏木素染色液染色后的基液细胞进行分化并返蓝后，再通过所述伊红染色液进行染色，提升了基液细胞的着色能力，使细胞形态更加清晰。
68.3、所述伊红染色液的成分中添加了所述十二烷基二甲基苄基溴化铵和所述苯扎氯铵，使对基液细胞的染色效果更加均匀；另外，即使在较冷的环境下，染色时间也不会延长。
69.第二方面，本发明提供了一种液基脱落细胞染色液，所述苏木素染色液按重量份计包括苏木精5-6份、无水乙醇300-520份、硫酸铝钾30-40份、蒸馏水1000-1650份、碘酸钠0.45-0.55份和冰醋酸15-23份；
70.所述伊红染色液按重量份计包括水溶性伊红1-4份、醇溶性伊红1-3份、碱性品红1-2份、中性红1-2份、苯扎氯铵1-3份、十二烷基二甲基苄基溴化铵1-3份、乙醇45-60份和蒸馏水40-55份。
71.具体的，所述苏木素染色液在配制时，首先按选定的比例取所述无水乙醇、所述苏木素，将所述苏木精加入所述无水乙醇中，溶解，得到第一苏木素醇溶液，备用；其次，按选定的比例取所述蒸馏水、所述硫酸铝钾，将硫酸铝钾加入所述蒸馏水中，直至所述硫酸铝钾完全溶解于所述蒸馏水中，加入所述第一苏木素醇溶液，得到第一混合液；然后按选定的比例取所述碘酸钠和所述冰醋酸，将所述碘酸钠加入所述第一混合液中，并加热，直至所述混合液变深紫色后，冷却，得到第二混合液；最后，将所述冰醋酸加入所述第二混合液中，搅拌30分钟，直至均匀混合并过滤，得到苏木素染色液；
72.所述伊红染色液在配制时，首先按选定的比例取所述水溶性伊红、所述醇溶性伊红、所述碱性品红、所述中性红、所述苯扎氯铵、所述十二烷基二甲基苄基溴化铵、所述乙醇和所述蒸馏水，向所述蒸馏水中加入所述苯扎氯铵和所述十二烷基二甲基苄基溴化铵，混合均匀，再加入所述乙醇，最后加入所述水溶性伊红、所述醇溶性伊红、所述碱性品红和所述中性红，搅拌2小时，过滤，即得所述伊红染色液。
73.实施例1：所述苏木素染色液按重量份计，分别称取所述苏木精5g、所述无水乙醇350ml、所述硫酸铝钾35g、所述蒸馏水1400ml、所述碘酸钠0.49g和所述冰醋酸19ml，在22-28℃下搅拌30分钟，直至混合均匀，过滤，得到所述苏木素染色液。
74.所述伊红染色液按重量份计，分别称取所述水溶性伊红2g、所述醇溶性伊红1.5g、
所述碱性品红1g、所述中性红1.1g份、所述苯扎氯铵1.5g、所述十二烷基二甲基苄基溴化铵1.5g、所述乙醇52ml和所述蒸馏水50g，在22-28℃下搅拌2小时，直至混合均匀，过滤，得到所述伊红染色液。
75.具体的，在本实施例中得到的所述苏木素染色液和所述伊红染色液对所述基液细胞的染色方法具体为：将预处理后的基液细胞涂片置于95％酒精中，10-20分钟取出得到所述固定涂片，置于所述苏木素染色液中染色2.5分钟，取出后水洗2.5分钟，用0.1％-1％的所述盐酸乙醇分化15秒后，水洗2分钟，用所述氨水返蓝35秒后，水洗3分钟，取所述伊红染色液染色20秒。直接镜检即可，若需要长期保存，将上述染色后的涂片分别用体积分数为80％的乙醇脱水30秒，体积分数为95％的乙醇脱水2次，每次2分钟，无水乙醇脱水2次，每次2分钟；再置于二甲苯中透明2次，每次5分钟；封片，即可。
76.实施例2：所述苏木素染色液按重量份计，分别称取所述苏木精5.5g、所述无水乙醇350ml、所述硫酸铝钾30g、所述蒸馏水1600ml、所述碘酸钠0.45g和所述冰醋酸20ml，在22-28℃下搅拌30分钟，直至混合均匀，过滤，得到所述苏木素染色液。
77.所述伊红染色液按重量份计，分别称取所述水溶性伊红2g、所述醇溶性伊红1.2g、所述碱性品红1.2g、所述中性红1.8g份、所述苯扎氯铵1.3g、所述十二烷基二甲基苄基溴化铵1.2g、所述乙醇56ml和所述蒸馏水55g，在22-28℃下搅拌2.5小时，直至混合均匀，过滤，得到所述伊红染色液。
78.具体的，在本实施例中得到的所述苏木素染色液和所述伊红染色液对所述基液细胞的染色方法具体为：将预处理后的基液细胞涂片置于95％酒精中，10-20分钟取出得到所述固定涂片，置于所述苏木素染色液中染色3分钟，取出后水洗3分钟，用0.1％-1％的所述盐酸乙醇分化15秒后，水洗2分钟，用所述氨水返蓝35秒后，水洗3分钟，取所述伊红染色液染色15秒。直接镜检即可，若需要长期保存，将上述染色后的涂片分别用体积分数为80％的乙醇脱水30秒，体积分数为95％的乙醇脱水2次，每次2分钟，无水乙醇脱水2次，每次2分钟；再置于二甲苯中透明2次，每次5分钟；封片，即可。
79.实施例3：所述苏木素染色液按重量份计，分别称取所述苏木精5g、所述无水乙醇350ml份、所述硫酸铝钾35g、所述蒸馏水1400ml、所述碘酸钠0.49g和所述冰醋酸19ml，在22-28℃下搅拌30分钟，直至混合均匀，过滤，得到所述苏木素染色液。
80.所述伊红染色液按重量份计，分别称取所述水溶性伊红2g、所述醇溶性伊红1.5g、所述碱性品红1g、所述中性红1.1g份、所述苯扎氯铵1.5g、所述十二烷基二甲基苄基溴化铵1.5g、所述乙醇52ml和所述蒸馏水50g，在22-28℃下搅拌2小时，直至混合均匀，过滤，得到所述伊红染色液。
81.具体的，在本实施例中得到的所述苏木素染色液和所述伊红染色液对所述基液细胞的染色方法具体为：将预处理后的基液细胞涂片置于95％酒精中，10-20分钟取出得到所述固定涂片，置于所述苏木素染色液中染色2.5分钟，取出后水洗2.5分钟，用0.1％-1％的所述盐酸乙醇分化15秒后，水洗2分钟，用所述氨水返蓝35秒后，水洗3分钟，取所述伊红染色液染色20秒。直接镜检即可，若需要长期保存，将上述染色后的涂片分别用体积分数为80％的乙醇脱水30秒，体积分数为95％的乙醇脱水2次，每次2分钟，无水乙醇脱水2次，每次2分钟；再置于二甲苯中透明2次，每次5分钟；封片，即可。
82.实施例4：所述苏木素染色液按重量份计，分别称取所述苏木精5.8g、所述无水乙
醇450ml、所述硫酸铝钾40g、所述蒸馏水1300ml、所述碘酸钠0.55g和所述冰醋酸22ml，在22-28℃下搅拌40分钟，直至混合均匀，过滤，得到所述苏木素染色液。
83.所述伊红染色液按重量份计，分别称取所述水溶性伊红2g、所述醇溶性伊红1.6g、所述碱性品红2g、所述中性红0.7g份、所述苯扎氯铵1.8g、所述十二烷基二甲基苄基溴化铵1.2g、所述乙醇55ml和所述蒸馏水60g，在22-28℃下搅拌1.5小时，直至混合均匀，过滤，得到所述伊红染色液。
84.具体的，在本实施例中得到的所述苏木素染色液和所述伊红染色液对所述基液细胞的染色方法具体为：将预处理后的基液细胞涂片置于95％酒精中，15分钟取出得到所述固定涂片，置于所述苏木素染色液中染色2分钟，取出后水洗2分钟，用0.1％-1％的所述盐酸乙醇分化15秒后，水洗2分钟，用所述氨水返蓝35秒后，水洗3分钟，取所述伊红染色液染色20秒。直接镜检即可，若需要长期保存，将上述染色后的涂片分别用体积分数为80％的乙醇脱水30秒，体积分数为95％的乙醇脱水2次，每次2分钟，无水乙醇脱水2次，每次2分钟；再置于二甲苯中透明2次，每次5分钟；封片，即可。
85.实施例5：所述苏木素染色液按重量份计，分别称取所述苏木精5g、所述无水乙醇350ml、所述硫酸铝钾35g、所述蒸馏水1400ml、所述碘酸钠0.49g和所述冰醋酸19ml，在22-28℃下搅拌30分钟，直至混合均匀，过滤，得到所述苏木素染色液。
86.所述伊红染色液按重量份计，分别称取所述水溶性伊红2g、所述醇溶性伊红1.5g、所述碱性品红1g、所述中性红1.1g份、所述苯扎氯铵1.5g、所述十二烷基二甲基苄基溴化铵1.5g、所述乙醇52ml和所述蒸馏水50g，在22-28℃下搅拌2小时，直至混合均匀，过滤，得到所述伊红染色液。
87.具体的，在本实施例中得到的所述苏木素染色液和所述伊红染色液对所述基液细胞的染色方法具体为：将预处理后的基液细胞涂片置于95％酒精中，10-20分钟取出得到所述固定涂片，置于所述苏木素染色液中染色2.5分钟，取出后水洗2.5分钟，用0.1％-1％的所述盐酸乙醇分化15秒后，水洗2分钟，用所述氨水返蓝35秒后，水洗3分钟，取所述伊红染色液染色20秒。直接镜检即可，若需要长期保存，将上述染色后的涂片分别用体积分数为80％的乙醇脱水30秒，体积分数为95％的乙醇脱水2次，每次2分钟，无水乙醇脱水2次，每次2分钟；再置于二甲苯中透明2次，每次5分钟；封片，即可。
88.有益效果：
89.1、本发明的所述苏木素染色液包括：所述苏木精5g、所述无水乙醇350ml、所述硫酸铝钾35g、所述蒸馏水1400ml、所述碘酸钠0.49g和所述冰醋酸。与传统比较，采用极少的碘酸钠，使所述苏木素染色时不过分氧化而产生的金属膜和染料沉淀、残渣。避免了因金属膜、染料沉淀造成的读片困难问题，使所述苏木素染色更为均匀并加强了染料液的着色效果，达到良好的染色效果。
90.2、本发明的所述伊红染色液包括所述水溶性伊红、所述醇溶性伊红、所述碱性品红2g、所述中性红0.7g份、所述苯扎氯铵1.8g、所述十二烷基二甲基苄基溴化铵、所述乙醇和所述蒸馏水。采用所述水溶性伊红、所述醇溶性伊红、所述碱性品红和所述中性红四种不同深浅的染料组成，可使染色的层次分明，色彩鲜艳，并且，以上四种染料联用，具有较为理想的着色强度，可保证足够的染色强度，同时加入促染剂所述苯扎氯铵和所述十二烷基二甲基苄基溴化铵，使染色的时间更短，只需15秒左右
91.3、同时未添加甘油，增加了染液的染色能力，提升了着色能力，使细胞形态更加清晰。
92.以上所揭露的仅为本发明一种液基脱落细胞染色液及染色方法较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。