专利名称：：自动血球计数仪配套试剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及血液分析的一种材料，特别是一种与自动血球计数仪配套的试剂。目前，国内各级医院使用的自动血球计数仪，所用配套试剂，全部依赖原仪器生产厂家供应，而该试剂配方又被厂家保密，国内尚未开发生产，各使用单位，都要进口配套试剂，价格昂贵，使检验成本大大提高。本发明目的在于提供一种可与几个主要系列半自动血球计数仪和全自动血球计数仪配套使用的试剂，该试剂包括血液细胞稀释液、溶血剂和仪器管道清洁剂。本发明的指导思想该试剂用于临床测定7个项目结果，即WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC，其中后三种结果是由前面的结果经机内电脑计算得出，故在研制和调查数据时只考虑前4项结果因素，血液标本加入稀释液中，使血细胞呈混悬状态，其形态不变，基本保持体内环境，故对试剂的基本要求如下1、血液细胞对试剂的要求(1)对稀释液的要求①稳定而等渗的渗透压②适宜的PH和比重、粘度③良好的导电性能(2)对溶血剂要求白细胞破坏迅速、完全，并保持HGB的稳定性。(3)对清洁剂要求去污力强，管道清洁干净、彻底，不影响稀释液理化性质。2、仪器对试剂要求，要求试剂无色、无污染、无颗粒，性质稳定。本底要求WBC±0.3RBC±0.16HGB±0.30HCT±0.10％因此，本发明的配套试剂配方为配方一(1)血液细胞稀释液(每10000ml试剂中所含组份量)氯化钠50～90g氯化钾1～5g磷酸氨二钠50～90g磷酸二氢钾4～8g乙二胺四乙酸二钠20～50g余量为蒸馏水。(2)溶血剂(每1000ml试剂中所含组份量)十六烷三甲基溴化铵30～60g异丙醇100～300ml氰化钾20～50mg余量为蒸馏水。(3)仪器管道清洁剂(每1000ml试剂中组份含量)上述血液细胞稀释液940～980ml吐温8010～30ml次氯酸钠10～30ml配方二(1)血液细胞稀释液氯化钠50～90g氯化钾1～5g碳酸氢钠10～30g肝素1～10万单位余量为蒸馏水。(2)溶血剂十二烷三甲基氯化铵30～60g异丙醇50～200ml吐温8050～200ml余量为蒸馏水。(3)仪器管道清洗剂(每1000ml试剂中组份量)上述血液细胞稀释液940～980ml吐温8010～30ml次氯酸钠10～30ml在试剂的研制过程中，发明人根据指导思想的要求，先后经过近百次实验，选出配方和生产工艺，反复实验，不断改进提高，使试剂各项性能和本底完全符合试验项目要求，并进行了理化性质的对比实验，其各种试验数据如下1、与日本光电公司原装试剂理化性质对比实验结果方法(1)渗透压和比重用折射仪测定(2)PH用酸度计测定(3)粘度用粘度计测定(4)导电性用检流计测定表1两种试剂理化特性对照表</tables>2、两种试剂对比试验结果方法任意采取100份标本，均为双份，1份用进口试剂测定，另一份用研制试剂测定，各自记录结果，作统计学处理，求出t值，P，比较测定结果的差异。表2两种试剂对比试验结果</tables>3、研制试剂的重复性实验方法用定值全血质控物作批内重食性实验，取10份同批号定值全血质控物10ul，精确加入稀释液5ml，上机稀释后，测定RBC、HCT，然后在稀释的红细悬液中加入溶血剂3滴，3秒钟红细胞完全溶解，上要测定WBC、HCB，测定完毕，记录结果，求出X、SD、CV。表3研制试剂的重复性实验结果4、研制试剂的线性试验方法配制不同浓度的定值全血质控物表4将配成的已知浓度标本上机测定，打印出双份结果，求出X，每测定1份标本，冲洗管道3次，以所得结果为纵坐标，已知浓度为横坐标，观察线性。图1WBC线性试验图标本WBC×109/L12.123.634.0545.3图2RBC线性试验图标本RBC×1012/L10.84521.6932.42543.29图3HCB线性试验图标本HCBg/L12.2525.1537.149.45图4HCT线性试验图标本HCT％111.3220.6328.6439.15、溶血剂的溶血性能测定方法将两种溶血剂按倍比稀释至1∶1～1∶8192，分别加入5％的红细胞悬液3滴，观察溶血程序和速度。表5两种溶血剂溶血性能对比结果6、精密度试验方法用本发明试剂对下述被检物同时进行10次测定，每测定1次，清洗管道3次，结果如下表6本发明试剂特异性试验结果7、血红蛋白稳定性试验结果方法将1∶500稀释的红细胞悬液每5ml加入溶血剂3滴，分别在不同时间测定血红蛋白量，以观察其稳定性。表7血红蛋白稳定性试验结果</tables>8、稀释液对细胞形态影响观察试验方法将研制的稀释液中加入10ul末稍血液，程1∶500稀释在不同时间用高倍视野观察血细胞形态，以测定血细胞在稀释中的稳定性。结果两种试剂分别观察24小时，血液细胞形态均无改变，数量无下降。根据以上实验结果表明，本发明的自动血球计数仪配套试剂与日本原装试剂相比较，其渗透压、比重、粘度、PH、导电性试验结果均在允许范围之内，线性试验提示线性良好，溶血剂溶血性能和灵敏度、特异性均符合试剂要求，HCB稳定性、血液细胞稳定性良好，血细胞形态无改变，并送上级和兄弟医院在不同型号仪器使用，其分布图显示良好。经国家药检部门化验，其渗透压、比重、粘度、PH值、导电性能等项指标达到和接近进口试剂标准，可完全替代进口试剂应用于临床。本发明试剂与进口试剂相比，配制生产工艺简单，原料可就地解决，化验成本降低80％，大大减轻了患者经济负担，具有明显经济效益和社会效益。实施例以下所选各组份均要求分析纯，用分析天平精确称取。配方一1、血液细胞稀释液氯化钠57.5g氯化钾1.0g磷酸氢二钠60g磷酸二氢钾5.7g乙二胺四乙酸二钠25g分别用蒸馏水溶解后混合，稀释至10000ml，用施氏滤器正压过滤微孔滤膜0.45um，过滤后目测，试剂透明清亮，无沉淀、颗粒、絮状物，背累计数Hb、RBC、HCT均为“0”，WBC为0.0-0.1×109/L，PH6.5，渗透压1.33415～1.33420m/L，比重1.003，电阻30Ω，粘度0.93，各项指标均合格，封存严密，标明产品名称、批号、效期及保存条件、注意事项、附说明等。2、溶血剂a、十六烷三甲基溴化铵50gb、异丙醇200mlc、氯化钾30mg将组份b加入组份a中，再加适量蒸馏水，待溶解后，加组份c，溶解后加蒸馏水稀释液至1000ml、0.45um微孔，施氏滤器过滤后，目测试剂清亮透明，无沉淀和絮状物，背累计数Hb为0，WBC0.2×109/L以下，检测合格后分装。3、仪器管道清洗剂用上述血液细胞稀释液960ml，加非离子表面活性剂吐温8020ml，次氯酸钠20ml，为了区别，可加少量染料呈有色液体，按上述方法过滤，检测标准同前，分装，包装要求同前。此配方一试剂分别适用于MEK系列、F系列、K系列、T系列、HC等系列半自动血球计数仪使用。配方二1、血液细胞稀释液氯化钠61.425g氯化钾3.725碳酸氢钠20g肝素5万单位前三种分别用适量蒸馏水溶解后，混合摇匀，再加入肝素，用蒸馏水稀释至10000ml，过滤同配方一，检测标准PH7.0～7.3，渗透压305～315mosm/kg，比重1.005～1.008，导电率14.2～14.3ms/cm，粘度0.88～0.92，目测包装同配方一。2、溶血剂a、十二烷三甲基氯化铵50gb、异丙醇100mlc、吐温80100ml将组份a加入组份b中，溶解后加蒸馏水适量，再加入组份c，用蒸馏水稀释至1000ml，过滤，检测标准、包装同配方一。3、仪器管道清洗剂取上述血液细胞稀释液960ml，加入非离子表面活性剂吐温8020ml，次氯酸钠20ml，其过滤、检测、包装等均同前。配方二分别运用各种系列全自动血液细胞分类计数仪使用。权利要求1.一种自动血球计数仪配套试剂，其特征在于该试剂中的血液细胞稀释液组成为(每10000ml试剂中所含组份量)氯化钠50～90g氯化钾1～5g磷酸氢二钠50～80g磷酸二氢钾4～8g乙二胺四乙酸二钠20～50g余量为蒸馏水。2.一种自动血球计数仪配套试剂，其特征在于该试剂中的溶血剂组成为(每1000ml试剂中所含组份量)十六烷三甲基溴化铵30～60g异丙醇100～300ml氰化钾20～50mg余量为蒸馏水。3.一种自动血球计数仪配套试剂，其特征在于该试剂中的仪器管道清洁剂组成为(每1000ml试剂中组份含量)上述血液细胞稀释液940～980ml吐温8010～30ml次氯酸钠10～30ml4.根据权利要求1所述的自动血球计数配套试剂，其特征在于该试剂中的血液细胞稀释液组成为(每10000ml试剂中所含组份量)氯化钠50～90g氯化钾1～5g碳酸氢钠10～30g肝素1～10万单位余量为蒸馏水。5.根据权利要求2所述的自动血球计数仪配套试剂，其特征在于该试剂中的溶血剂组成为(每1000ml试剂中所含组份量)十二烷三甲基氯化铵30～60g异丙醇50～200ml吐温8050～200ml余量为蒸馏水。6.根据权利要求3所述的自动血球计数仪配套试剂，其特征在于该试剂中的仪器管道清洁剂组成为(每1000ml试剂中组份量)权利要求4所述的血液细胞稀释液940～980ml吐温8010～30ml次氯酸钠10～30ml全文摘要本发明是一种与自动血球计数仪配套的试剂,包括血液细胞稀释液、溶血剂和仪器管道清洁剂,本发明提供了适用于半自动和全自动血球计数仪的两个配方的试剂,经检测对比,均达到国外进口试剂要求,其对比试验七值小2.600、P>0.01,重复性试验,SD小于0.6,CV小于4.1%,线性良好,可完全替代进口试剂,降低检验费80%。文档编号G01N33/48GK1189617SQ9710841公开日1998年8月5日申请日期1997年1月27日优先权日1997年1月27日发明者石金运,胡杰申请人:陇县人民医院