一种宫颈癌hpv快速检测装置的试纸条的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及宫颈癌检测领域，尤其涉及一种宫颈癌HPV快速检测装置的试纸条。
【背景技术】
[0002]HPV病毒是一种双链DNA病毒，具有球形外壳，直径55nm，主要感染皮肤粘膜上皮，导致不同病变。目前已经鉴定的HPV病毒超过200种，至少30种与生殖道粘膜感染相关。HPV妇女一生中80%可感染HPV，通常在8-10个月内被自然清除，只有少数(5%)妇女呈持续感染状态。
[0003]HPV持续感染是引起宫颈癌的首要病因。宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率居女性恶性肿瘤第二位。我国是一个宫颈癌高发区，每年新增病例20万人左右，占世界总发病人数的近1/3，且每年约有5万人死于宫颈癌。随着现在年轻人性生活的提前，早育、性生活紊乱、免疫力低等又在很大程度上增加患宫颈癌及相关疾病的风险。如何防治及治疗宫颈癌已成为当今社会发展的一个重要课题。
[0004]目前，对HPV病毒的检测多采用PCR、HCI1、TCT等方法。但是上述几种方法操作繁琐、检测时间长、准确率较低、需要特定的仪器设备检测、需要专门的技术人员操作并且检测成本较高，所以这些因素不利于核酸的早期快速筛查。因此，需要一种新的快速检测病原体核酸的方法，可以直接检测病原体的存在。虽然已经有多种确定微生物核酸的方法，然而现有的技术在被用来作为诊断指标方面仍然存在不足。因此，建立一种灵敏、快速的核酸检测技术一直是研宄工作者探讨的问题。
【发明内容】
[0005]本发明的目的为解决以上技术问题，提供一种灵敏度高、稳定性高、检测快速、携带方便、无污染的宫颈癌HPV快速检测装置的试纸条。
[0006]为了解决上述技术问题，采取的具体技术方案如下:一种宫颈癌HPV快速检测装置的试纸条，包括底板、样品垫、结合垫、吸收垫，所述底板一端上方为样品垫，底板另一端上方为吸收垫，样品垫一端下方重叠有结合垫，结合垫与吸收垫之间为硝酸纤维素膜垫，硝酸纤维素膜垫上设置有测试线和控制线，测试线和控制线上分别设置有核酸探针。
[0007]进一步，所述的底板为惰性树脂。
[0008]进一步，所述的结合垫为玻璃纤维垫，玻璃纤维垫上涂抹有纳米材料，纳米材料为金纳米粒子及由纳米粒子修饰的娃纳米线制成。
[0009]本发明的有益效果是，本试纸条具有以下优点:1.灵敏度高:核酸探针的设计，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。2.特异性强:抗原抗体的非特异性结合干扰较强相比，特异的核酸探针的设计使其在实际应用中可最大限度地降低样品中非特异作用。3.稳定性高:本发明中，标记的是核酸探针，因为在外界核酸杂交的稳定性比抗原抗体结合的稳定性高。4.检测快速:结果判读一般在20分钟内即可完成。5.携带方便，操作简单:检测不需要任何特殊的仪器或设备，操作步骤简单，无需PCR扩增，非专业人员即可操作。便于医护人员携带，也可供普通人群或患者自我检测与监控。便于HPV的快速筛查及术后跟踪治疗，适合边远地区及医疗卫生条件不发达的医院等基层单位。6.成本低；7.可快速进行HPV分型检测；8.该试纸条为一次性用品，对环境无污染，按照一般的医疗垃圾处理即可。
【附图说明】
[0010]图1是本发明的结构示意图；
【具体实施方式】
[0011]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0012]根据图1如示，一种宫颈癌HPV快速检测装置的试纸条，包括底板6、样品垫1、结合垫2、吸收垫5，所述底板6 —端上方为样品垫1，底板6另一端上方为吸收垫5，样品垫I一端下方重叠有结合垫2，结合垫2与吸收垫5之间为硝酸纤维素膜垫8，硝酸纤维素膜垫8上设置有测试线3和控制线4，测试线3和控制线4上分别设置有核酸探针7，底板6为惰性树脂，结合垫2为玻璃纤维垫，玻璃纤维垫上涂抹有纳米材料，纳米材料为金纳米粒子及由纳米粒子修饰的娃纳米线制成。
[0013]具体的工作原理为:
[0014]一、样本处理
[0015]本试纸条应用于HPV快速筛查和术后监测，适用范围广，可用于检测石蜡包埋组织(FFPE)、福尔马林浸泡组织、血样、宫颈脱落细胞等多种类型样本。此处具体说明宫颈脱落细胞和FFPE两种样本的处理方法。
[0016]1、宫颈脱落细胞的处理:
[0017]A.将标本倒入15mL离心管离心(3000rpm)后倒掉上清液，用2mLDDH20清洗后再次离心，倒掉上清液；B.加入如下混合液:200 μ L裂解液和400 μ L DDH20(混合比例为1:2)，用移液枪吹打细胞团，使细胞分散悬浮；C.再加入5 μ L蛋白酶K，65°C中放置I小时，裂解过程中可进行2?3次震荡。D.取上清液用于检测。
[0018]2、FFPE切片状样品的处理:
[0019]A.取石蜡包埋组织切片置于65°C烘箱中烘烤20-30min，将石蜡初步融化；B.石蜡初步融化后，依次加入下列溶液中进行脱蜡、水化:二甲苯I (1min)、二甲苯II (1min)、无水乙醇(2min)、50%乙醇(2min)、水洗；C.将水洗后的切片组织用盖玻片轻轻刮入1.5mLEP管中，加入300 μ L组织裂解液和2 μ L蛋白酶K，65°C孵育l_3h，每隔I小时震荡一次，直至溶液变得清亮(如组织较多可延长孵育时间至3-5h ;标本裂解后会残留部分结缔组织等沉淀，不影响后续实验)；D.直接取上清进行检测。
[0020]3.FFPE管状样品的处理:
[0021]A.观察石蜡组织样本，将管中大块石蜡可先去除；B.二甲苯洗涤:加入800 μ L 二甲苯，混勾后置于65°C，lOmin，加速石錯的溶解；C.13000rpm离心3min。小心吸取上清，不要碰到底部组织沉淀(如有较多石蜡，可重复步骤2、3，直至石蜡去除)；D.乙醇水化:加Λ 800 μ L 100%乙醇，震荡混匀，13000rpm，5min。小心移去上清；Ε.加入800 μ L 50%乙醇，震荡混匀，14000rpm，10min。小心移去上清，注意不要碰到底部组织沉淀(注意:组织水化后不易沉淀，不同于脱水组织易沉淀；如遇未沉淀组织，可将离心时间增加至15min。);F.加入500 yL组织裂解液和5yL蛋白酶K，65°C孵育l_3h，每隔I小时震荡一次，直至溶液变得清亮(如组织较多可延长孵育时间至3-5h ;标本裂解后会残留部分结缔组织等沉淀，不影响后续实验)；G.直接取上清进行检测。
[0022]二、试纸条检测:
[0023]取10 μ L样本裂解后的上清与40 μ L DDH20混均后，加入试纸条加样孔，加样完毕静置15min后，再加入30 μ L DDH20清洗，等待5min后即可观察结果。
[0024]三、结果分析
[0025]若标本中有待测特异核酸，试纸条的测试线和控制线均可见一条色带。
[0026]若标本中无待测特异核酸，仅试纸条的控制线处可见一条色带。
[0027]若试纸条的测试线和控制线均无可见色带，说明该检测结果无效。
【主权项】
1.一种宫颈癌HPV快速检测装置的试纸条，包括底板、样品垫、结合垫、吸收垫，其特征在于，所述底板一端上方为样品垫，底板另一端上方为吸收垫，样品垫一端下方重叠有结合垫，结合垫与吸收垫之间为硝酸纤维素膜垫，硝酸纤维素膜垫上设置有测试线和控制线，测试线和控制线上分别设置有核酸探针。
2.根据权利要求1所述的宫颈癌HPV快速检测装置的试纸条，其特征在于，所述的底板为惰性树脂。
3.根据权利要求1所述的宫颈癌HPV快速检测装置的试纸条，其特征在于，所述的结合垫为玻璃纤维垫，玻璃纤维垫上涂抹有纳米材料，纳米材料为金纳米粒子及由纳米粒子修饰的娃纳米线制成。
【专利摘要】本发明提供的一种宫颈癌HPV快速检测装置的试纸条，包括底板、样品垫、结合垫、吸收垫，所述底板一端上方为样品垫，底板另一端上方为吸收垫，样品垫一端下方重叠有结合垫，结合垫与吸收垫之间为硝酸纤维素膜垫，硝酸纤维素膜垫上设置有测试线和控制线，测试线和控制线上分别设置有核酸探针。本试纸条具有以下优点：1.灵敏度高：核酸探针的设计，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。2.特异性强：抗原抗体的非特异性结合干扰较强相比，特异的核酸探针的设计使其在实际应用中可最大限度地降低样品中非特异作用。
【IPC分类】G01N33-569
【公开号】CN104614524
【申请号】CN201510091653
【发明人】张鹭鹭, 李先坤, 李晓磊, 程昀静, 其他发明人请求不公开姓名
【申请人】河南省科隆医疗器械有限公司
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年3月1日