一种乌鸡白凤片中有效成分的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医疗领域，尤其是涉及中药有效成分的检测方法。
【背景技术】
[0002]乌鸡白凤片由乌鸡、人参、白芍、丹参、当归、香附等二十味中药组成，具有补气养血、调经止带的功效，主治气血两亏引起的身体瘦弱，腰酸腿软，阴虚盗汗，经血不调，子宫虚寒，行经腹痛，崩漏带下，产后失血等症。研究表明，乌鸡白凤片可降低大鼠甘油三酯及氧化低密度脂蛋白、阻止动脉硬化有防治骨质酥松，保护肝脏等作用，对阿尔茨海默病具有潜在的药用价值。因此，乌鸡白凤片的临床应用越来越广，目前国内生产的厂家也越来越多。为了控制乌鸡白凤片质量，2005年药典也有含量测定方法和标准，也有文献报告乌鸡白凤中丹参酮、丹参素或芍药苷含量测定的方法。由于乌鸡白凤片是由20味药材制备而成，有效成分复杂多样性，现有技术含量都是测定其中一种成分，至今为止，还没有同时测定多种成分的检测方法出现，尤其是一种同时对芍药苷和甘草苷定量定性的检测方法，也没有香附有效成分的定性定量方法。因此，为全面提高其产品质量，一种方法可以检测多种成分并操作简单，易于产业化日常检验的质量测定方法是迫在眉睫的。
[0003]香附RhizomaCyperi (Nutgrass Galingale Rhizome)性味:辛微苦甘，平。主要成分为挥发油，功能主治理气解郁，调经止痛。用于肝郁气滞，胸、胁、脘腹胀痛，消化不良，月经不调，经闭痛经，寒疝腹痛，乳房胀痛。药理作用
[0004]①对子宫的作用。香附子5%流浸膏，能抑制豚鼠、家兔、猫、犬等离体子宫(已孕及未孕)的收缩，对子宫肌张力的弛缓作用，与当归流浸膏相似，但效力较弱。
[0005]香附所含的油有微弱的雌激素作用。
[0006]②镇痛作用用小鼠电盘刺激法，香附子20%醇提取物0.5毫升/20克体重皮下注射，能明显提闻小鼠痛阈。
[0007]③抗菌作用块根有抗菌作用，其提取物对某些真菌有抑制作用。
[0008]目前挥发油的提取方法主要有水蒸气蒸馏法、油脂吸收法、溶剂萃取法、超临界流体萃取法和冷压法等进行提取。
[0009]其中最常用的方法是水蒸汽蒸馏法，但该方法在进一步分离精制时，传统的重蒸馏方法由于加热次数及时间较长，挥发油容易氧化变质且得率低。
[0010]超临界C02萃取挥发油得率较高，但在工业生产放大中投入的成本高。因此，如何获得更多的挥发油成分，成为一个难题。
[0011]挥发油是中药中特有的成分，具有多种药理作用:挥发油过去采用传统的水蒸气蒸馏的方式，馏出液静置分层后，分离油层，其中的芳香饱和水溶液，含有大量的挥发油成分，但水量大，无法分离，故最终弃去，造成浪费；另外，部分中药的挥发油成分溶于水，不形成油水分离层，故无法分离。
[0012]香附的有效成分为挥发油α-香附酮，提取收率低，直接照成日常检验的含量范围波动比较大，不能真实检验该产品的质量，因此，确定一个乌鸡白凤片中香附有效成分的质量测定方法是急需解决的问题
【发明内容】
[0013]为了解决上述技术问题，本发明提供了一种乌鸡白凤片有效成分的检测方法，该方法专属性强，灵敏度高，准确可靠，操作简单并适应产业化的日常检验。
[0014]本发明是通过以下技术方案实现的:
[0015]一种乌鸡白凤片香附有效成分检测方法，采用薄层分析法检测α -香附酮并同时用紫外-分光光度法测定含量，包括如下步骤:
[0016]a、供试品溶液制备:取乌鸡白凤片样品，提取挥发油成分，用乙酸乙酯溶解，即得待测供试品。
[0017]b、对照品溶液的制备香附酮对照品，加乙酸乙酯溶解，即得对照品
[0018]溶液；
[0019]C、照薄层色谱法:取对照品和供试品溶液，分别点于同一硅胶薄层板上以甲苯-乙酸乙酯=8-10: 1-2为展开剂，展开，取出，晾干后，置于紫外灯下检视后喷以二硝基苯肼试液显色，斑点橙红色。
[0020]上述步骤a中挥发油提取提取为水蒸气蒸馏法，并采用有机溶剂为富集挥发油载体，所述的乌鸡白凤片样品与有机溶剂重量体积比为1-5: I。
[0021]上述步骤a水蒸气蒸馏法，挥发油测定器中加水量与有机溶剂体积比为150-200: 1，所述的有机溶剂选自为乙酸乙酯、氯仿、乙醚、乙酸甲酯中一种，优选有机溶剂为乙酸乙酯，优选乙酸乙酯:水体积比为1: 150。
[0022]优选步骤a中所述水蒸气蒸馏，用乙酸乙酯:水混合提取蒸馏2-5小时，取乙酸乙酯层作为供试品溶液。
[0023]优选步骤c中所述的展开剂还可用苯:乙酸乙酯=8: 2、氯仿:乙醚=9: 1、苯:乙醚=6: 4或环己烷:乙酸乙酯=I: I中一种。最佳展开剂甲苯-乙酸乙酯
9.5: 1.5。
[0024]本发明所述的乌鸡白凤片是由下述重量份的原药材制备得到的:
[0025]乌鸡5-15份、鹿角胶100-110份、醋鳖甲50-60份、煅牡蛎30-50份、桑螵蛸50-60份、人参100-110份、黄芪20-30份、当归120-130份、白芍100-110份、醋香附100-110份、天冬50-60份、甘草20-30份、地黄200-220份、熟地黄200-220份、川芎50-60份、银柴胡20-30份、丹参100-110份、山药100-110份、芡实炒50-60份、鹿角霜30-50份.
[0026]本发明所述的乌鸡白凤片，优选是由下述重量份的原药材制备得到的:
[0027]乌鸡5-10份、鹿角胶108份、醋鳖甲54份、煅牡蛎40份、桑螵蛸40份、人参108份、黄芪27份、当归122份、白芍108份、醋香附108份、天冬54份、甘草27份、地黄215份、熟地黄216份、川芎54份、银柴胡22份、丹参108份、山药108份、芡实炒54份、鹿角霜40份。
[0028]本发明的乌鸡白凤片按照现有技术制备，优选是按照下述制备方法获得的:
[0029]以上二十味，山药、鹿角胶分别粉碎成细粉，香附提取挥发油，乌鸡切成小块，加水煎煮I小时，趁热加入适量的固体石蜡，搅拌使其融化，静置，弃去上层蜡及油脂固体，煎液搅拌成匀浆，加入适量的木瓜蛋白酶，搅拌，水解5小时，煮沸5分钟，离心，取上清液，减压浓缩成稠膏，减压干燥成干膏，鳖甲加水煎煮二次，第一次2小时，第二次I小时，滤过，合并滤液，减压浓缩成稠膏，再减压干燥成干膏，人参，白芍，甘草，天冬加水煎煮二次，每次I小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.07(50°C )，通过DlOl大孔树脂，用5倍量水洗脱，弃去水液，再用90%乙醇洗脱至洗脱液无皂苷反应为止，洗脱液减压回收乙醇并浓缩致稠膏状，再减压干燥成干膏。丹参、黄苗、银柴胡、川；、当归、桑螵蛸用75%乙醇回流提取二次，每次I小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩，减压干燥成干膏，其余牡蛎等五味子加水煎煮二次，第一次2小时，第二次I小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.28-1.33 (600C )的清膏,加乙醇至含醇量达到60 %，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩成稠膏，再减压干燥成干膏，将上述干膏与山药和鹿角胶的细粉及适量微晶纤维素混合，粉碎成细粉，过筛，制成颗粒，混匀，干燥，喷加香附挥发油，混匀，闷润，加入适量硬脂酸镁，制成1000片.
[0030]试验例I香附的鉴别
[0031]供试品溶液的制备:取本品5g，研细，照挥发油测定法(《中国药典》2010年版一部附录XD)加300ml的水，在挥发油测定器内加乙酸乙酯2ml，缓缓加热至微沸，并保持微沸约3.5小时，放置半小时后，分取乙酸乙酯层，作为供试品溶液。
[0032]对照品溶液的制备:取α -香附酮对照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。
[0033]阴性对照液制备:按照工艺和处方制备不含香附的样品，取该样品按照供试品溶液制备方法制备，作为香附阴性样品溶液。
[0034]照薄层色谱法，吸取上述三种溶液各2-5ul，分别点于同一硅胶GF25