分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种利用高效液相色谱-质谱联用分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母 素乙和西贝母碱苷的方法。
【背景技术】
[0002] 伊贝母为百合科植物新疆贝母（Fritilaria walujewii Regel.)或伊犁贝母 (Fritillaria pallidiflora Schrenk.)的干燥鳞莖，主要分布在新疆地区，具有清热润 肺、化痰止咳、散结之功效，化学及现代药理研宄表明，伊贝母的药效成分主要为生物碱，其 中西贝母碱苷、贝母素甲、贝母素乙为主要活性生物碱，对止咳化痰具有重要的药理作用。
[0003] 中药活性成分的检测已成为中药质量评价、活性成分开发、开展田间栽培管理的 重要前提。长期以来，科技工作者一直致力于研宄探索贝母中活性成分检测的新方法，创建 伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷的高效、灵敏、快捷的含量测定方法，是化学分 析领域的重要研宄课题。
[0004] 由于贝母生物碱主要为留体生物碱，紫外吸收弱，目前有关伊贝母中贝母素甲、贝 母素乙和西贝母碱苷的含量测定方法主要有毛细管电泳法、薄层色谱扫描法、柱前衍生气 相色谱法和液相蒸发光散射器法等。但是，这些方法都存在不少缺点，如毛细管电泳法存在 重现性差、线性范围窄和灵敏度较低等缺陷；薄层色谱扫描法测定伊贝母中贝母素甲的含 量，操作繁琐，外界因素对测定结果影响较大，特别是显色时间方面难把握，重现性不好；柱 前衍生气相色谱法对贝母素甲、贝母素乙进行定量，存在前处理步骤多，排除干扰困难等不 足之处；液相蒸发光散射检测器法的灵敏度偏低，导致有效成分含量低的样品无法检测。
[0005] 综上所述，如何建立一种准确性好、灵敏度高、方便快捷的伊贝母中贝母素甲、贝 母素乙和西贝母碱苷的含量测定方法，从根本上实现伊贝母的药材质量控制和新药研发， 是本领域技术人员急需解决的技术难题。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是涉及一种分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷的 方法。该方法采用高效液相色谱-质谱联用技术对贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷三种 主要活性成分进行定量测定，经方法学考察试验，确认此方法简便快捷、结果准确、重现性 好，是伊贝母中化学成分含量测定的有效手段。
[0007] 本发明所述的一种分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷含量的方 法，利用高效液相色谱-质谱条件，具体操作按下列步骤进行：
[0008] a、高效液相色谱条件：色谱柱：赛默飞世尔Hypersil GOLD, C18 100X2. lmm, 1. 9 μπι;流动相体积百分比为A-0. 1 %甲酸水溶液，B-甲醇，按时间Omin， 2.011^11，4.511^11，4.611^11，7.011^11，分别用浓度为80%，45%，45%，80%，80%的0.1%甲 酸水溶液和浓度为20 %，55 %，55 %，20 %，20 %的甲醇溶液进行梯度洗脱，流速为0. 2mL/ min，柱温为室温，进样量为2 μ L ;
[0009] b、质谱条件：离子源电压为+3000伏特；离子源温度为300°C;鞘气为30arb ;辅助 气为IOarb ;离子传输毛细管温度为300°C ;电喷雾离子源，贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱 苷的选择检测离子分别为m/z 432. 233, m/z 430. 219和m/z 592. 308 ;
[0010] C、对照品溶液的制备：
[0011] 精密称取贝母素甲0. 890mg，贝母素乙0. 918mg，西贝母碱苷I. 165mg，分别用甲醇 溶解定容至lmL，作为对照品溶液储备液；
[0012] d、样品溶液的制备：
[0013] 温度60°C干燥2小时的伊贝母粉末0. lg，加氨水50yL，再加体积比8:2的氯 仿-甲醇溶液5. OmL，混匀，超声处理25min，称重，放置过夜，称重，加体积比8:2的氯仿-甲 醇溶液补足重量，滤过，弃去滤液，精密吸取续滤液1.0 mL，氮气吹干，残渣用甲醇ImL超声 2min溶解，过0. 2 μ m微孔滤膜，得到样品待测液；
[0014] e、标准曲线的绘制：
[0015] 精密移取贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷对照品溶液储备液，并用流动相水： 甲醇=80 :20 分别稀释104,2\104，105,2\105，10 6,2\106，107,2父107倍，得到混标溶液， 按色谱条件进行高效液相色谱-质谱分析；以浓度对峰面积进行回归分析，得各组分标准 曲线，计算回归方程；
[0016] f、含量测定：
[0017] 精密吸取样品待测液，按色谱条件进行高效液相色谱-质谱分析，并将峰面积带 入标准曲线，分别计算贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷的含量。
[0018] 本发明所述分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷的方法，该方法 利用高效液相色谱-质谱联用，具体操作按下列步骤进行：
[0019] 仪器条件：
[0020] 高效液相色谱条件：
[0021] 色谱柱：赛默飞世尔 Hypersil GOLD, C18 100X2. Imm, 1.9 μ m，流动相：A-0. 1 % 甲酸水溶液，B-甲醇；洗脱程序表1 :
[0022] 表 1
[0023]
【主权项】
1. 一种分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷含量的方法，其特征在于 利用高效液相色谱-质谱条件，具体操作按下列步骤进行： a、 高效液相色谱条件：色谱柱：赛默飞世尔Hypersil GOLD，C18 100X2. 1mm，1.9 μπι;流动相体积百分比为A-0. 1%甲酸水溶液，B-甲醇，按时间Omin， 2. Omin，4. 5min, 4. 6min, 7. Omin,分别用浓度为 80%, 45%, 45%, 80%, 80% 的 A-0. 1% 甲酸水溶 液和浓度为20%，55%，55%，20%，20%的B-甲醇溶液进行梯度洗脱，流速为0. 2mL/min，柱温 为室温，进样量为2 μ L ; b、 质谱条件：离子源电压为+3000伏特；离子源温度为300°C;鞘气为30arb;辅助气 为IOarb ;离子传输毛细管温度为300°C ;电喷雾离子源；贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷 的选择检测离子分别为m/z 432. 233, m/z 430. 219和m/z 592. 308 ; c、 对照品洛液的制备： 精密称取贝母素甲0. 890mg，贝母素乙0. 918mg，西贝母碱苷I. 165mg，分别用甲醇溶 解定容至lmL，作为对照品溶液储备液； d、 样品溶液的制备： 温度60°C干燥2小时的伊贝母粉末0. lg，加氨水50 μ L，再加体积比8:2的氯仿-甲 醇溶液5. OmL，混匀，超声处理25min，称重，放置过夜，称重，加体积比8:2的氯仿-甲醇溶 液补足重量，滤过，弃去滤液，精密吸取续滤液1.0 mL，氮气吹干，残渣用甲醇ImL超声2min 溶解，过0. 2 μ m微孔滤膜，得到样品待测液； e、 标准曲线的绘制： 精密移取贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷对照品溶液储备液，并用流动相水：甲醇 =80:20 分别稀释 104, 2 X 104, 105, 2 X 105, 106, 2 X 106, 107, 2 X IO7倍，得到混标溶液，按色谱 条件进行高效液相色谱-质谱分析；以浓度对峰面积进行回归分析，得各组分标准曲线，计 算回归方程； f、 含量测定： 精密吸取样品待测液，按色谱条件进行高效液相色谱-质谱分析，并将峰面积带入标 准曲线，分别计算贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷的含量。
【专利摘要】本发明涉及一种分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷的方法。该方法采用高效液相色谱-质谱联用技术对贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷三种主要活性成分进行定量测定，经方法学考察试验，确认此方法简便快捷、结果准确、重现性好，是伊贝母中化学成分含量测定的有效手段。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104833758
【申请号】CN201510258155
【发明人】赵莉, 李洪敏, 程争鸣, 牟书勇, 石明阳
【申请人】中国科学院新疆生态与地理研究所
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月20日