菊花破壁饮片的指纹图谱构建及其质量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药饮片的质量检测方法，尤其是菊花破壁饮片的HPLC指纹标准图 谱构建及其质量检测方法。
【背景技术】
[0002] 菊花是菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥头状花序。中药破壁 饮片是利用现代超微粉碎技术将传统饮片进行破细胞壁粉碎成粒度分布D90小于45 μ m的 微细颗粒，再制成30~100目的颗粒。相对于传统饮片具有色泽一致，质量均一，稳定性好 的特点为创新型中药饮片。由于中药破壁饮片不具传统中药饮片的形态特征，破壁后会带 来有效成分或指标成分等化学成分的溶出度变化，使传统饮片的鉴别、质量检测方法不能 完全适用。因此，必须针对中药破壁饮片建立专属性强，全面反映中药破壁饮片质量状况的 检测方法。而建立一项新的质量检测方法并非易事，例如检测条件、对照品的选择和供试品 的制备方法等均需要研宄考量并进行验证。虽然现有技术中有涉及中药指纹图谱的检测方 法，但并无针对形态特殊的中药破壁饮片的方法，且存在专属性、稳定性、重现性和精密度 差缺陷，不能完全反应饮片的质量情况的缺陷。
【发明内容】
[0003] 为克服以上缺陷，本发明提供了一种适用于菊花破壁饮片的HPLC指纹标准图谱 构建方法，并在此基础上进一步提供该饮片的质量检测方法。
[0004] 所述的菊花破壁饮片的标准图谱构建方法包括以下步骤：
[0005] (1)供试品溶液的制备：精密称定菊花破壁饮片0· 25g，加入70%甲醇25mL，超声 提取40分钟，提取液用0. 22um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
[0006] (2)对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、木樨草苷、异绿原酸A对照品适量，加 70%甲醇溶解配制成浓度分别为0. 173mg/ml、0. 152mg/ml、0. 249mg/ml的混合对照品溶 液；
[0007] (3)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱 柱；以乙腈为流动相A，以0. 5%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱；柱温为35°C ;检测波 长为348nm ;流速：0. 6mL/min ;梯度洗脱的时间及流动相比例为：0~8min，流动相A : 14 - 18%，流动相 B :86 - 82% ;8 ~24min，流动相 A :18%，流动相 B :82% ;24 ~50min， 流动相A :18 - 25 %，流动相B :82 - 75% ;50~75min，流动相A :25 - 45 %，流动相B : 75 - 55% ;对照品进样5ul，样品进样20ul ;
[0008] (4)按上述供试品溶液及对照品的制备方法及和色谱条件对11批菊花破壁饮片 样品进行HPLC分析，得到相应指纹图谱；以异绿原酸A峰为参照峰，计算各指纹图谱中主 要色谱峰的相对保留时间及相对峰面积；输入指纹图谱分析软件，对各批次样品指纹图谱 进行相似度比较，以平均谱图为共有模式，计算相似度，建立菊花破壁饮片指纹图谱共有模 式标准图谱，包括15个共有特征峰。
[0009] 所述质量检测方法，包括以下步骤：
[0010] (1)按标准图谱构建方法中步骤⑴和步骤⑵分别制备待测样品供试品溶液和 对照品溶液，按步骤（3)的色谱条件，精密吸取待测样品供试品溶液20 μ 1，对照品5ul，注 入HPLC色谱仪，测定，记录色谱，即得。
[0011] (2)合格指标的建立及指定图谱、判断方法：供试品色谱中，呈现15个与权利要求 1所述菊花破壁饮片指纹图谱共有模式标准图谱相对应的特征峰；按中药色谱指纹图谱相 似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照品指纹图谱的相似度不得低于〇. 90。以异绿原 酸A峰为对照峰，其余14个共有特征峰相对保留时间分别为：0. 287、0. 620、0. 724、0. 794、 0· 952、1· 073、1· 159、1· 177、1· 278、1· 401、1· 449、1· 527、1· 596、1· 656,各峰相对保留时间 RSD彡±5%，为合格品。
[0012] 本发明是首次针对菊花破壁饮片质量控制所构建的HPLC指纹图谱共有模式标准 图谱及质量检测方法。该图谱较全面涵盖了菊花破壁饮片主要活性成分绿原酸、木犀草苷、 异绿原酸A、木犀草素及芹菜素的图谱信息，专属性明显优于现有的同类指纹图谱方法。经 试验验证该方法的稳定性、重现性和精密度均达到法定要求，且操作简单，检测快速准确； 并能有效控制菊花药材、菊花破壁粉体、菊花破壁粉粒整体质量及鉴别伪品。
【附图说明】
[0013] 图1是菊花破壁饮片预实验4所得图谱（35Inm)
[0014]
[0015] 图2是菊花破壁饮片预实验3所得图谱（35Inm)
[0016] 图3是菊花破壁饮片预实验2所得图谱（35Inm)
[0017] 图4是菊花破壁饮片预实验1所得图谱（35Inm)
[0018] 图5是菊花破壁饮片专属性考察图谱。
[0019] 图6是指纹图谱的共有模式的建立中11批次菊花破壁饮片谱图。
[0020] 图7是菊花破壁饮片特征指纹图谱共有模式标准图谱。
[0021] 图8是主成分色谱峰的指认中确定的5个对照品图谱。
【具体实施方式】
[0022] -、菊花破壁饮片指纹图谱共有模式标准图谱的构建。
[0023] 1仪器与试药
[0024] I. 1 仪器
[0025] 安捷伦1200RRLC快速液相色谱仪（配有G1315C型号DAD检测器、G4218A的ELSD 蒸发光检测器、G1312B二元泵、G1329B自动进样器、G1322A脱气机、G1316B柱温箱，Agilent Chemstation色谱工作站
[0026] 1. 2 试药
[0027] 试剂：甲醇，色谱纯（安徽时联特种溶剂有限公司），乙腈，色谱纯（安徽时联特种 溶剂公司色谱纯），双蒸水（实验室自制）、磷酸（分析纯，天津福晨化学试剂厂）、甲醇（分 析纯，广州化学试剂厂）。绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A、木犀草素及芹菜素对照品。
[0028] 供试品：菊花破壁饮片、菊花破壁粉体、菊花原料药材（均由中山中智药业集团提 供）
[0029] 2实验方法
[0030] 2. 1预试验
[0031] 中智菊花破壁饮片主要原料药材来源为杭白菊的胎菊，于是主要参考对杭白菊化 学成分及指纹图谱研宄的相关文献。通过对文献分析，初步拟定以下4预实验方案：
[0032] 预实验方案1样品制备：精密称取菊花破壁饮片0. 5146g，加25ml75%的甲醇，称 定重量，超声提取40min，取出，冷却至室温，用提取溶剂补重，粗滤，用0. 22um微孔滤膜过 滤，取续滤液，即得。色谱条件：Waters Symmetry C18色谱柱（250mmx4. 6mm, 5um);流动 相为乙腈-〇. 5%磷酸水溶液，梯度洗脱：0min-lmin-18min-32min-55min-75min,乙腈变化 5% -10% -18% -18% -25% -45% ;流速 lml/min ;柱温 35°C ;检测波长 268、351、210nm ; 进样体积IOul。
[0033] 预实验方案2样品制备：精密称取菊花破壁饮片0. 5146g，入25ml75%的甲醇，称 定重量，超声提取40min，取出，冷却至室温，用提取溶剂补重，粗滤