木瓜饮片的检测方法
【专利摘要】本发明公开的木瓜饮片检测方法木瓜饮片检测方法，其测量时的色谱条件为色谱柱：C18柱;流动相为甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（90：10）；流速1.0mL/min；检测波长210nm；柱温；室温；进样量20μL。本发明可以保证检测木瓜饮片的分离度与重复性，对数据分析和产品的研究有很大帮助，减小测量带来误差，特别适合实验室对其进行的检测工作。
【专利说明】木瓜饮片的检测方法
【技术领域】:
[0001]本发明涉及中药饮片的检测【技术领域】，特别涉及木瓜饮片的检测方法。
【背景技术】:
[0002]野木瓜[Chaenomeles cathayensis (Hemsl.) Schneid]是一种比较珍贵，药食一
体的天然植物，盛产于“中国野木瓜之乡”-贵州省正安县。野木瓜中所含齐墩果酸
(oleanolic)、熊果酸(ursolic)等五环三職阜苷是其主要的生理活性物质。
[0003]近年来研究表明:齐墩果酸、熊果酸不仅具有消炎抑菌、降低转氨酶、促进肝细胞再生、防止肝硬化等功效，还具有一定的抗癌活性，且以熊果酸尤为突出，故而对野木瓜中齐墩果酸及熊果酸展开研究，具有非常重要的科学意义。
[0004]目前在采用测定三萜皂苷所常用的比色法、分光光度法及薄层扫描法对木瓜饮片中的齐墩果酸与熊果酸进行定量时，由于两者几乎是共生共存于天然产物当中，并且是一对差向异构体，结构相似，极性差别小，因而很容易产生误差，造成定量困难。
【发明内容】
:
[0005]本发明所解决的技术问题在于针对现有采用测定三萜皂苷所常用的比色法、分光光度法及薄层扫描法对木瓜饮片中的齐墩果酸与熊果酸进行定量时所存在的不足之处而提供一种木瓜饮片的检测方法，该检测方法完善了药典木瓜饮片含量检测方法中的条件，保证了含量测定的准确性，同时，确保了所要求的分离度，以便检验工作有效开展。
[0006]本发明拟从它们结构当中孤立的双键，会在低波长处产生紫外吸收的特点着手，建立起同时测定木瓜中齐墩果酸、熊果酸的HPLC法，优化了药典中木瓜饮片含量检测的色谱条件。
[0007]本发明所解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现:
[0008]木瓜饮片检测方法，其测量时的色谱条件为色谱柱:C18柱；流动相为甲醇-0.lmol/L磷酸二氢钾溶液(90:10);流速1.0mL/min ;检测波长21Onm ;柱温；室温；进样量20 u L0
[0009]由于采用了如上的方法，可以保证检测木瓜饮片的分离度与重复性，对数据分析和产品的研究有很大帮助，减小测量带来误差，特别适合实验室对其进行的检测工作。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1为齐墩果酸与熊果酸的气相色谱图。
[0011]图2为齐墩果酸的标准曲线图。
[0012]图3为熊果酸的的标准曲线图。
【具体实施方式】
[0013]本发明拟从它们结构当中孤立的双键，会在低波长处产生紫外吸收的特点着手，建立起同时测定木瓜中齐墩果酸、熊果酸的HPLC法，优化了药典中木瓜饮片含量检测的色谱条件。
[0014]本发明的木瓜饮片的检测方法，其测量时色谱条件为色谱柱为:C18柱；流动相为甲醇-0.lmol/L磷酸二氢钾溶液(90: 10);流速1.0mL/min ;检测波长210nm ;柱温:室温；进样量20 μ L。
[0015]以下通过具体实施例来予以验证:
[0016]1.主要仪器
[0017]AilengllOO高效液相色谱仪:包括高压输液泵，紫外可见光检测器，柱温箱；旋转蒸发仪；梅特勒分析天平；超纯水制备仪；超声波清洗器等。
[0018]2.原料与试剂
[0019]木瓜饮片，由上海华宇药业有限公司提供1010008-13041101;齐墩果酸、熊果酸标准品(纯度大于98%，中国药品生物制品检定所提供)；甲醇(色谱纯默克提供)，其它试剂均为国产分析纯。
[0020]3.方法
[0021]3.1.色谱条件
[0022]C18柱；流动相为甲醇-0.lmol/L磷酸二氢钾溶液(90: 10);流速1.0mL/min ;检测波长210nm ;柱温:室温；进样量20 μ L。
[0023]3.2.齐墩果酸与熊果酸特征峰分离度测定在HPLC法中，分离度R大于或等于
1.5，是准确定量的前提。
[0024]3.3.齐壤果酸标品溶液制备
[0025]精密称取减压干燥至恒重的齐墩果酸标品4.0Omg,至IOmL容量瓶，加甲醇溶解稀释至刻度，得浓度为0.40mg/mL的对照品溶液。再分别精密吸取该液0.50、1.00、1.50、
2.00,2.50mL,于IOmL容量瓶中，加甲醇定容，得浓度梯度为0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL的齐墩果酸标品溶液。
[0026]3.4.熊果酸标品溶液制备
[0027]精密称取减压干燥至恒重的熊果酸标品12.0Omg,至IOmL容量瓶，加甲醇溶解稀释至刻度，得浓度为1.20mg/mL的对照品溶液。再分别精密吸取该液0.50、1.00、1.50、
2.00、2.50mL，于IOmL容量瓶中，加甲醇定容，得浓度梯度为0.06、0.12、0.18、0.24、
0.30mg/mL的熊果酸标品溶液。
[0028]3.5.样品溶液的制备
[0029]取木瓜饮片约0.5g，精密称定分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜(0.45 μ m)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
[0030]4.结果与分析
[0031]4.1.分离度测定结果
[0032]将3.3中浓度为0.40mg/mL的齐墩果酸对照品溶液与3.4中浓度为0.20mg/mL的熊果酸对照品溶液混合，以3.1色谱条件测定，得此混合溶液中齐墩果酸保留时间t=14.888min,对称因子=0.99 ;熊果酸保留时间t=15.391min,对称因子=1.01。经计算,分离度R=1.82，该值大于1.5 (参见图1)，说明:在本色谱条件下，齐墩果酸与熊果酸分离效果良好，能够进行准确定量。
[0033]4.2.标准曲线绘制
[0034]分别准确吸取3.3及3.4中，不同浓度梯度的齐墩果酸、熊果酸标品溶液各20 μ L，进样检测，以峰面积为横坐标，标品浓度为纵坐标作齐墩果酸、熊果酸标准曲线，齐墩果酸回归方程y=3.81424X 10_8x - 0.00240239,相关系数r=0.9994，熊果酸回归方程y=3.99319X 10-8χ-0.00057，相关系数r=0.9988，说明:齐墩果酸标品溶液浓在0.02~
0.10mg/mL范围内线性关系良好(参见图2)，熊果酸对照品溶液浓度在0.06~0.30mg/mL范围内线性关系良好(参见图3)。
[0035]4.3.样品含量测定
[0036]按照3.5的样品溶液配制方法配制平行样品1、样品2，并分别对其采用3.1中色谱条件进行检测，并根据所得样品溶液浓度，计算样品含量，结果见表1。
[0037]表1
[0038]
【权利要求】
1.木瓜饮片检测方法，其特征在于，测量时的色谱条件:色谱柱为C18柱；流动相为甲醇-0.lmol/L磷酸二氢钾溶液(90:10);流速1.0mL/min ;检测波长21Onm ;柱温:室温；进样量20 u L0
【文档编号】G01N30/02GK103645257SQ201310680281
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年12月10日 优先权日:2013年12月10日
【发明者】李彤, 王琼, 薛亮, 蔡京 申请人:上海景峰制药股份有限公司